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纳米混悬剂（Nanosuspensions，NPs）作为一种可提                紫外检测器；检测波长：340 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0
        高难溶性药物溶解度的制剂形式，其优势不仅在于可提                            mL/min；进样量：20 µL。
        高口服药物的生物利用度，同时还可提高眼部、鼻部、皮                           2.1.2 AP 标准溶液的配制          精密称取 AP 对照品 4.89
        肤给药等制剂的生物利用度并降低用药风险，近几年来                            mg，溶于适量甲醇中，制成质量浓度为 1 mg/mL 的标准
        已成为制剂学研究的热点之一              [1-4] 。有研究指出，将难溶         溶液。用甲醇将上述标准溶液逐级稀释成不同质量浓
        性抗肿瘤中药单体制成 NPs 可显著提高药物的抗肿瘤                          度的系列标准溶液，于4 ℃冰箱中保存，备用。
             [5]
        效果 。较其他类型纳米制剂而言，NPs 具有制备方法                          2.1.3  血浆样品的处理         取小鼠空白血浆 100 μL 至离
        简单、辅料用量极少的优点，可降低辅料所致毒副反应                            心管中，加入甲醇500 μL，涡旋振荡，混匀，以8 000 r/min
                                      [6]
        发生的风险，并适用于大工业生产 。目前，NPs常用的                          离心 5 min，吸取上清液，以氮气流吹干，残渣用甲醇
                                   [7]
        制备方法包括一步熔融乳化法 、溶剂蒸发超声法 和介                           100 μL 复溶，以 10 000 r/min 离心 5 min，吸取上清液适
                                                   [8]
                [9]
        质研磨法 等，根据药物理化性质的不同，选择适宜的制                           量，进行HPLC定量分析。
        备方法并深入研究相应NPs的药动学、药效学特征可为                           2.1.4  组织样品的处理         将小鼠完整的心、肝、脾、肺、
        新型制剂的研发提供理论基础。                                      肾、脑取出后，以生理盐水洗净，用滤纸吸干组织表面残
            近年研究发现，芹菜素（Apigenin，AP）具有较强的                    留液体，精密称定质量后，置于离心管中，按质量比加入
        抗肿瘤活性，其主要机制包括抑制肿瘤细胞增殖并促进                            3倍量的生理盐水，用高速分散机将其分散均匀，即得组
                                      [11]
               [10]
        其凋亡 、抑制细胞迁移和侵袭 、抑制细胞信号转                             织匀浆液。精密吸取上述组织匀浆液 200 μL 至 1.5
                                 [14]
        导 [12-13] 以及逆转细胞耐药性 等；同时经研究证实，AP                    mL 离心管中，加入甲醇 1 000 μL，涡旋振荡沉淀蛋
        还具有较强的抗氧化性和降尿酸活性 。但是该化合                             白，以 8 000 r/min 离心 5 min，吸取上清液，以氮气流吹
                                          [15]
                                                            干，残渣用甲醇200 μL复溶，以10 000 r/min离心5 min，
        物在水和大多数有机溶剂中的溶解度都极差，导致其生
                                                            吸取上清液适量，进行HPLC定量分析。
        物利用度较低、作用强度较弱 。因此，为解决其溶解
                                   [16]
                                                            2.1.5  专属性考察       取空白血浆以及空白心、肝、脾、
        度 低 的 问 题 ，本 研 究 制 备 了 芹 菜 素 纳 米 混 悬 剂
                                                            肺、肾、脑组织样品，空白血浆/组织+AP 标准溶液（10.0
        （AP-NPs），并初步探讨了该制剂在小鼠体内的分布情况
                                                            μg/mL）以及小鼠灌胃给药后 0.25 h 的血浆/组织样品各
        和靶向特性，旨在为AP-NPs的临床应用提供参考。
                                                            适量，分别按“2.1.3”或“2.1.4”项下方法处理后，再按
        1 材料
                                                           “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果，血
        1.1  仪器
                                                            浆及各组织中的其他成分均不干扰 AP 的测定，色谱峰
            2695 型高效液相色谱（HPLC）仪（美国 Waters 公
                                                            分离较好，AP的保留时间约为6 min，详见图1～图3。
        司）；64R 型低温高速离心机（德国 Beckman 公司）；
                                                            2.1.6  标准曲线和定量下限考察             精密吸取小鼠空白
        BT25S 型电子天平（德国 Sartorius 公司）；HSC-12B 型水
                                                            血浆100 μL和空白组织样品200 μL，分别加入相应质量
        浴氮吹仪（上海旦鼎国际贸易有限公司）；QL-901 Vortex
                                                            浓度的AP系列标准溶液各100 μL，配制成AP质量浓度
        型涡旋混合器（江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公
                                                            分别均为 0.1、0.5、2.5、5.0、10.0、25.0 μg/mL 的血浆标准
        司）；T18型高速分散机（德国IKA公司）；Scientz-ⅡD型
                                                            样品和组织匀浆标准样品，分别按“2.1.3”或“2.1.4”项下
        超声波细胞破碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。                           方法处理后，再按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录
        1.2  药品与试剂
                                                            色谱图。以待测物质量浓度（c，μg/mL）为横坐标、峰面
            AP 对照品（批号：2015109，纯度：≥99％）、AP 原料                积（A）为纵坐标进行线性回归，结果见表1。
        药（批号：XC2014122，纯度：≥98％）均购自西安小草植                     2.1.7  精密度与准确度试验           按“2.1.6”项下方法配制
        物科技有限公司；聚乙烯吡咯烷酮（PVP，天津博迪化工                          定量下限质量浓度（0.1 μg/mL）的血浆/组织样品以及
        有限公司）；水溶性维生素 E（TPGS，美国 Sigma 公司）；                   低、中、高质量浓度（0.2、5.0、20.0 μg/mL）的质控血浆/组
        甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。                             织样品，分别按“2.1.3”或“2.1.4”项下方法处理后，再按
        1.3 动物                                             “2.1.1”项下色谱条件进样分析。每质量浓度平行测定6
            清洁级昆明种小鼠，雌雄各半，2月龄，体质量（20±                       次，考察日内精密度；连续测定 3 d，考察日间精密度。
        2）g，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，动物使用                          以实测质量浓度与理论质量浓度进行比较，考察准确
        许可证号：SYXK（黑）2018-007。                               度。结果，精密度与准确度结果符合生物样品定量分析
        2 方法与结果                                             方法指导原则的相关要求 ，结果见表2。
                                                                                  [17]
        2.1 生物样品中AP含量测定方法的建立                                2.1.8  提取回收率试验         按“2.1.6”项下方法配制低、
            采用 HPLC 法检测小鼠血浆及组织样品中 AP 的                      中、高质量浓度（0.2、5.0、20.0 μg/mL）的质控血浆/组织
        含量。                                                 样品，各 6 份，分别按“2.1.3”或“2.1.4”项下方法处理后，
        2.1.1  色谱条件      色谱柱：Shimadzu ODS-SP（250 mm×        再按“2.1.1”项下色谱条件进样分析，记录峰面积（A1 ）；
        4.6 mm，5 µm）；流动相：甲醇-水（70 ∶ 30，V/V）；检测器：             取空白血浆 100 µL 和空白组织样品 200 µL，分别按


        ·458  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4                                   中国药房    2020年第31卷第4期
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