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（PCA）进行综合质量评价，旨在为其质量标准的完善提                          醇20 mL，超声（功率：250 W，频率：40 kHz）提取30 min，
        供参考。                                                经0.45 µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
        1 材料                                                2.1.3  色谱条件      色谱柱：Phenomenex C18 （250 mm×

        1.1 仪器                                              4.60 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.12％甲酸水溶液
            1200型HPLC仪，包括G1322A型在线真空脱气机、                   （B），梯度洗脱（洗脱程序见表 2）；流速：1 mL/min；检测
        G1311A型四元泵、G1329A型自动进样器、G1316A型柱                    波长：260 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 µL。
        温箱、G1315D型二极管阵列检测器、1200 Series色谱工                                  表2 梯度洗脱程序
        作站 B04.01 版（美国 Agilent 公司）；Milli-Q Advantage                 Tab 2  Gradient elution procedure
        A10 型纯水机（美国 Millipore 公司）；BT-125D 型十万分              t，min               A，％                   B，％
                                                             0                   5                     95
        之一电子天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限公司]；LK/                         7                   21                    79
        CSJ-20型超声波清洗机（成都老肯科技股份有限公司）。                        10                   22                    78
                                                            12                   23                    77
        1.2 试剂
                                                            13                   23                    77
            大豆苷元对照品（批号：JL22382，纯度：≥98％）、染                   15                   42                    58
                                                            25                   60                    40
        料木素对照品（批号：MB2170，纯度：≥98％）均购自广
        州 菲 博 生 物 科 技 有 限 公 司 ；大 豆 苷 对 照 品（批 号 ：            2.1.4  精密度试验       取“2.1.2”项下供试品溶液（编号：
                                                            S8）适量，按“2.1.3”项下色谱条件连续进样测定6次，以
        111738-201603，纯度：≥93.3％）、染料木苷对照品（批
                                                            大豆苷的保留时间和峰面积为参照，记录各共有峰的相
        号：111709-201702，纯度：99.9％）均购自中国食品药品
                                                            对保留时间和相对峰面积。结果，19个共有峰相对保留
        检定研究院；黄豆黄苷对照品（批号：J04044AS，纯度：≥
                                                            时间的RSD均小于1％（n＝6），相对峰面积的RSD均小
        98％）购自大连美仑生物技术有限公司；甲酸、乙腈为色
                                                            于5％（n＝6），表明本方法精密度良好。
        谱纯，甲醇为分析纯，水为超纯水。
                                                            2.1.5  稳定性试验       取“2.1.2”项下供试品溶液（编号：
        1.3  药材
                                                            S8）适量，分别于室温避光放置0、2、4、6、8、10、12 h时按
            12 批黑豆药材样品（编号：S1～S12）均由康美药业
                                                           “2.1.3”项下色谱条件进样测定，以大豆苷的保留时间和
        股份有限公司提供，经广州中医药大学第二临床医学院
                                                            峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰
        黄志海主任中药师鉴定为豆科植物大豆[G. max（L.）
                                                            面积。结果，19 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小于
        Merr.]的干燥成熟种子。黑豆药材样品信息来源见表1。
                                                            1％（n＝7），相对峰面积的 RSD 均小于 5％（n＝7），表明
                      表1   黑豆药材样品信息
                                                            供试品溶液于室温下放置12 h内稳定性良好。
             Tab 1  Information of Sojae Semen Nigrum
                                                            2.1.6  重复性试验      取黑豆药材样品（编号：S8）粉末 2
        编号      产地          批号   编号      产地         批号
        S1  浙江省平湖市新仓镇     2018040701  S7  黑龙江省佳木斯市汤原县  2018040501  g，共 6 份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按
        S2  浙江省兰溪市马涧镇     2018040702  S8  黑龙江省绥化市庆安县  2018040502  “2.1.3”项下色谱条件进样测定，以大豆苷的保留时间和
        S3  浙江省绍兴市上虞区永和镇  2018040703  S9  黑龙江省黑河市北安市  2018040503  峰面积为参照，记录各共有峰的相对保留时间和相对峰
        S4  安徽省滁州市乌衣镇     2018040601  S10  江苏省宿迁市宿豫区  2018040402
        S5  安徽省宿州市丁湖镇     2018040602  S11  江苏省高邮市周山镇  2018040403  面积。结果，19 个共有峰相对保留时间的 RSD 均小于
        S6  安徽省安庆市怀宁县     2018040603  S12  江苏省泰兴市古溪镇  2018040404
                                                            1％（n＝6），相对峰面积的 RSD 均小于 5％（n＝6），表明
        2 方法与结果                                             本方法重复性良好。

        2.1 指纹图谱的建立                                         2.1.7 HPLC 指纹图谱的生成          取 12 批黑豆药材样品
        2.1.1  混合对照品溶液的制备            分别取大豆苷、大豆苷             适量，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1.3”项
        元、黄豆黄苷、染料木素、染料木苷对照品各 4 mg，精密                        下色谱条件进样测定，采用《中药色谱指纹图谱相似度
        称定，置于 10 mL 棕色量瓶中，加 70％甲醇制成质量浓                      评价系统》（2012A 版）进行分析，得 HPLC 指纹图谱，详
        度均为0.4 mg/mL的单一对照品溶液。取各单一对照品                        见图1、图2。
        溶液适量，置于10 mL棕色量瓶中，加70％甲醇定容，摇                        2.1.8  相似度评价      采用《中药色谱指纹图谱相似度评
        匀，即得上述 5 种成分质量浓度均为 4 μg/mL 的混合对                     价系统》（2012A版），以黑豆药材样品的HPLC对照指纹
        照品溶液。                                               图谱为对照，进行整体相似度评价。结果显示，12 批黑
        2.1.2  供试品溶液的制备          取黑豆药材样品粉末（过80              豆药材样品的相似度均大于0.94，提示黑豆药材样品的
        目筛）2 g，精密称定，置于20 mL棕色量瓶中，加70％甲                      化学成分一致性较好，详见表3。


        ·430  ·  China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4                                   中国药房    2020年第31卷第4期
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