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独溶解后再逐滴加入，葡萄糖需临用前加入），然后用水 乙腈 200 µL 复溶，超声 5 min，以 12 000 r/min 再次离心
定容至1 L，即得pH为7.4的Tyrode缓冲液，备用。 10 min，取上清液适量进行UPLC-MS/MS分析。
2.1.2 不同粒径天麻粉供试液 分别称取天麻细粉、极 2.5 方法学考察
细粉、超微粉适量，加入 Tyrode 缓冲液超声（功率：250 2.5.1 专属性 取空白肠液、空白肠液+混合对照品（天
W，频率：80 Hz，下同）处理30 min，使其均匀分散以形成 麻素、巴利森苷 A、巴利森苷 B、巴利森苷 C 质量浓度分
混悬液，即得质量浓度均分别为2.5、5、10 g/L（以生药量 别为 0.99、1.25、1.865、1.206 μg/mL）、天麻超微粉循环
计，下同）的不同粒径天麻粉供试液，备用。 90 min时的肠吸收样品液各适量，按“2.4”项下方法处理
2.1.3 混合对照品溶液 分别精密称取天麻素、巴利森 （空白肠液不加内标）后，再按“2.2”“2.3”项下色谱与质
苷 A、巴利森苷 B、巴利森苷 C 对照品适量，加甲醇溶解 谱条件进样分析，记录色谱图，见图 1。由图 1 可见，天
制得天麻素（1.052 g/L）、巴利森苷A（1.001 g/L）、巴利森 麻素等4种待测物及内标的分离度良好，且空白肠液不
苷 B（0.994 g/L）、巴利森苷 C（0.804 g/L）单一贮备液。 无扰待测物的定量分析。
分别精密量取上述单一贮备液各适量，置于同一量瓶， 100 100 5
于 37 ℃下以氮气流吹干，残渣用 Tyrode 缓冲液溶解并 50 50
0 0
稀释至所需浓度，即得系列混合对照品溶液。上述溶液 100 100 3
％ 50 ％ 50 4
均置于－20 ℃冰箱保存，备用。 相对丰度， 0 相对丰度， 0
2.1.4 内标溶液 精密称取葛根素对照品适量，用甲醇 100 100 2
50
50
溶解并定容至10 mL量瓶中，得质量浓度为1.054 g/L的 100 0 100 0 1
内标贮备液。取上述内标贮备液适量至50 mL量瓶中， 50 50
0 0
用甲醇定容，即得质量浓度为 20 μg/mL 的内标溶液， 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
时间，min 时间，min
置于－20 ℃冰箱保存，备用。 A.空白肠液 B.空白肠液+混合对照品
2.1.5 空白肠液 取 37 ℃ Tyrode 缓冲液，按后续方法 100
5
进行离体外翻肠囊试验，循环 1 h，即得空白肠液。 50
0
2.2 色谱条件 100 3
％ 50 4
色 谱 柱 ：Phenomenex Synergi Hydro-RP 100（100 相对丰度， 0
mm×20 mm，2.5 μm）；流 动 相 ：0.1％ 甲 酸 乙 腈 溶 液 100 2
50
（A）-0.1％ 甲 酸 水 溶 液（B），梯 度 洗 脱（0～2 min， 0
100 1
5％A→20％A；2～5 min，20％A→30％A；5～5.1 min， 50
30％A→5％ A；5.1～7 min，5％ A）；柱 温 ：40 ℃ ；流 0 0 1 2 3 4 5
速：0.3 mL/min；进样量：10 μL。 时间，min
C.天麻超微粉90 min时的肠吸收样品液
2.3 质谱条件
注：1.天麻素；2.巴利森苷A；3.巴利森苷B；4.巴利森苷C；5.内标
电离源：ESI；鞘气流量：57.6 Arb（1 Arb＝0.3 L/min， Note：1. gastrodin；2. parishin A；3. parishin B；4. parishin C；5.
下同）；辅助气流量：4 Arb；正离子喷雾电压：3 500 V，负 internal standard
离子喷雾电压 4 900 V；毛细管温度：330 ℃；碰撞气：氩 图1 典型SRM图
气[1.5 mTorr（1 mTorr＝133.322 mPa）]；采用选择反应监 Fig 1 Typical SRM chromatograms
测（SRM）模式扫描，用于定量分析的离子对分别为 m/z 2.5.2 标准曲线及定量下限、最低检测限考察 按
（+）304.05→107.11（天麻素）、m/z（－）995.09→727.11 “2.1.3”项下方法配制天麻素质量浓度分别为 0.030 9、
（巴利森苷 A）、m/z（－）727.09→423.07（巴利森苷 B）、 0.124、0.495、0.99、1.98、3.95、7.90、15.78、63.12 μg/mL，
m/z（－）727.09→423.07（巴利森苷 C）、m/z（－）415.05→ 巴 利 森 苷 A 质 量 浓 度 分 别 为 0.039 1、0.156、0.312、
267.00（内标）（碰撞电压分别为 12、24、25、24、32 V，射 0.625、1.25、2.50、5.01、10.01、40.04 μg/mL，巴利森苷 B
频电压分别为84、298、298、298、224 V）。 质 量 浓 度 分 别 为 0.058 5、0.233、0.466、0.933、1.865、
2.4 样品处理 3.73、7.46、14.92、29.84 μg/mL，巴利森苷 C 质量浓度分
取肠液样品 200 µL，加入 20 μg/mL 内标溶液 20 别 为 0.037 7、0.151、0.302、0.603、1.206、2.413、4.825、
µL，涡旋混合2 min，加入水饱和的正丁醇500 μL，萃取2 9.65、19.30 μg/mL 的系列混合对照品溶液，按“2.4”项下
次，涡旋混合2 min，超声处理5 min，以12 000 r/min离心 方法处理后，再按“2.2”“2.3”项下色谱与质谱条件进样
5 min；取上清液，于37 ℃下以氮气流吹干，残渣用95％ 分析，记录色谱图。以各待测物质量浓度（x，μg/mL）为

·416 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 4 中国药房 2020年第31卷第4期