Page 51 - 2020年2月第31卷第3期

100 确度。结果，高、中、低质量浓度样品溶液的 L-Dopa、

％ L-Tyr、L-Trp的日内精密度RSD均未超过2.51％，准确度
相对丰度， 在 93％～100％之间（n＝6），符合生物样品定量分析的
相关要求。精密度、准确度结果见表4。
表4 精密度、准确度及基质效应测定结果
0
0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8 Tab 4 Results of precision，accuracy and matrix ef-
时间，min
A.空白血清 fects tests
100 成分 质量浓度，ng/mL 精密度RSD，％ 准确度，％ 基质效应，％ RSD，％
L-Dopa 1 000 1.67 98.8 95.6 2.25
％ 2 000 1.72 99.2 96.1 2.05
相对丰度， 4 000 2.51 99.0 100.1 2.29
L-Dopa
L-Tyr L-Trp L-Tyr 1 000 1.56 93.0 95.2 1.66
98.3
96.4
2 000
1.73
2.65
0 4 000 2.27 100.0 99.6 2.99
0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8 L-Trp 1 000 2.05 97.5 96.3 3.25
时间，min
B.空白血清+混合对照品溶液 2 000 1.99 99.1 97.6 2.26
4 000 1.71 98.0 95.1 1.94
100
2.5.7 稳定性试验 同“2.5.6”项下方法“取空白血清
％
相对丰度， L-Dopa L-Trp ……200 μL初始流动相复溶”，分别制成L-Dopa、L-Tyr、
L-Trp 的高、中、低质量浓度（4 000、2 000、1 000 ng/mL）
L-Tyr
的血清样品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、12、24 h
0
0.4 0.8 1.2 1.6 2.0 2.4 2.8 后，按“2.5.1”项下色谱与质谱条件进样分析。结果，高、
时间，min
C.末次灌胃给药后大鼠的血清样品 中、低质量浓度样品溶液的 L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 峰面积
图2 样品总离子流图 的 RSD 均小于 2.5％（n＝6），表明各被测成分 24 h 稳定
Fig 2 TIC of samples 性良好。
ng/mL）、L-Trp（15.625、62.5、250、1 000、4 000、16 000 2.5.8 基质效应 同“2.5.6”项下方法“取空白血清……
ng/mL）的系列溶液，按“2.5.1”项下色谱与质谱条件进样 200 μL初始流动相复溶”，分别制成L-Dopa、L-Tyr、L-Trp
分析。以L-Dopa、L-Tyr、L-Trp的质量浓度为横坐标（x）、 的高、中、低质量浓度（4 000、2 000、1 000 ng/mL）的血清
峰面积为纵坐标（y）进行线性回归；另取“2.5.3”项下各 样品溶液，按“2.5.1”项下色谱与质谱条件进样分析，记
对照品溶液适量，以甲醇倍比稀释后测定，以信噪比为 录峰面积 A；另用初始流动相代替空白血清，配制相同
3∶1、10∶1计算检测限、定量限，结果见表3。 质量浓度的样品溶液，按“2.5.1”项下色谱与质谱条件进
表 3 L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 的线性范围、检测限及定 样分析，记录峰面积 B。按公式计算基质效应：A/B×
量限 100％ 。 结 果 ，L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 的 基 质 效 应 在
95.1％～100.1％之间，RSD 均未超过 3.25％（n＝6），符
Tab 3 Linear range，detection limit and quantitation
合生物样品定量分析的相关要求，结果见表4。
limits of L-Dopa，L-Tyr and L-Trp
2.5.9 含量测定 末次给药后，取各组大鼠血清，按
成分 回归方程 r 线性范围，ng/mL 检测限，ng/mL 定量限，ng/mL
L-Dopa y＝0.292 7x+13.329 0.999 9 31.25～32 000 6.250 15.625 “2.5.2”项下方法处理后，按“2.5.1”项下色谱与质谱条件
L-Tyr y＝1.921 5x+24.347 0.999 1 31.25～32 000 5.625 18.75 进样分析，计算各组大鼠血清中 L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 的
L-Trp y＝1.896 3x+11.931 0.999 7 15.625～16 000 3.125 10.00
含量，结果见表5。
2.5.6 精密度试验 取空白血清200 μL，加入800 μL甲
表5 各组大鼠血清样品分析结果（x±±s，n＝10，ng/mL）
醇，涡旋 2 min，4 ℃ 13 000 r/min 离心 10 min，定量取
Tab 5 Analytical results of serum samples in rats of
800 μL 的上清液，精密加入不同质量浓度的 L-Dopa、
each group（x±±s，n＝10，ng/mL）
L-Tyr、L-Trp 对照品溶液 100 μL，共同氮气吹干，200 μL
组别 L-Dopa L-Tyr L-Trp
初始流动相复溶，分别制成 L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 的高、 空白组 35.80±2.21 6 824.5±468.07 13 810.5±2 082.04
中、低质量浓度（4 000、2 000、1 000 ng/mL）的血清样品 胡桃醌低剂量组 38.89±3.96 7 232.6±401.74 ＊ 12 030.8±890.47 ＊
胡桃醌中剂量组 45.09±4.01 ＊＊ 7 820.3±325.60 ＊＊ 9 936.8±630.27 ＊＊
溶液，以“2.5.1”项下色谱与质谱条件连续进样6次，记录 胡桃醌高剂量组 50.87±3.87 ＊＊ 8 393.2±501.69 ＊＊ 7 994.1±484.23 ＊＊
峰面积，计算日内精密度，以 L-Dopa、L-Tyr、L-Trp 峰面 注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
积计算相应质量浓度，其与真实质量浓度的比值计算准 Note：vs. blank group，P＜0.05， P＜0.01
＊
＊＊
中国药房 2020年第31卷第3期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 3 ·301 ·