Page 49 - 2020年2月第31卷第3期

contents of L-Trp were decreased significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：Juglone has an effect on the general
behavior，brain index and brain tissue morphology of rats. It may affect the brain function of rats by increasing the contents of
L-Dopa and L-Tyr in serum and decreasing the contents of L-Trp.
KEYWORDS Juglone；Brain tissue；Biomarker；UPLC-MRM-MS；Content determination

胡桃楸（Juglans mandshurica）作为一种具有潜在药 度40％～70％条件下饲养，期间自由摄食、饮水。
用价值的中药，在我国民间可用于治疗肿瘤和减轻肿瘤 2 方法与结果
引起的疼痛，在临床上也有诸多应用 [1-2] 。胡桃醌是胡桃 2.1 分组、给药
楸中重要的活性成分，又名 5-羟基-1，4-萘醌 [3-4] 。近年 取40只大鼠，随机分为空白组和胡桃醌高、中、低剂
来关于胡桃醌体外抗肿瘤的研究越来越多，研究发现， 量组（34.832、17.416、8.708 mg/kg，剂量依据预试验结果
胡桃醌具有抗胃癌、肝癌及肺癌等多种肿瘤的活性，但 确定，开始出现毒性症状的剂量为中剂量，再以此确定
是由于其具有一定的毒性，且难溶于水，使得其安全性 高、低剂量），每组 10 只，每天灌胃给药 1 次，灌胃体积
和疗效受到影响 [5-6] 。 为 2 mL/100 g，空白组给予等体积纯净水，连续给药 4
本课题组前期基于非靶向代谢组学研究，发现胡桃 周。给药期间大鼠自由摄食、饮水。
醌可明显升高正常大鼠血清中左旋多巴（L-Dopa）、L-酪 2.2 各组大鼠行为学观察
氨酸（L-Tyr）水平，同时降低 L-色氨酸（L-Trp）水平，且 对各组大鼠一般行为学进行观察记录。结果，与空
这 3种生物标志物与脑组织正常生理功能密切相关 [7-9] 。 白组比较，胡桃醌各给药组大鼠行为活动均有明显差
基于此，笔者首先研究胡桃醌作用于大鼠后，其脑指数、 异：灌胃初期，大鼠出现耸毛、活动减少或不动、不食等
脑组织病理切片的变化；然后利用超高效液相色谱-多 现象；灌胃后期，胡桃醌高、中剂量组大鼠逐渐出现呆
反应检测质谱（UPLC-MRM-MS）法，对上述 3 种生物标 顿、倦怠眯眼、精神不佳、躯体瘫软、四肢明显无力，同时
志物进行定量分析，明确胡桃醌对3种生物标志物的影 伴有毛色干枯等现象。
响，从生物标志物层面判断胡桃醌的脑毒性，为其开发 2.3 各组大鼠体质量及脑指数的测定
为抗肿瘤新药的安全性评价奠定基础。 末次灌胃给药后，称量大鼠的体质量；处死大鼠，取
1 材料 出脑组织，生理盐水清洗并用滤纸吸干多余水分，计算
1.1 仪器 脑指数（脑指数＝脑质量/体质量×100％）。采用 SPSS
ACQUITY 型液相色谱系统、XEVO TSQ 型三重串 17.0软件对实验数据进行单因素方差分析，数据以x±s
联四级杆MS仪，配有电喷雾（ESI）离子源以及Masslynx 表示，组间比较采用 t 检验，P＜0.05 表示差异有统计学
数据处理软件（美国Waters公司）；DW-86L959型超低温 意义。各组大鼠体质量及脑指数的测定结果见表1。
冰箱（青岛海尔集团有限公司）；BSA224S-CW型分析天 表 1 各组大鼠体质量及脑指数的测定结果（x±±s，n＝
平（赛多利斯科学仪器北京有限公司）；ST16R型低温高 10）
速离心机（美国赛默飞公司）；KD-BM 型生物组织包埋 Tab1 Body weight and brain index of rats in each
机（金华科迪仪器设备有限公司）；RM2235 型生物组织 group（x±±s，n＝10）
切片机（德国 Lecia 公司）；DP72 型倒置显微镜（日本 组别 剂量，mg/kg 体质量，g 脑质量，g 脑指数，％
Olympus公司）。 空白组 361.4±13.09 1.81±0.069 5.03±0.596
1.2 试剂 胡桃醌低剂量组 8.708 320.0±19.76 ＊＊ 1.82±0.113 5.78±0.070
胡桃醌中剂量组 17.416 317.8±8.47 ＊＊ 1.80±0.047 5.60±0.389
胡桃醌（成都瑞芬思生物科技有限公司，批号：H- 胡桃醌高剂量组 34.832 300.0±19.90 ＊＊ 1.83±0.121 6.03±0.794 ＊
075-131230，纯度：＞98％）；L-Dopa（批号：LRAA9068， 注：与空白组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
纯度：≥99.5％）、L-Tyr（批号：SLBN0617V，纯度：≥ Note：vs. blank group，P＜0.05， P＜0.01
＊＊
＊
99.5％）、L-Trp（批号：BCBR1025V，纯度：≥99.5％）对照 由表1可知，与空白组比较，胡桃醌高、中、低剂量组
品均购自美国Sigma公司；甲醇、乙腈均为色谱纯；水为 大鼠体质量显著下降（P＜0.01），胡桃醌高剂量组大鼠
纯净水。 脑指数显著升高（P＜0.05）。
1.3 动物 2.4 各组大鼠脑组织病理学观察
SPF级Wistar大鼠，雄性，体质量（200±20）g，由北 各组大鼠进行脑指数测定实验后，将大鼠大脑、小
京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物生产许可 脑组织于 10％中性甲醛（pH 7.2）固定、组织修切、石蜡
证号：SCXK（京）2016-0011。动物于室温 22～24 ℃、湿 包埋、常规切片、苏木精-伊红（HE）染色、酒精梯度脱水、

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