Page 66 - 2020年1月第31卷第2期

表 5 18 批广金钱草药材多糖中各单糖的含量（n＝3， 精密称取“2.2.2”项下广金钱草粗多糖 20 mg，加水
mg/g） 400 μL使溶解，得粗多糖贮备液。分别量取上述贮备液
Tab 5 The contents of monosaccharides in polysac- 各适量，加水稀释，制得质量浓度分别为 0.50、1.00、
charide from 18 batches of D. styracifolium 1.50、2.00、2.50、4.00 mg/mL的多糖供试品溶液。
（n＝3，mg/g） 2.5.3 测定方法及结果
编号 鼠李糖 半乳糖醛酸 葡萄糖 半乳糖 阿拉伯糖 精密吸取“2.5.1”“2.5.2”项下的阿卡波糖对照品系
S1 0.471 1.379 3.407 1.194 0.566 列溶液和供试品溶液各 10 μL，置于 96 孔板中，加入
S2 0.585 1.935 3.932 2.701 0.825 PBS 60 μL，再加入2 U/mL α-葡萄糖苷酶水溶液 10 μL，
S3 2.077 4.255 17.012 6.535 4.103
S4 0.805 1.502 7.561 1.978 1.318 混匀，于 37 ℃孵育 15 min；随后加入 5 mmol/L PNPG
S5 2.092 8.388 11.248 5.519 3.541 水溶液 20 μL，于 37 ℃孵育 20 min，加入 0.1 mol/L 碳酸
S6 0.748 2.278 5.728 1.956 1.751 钠溶液 50 μL 终止反应。以水为空白对照，以阿卡波糖
S7 1.031 4.663 2.560 2.795 2.023
S8 1.087 4.002 5.429 3.520 2.017 为阳性对照，于 405 nm 波长下测定各孔光密度（OD）
S9 1.381 3.288 12.606 4.114 2.848 值，计算抑制率和半数抑制浓度（IC50）：抑制率（％）＝
S10 0.618 1.677 13.349 1.493 1.184 （OD 空白－OD 样品 ）/OD 空白×100％ 。各样品均重复测定 3
[11]
S11 0.631 1.656 13.421 1.706 1.314
S12 1.974 8.919 35.679 6.905 3.749 次，结果见表7。由表7可知，阿卡波糖和广金钱草多糖
S13 1.850 4.243 14.847 5.120 3.815 对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均呈现随着剂量升高而增
S14 1.588 3.708 34.776 4.822 4.158 强的趋势；广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶抑制活性明显
S15 1.449 6.360 12.923 4.086 2.749
S16 1.317 6.339 8.983 4.310 2.744 （IC50＝0.70 mg/mL），且强于阳性对照阿卡波糖（IC50＝
S17 1.437 3.141 8.132 3.770 2.752 7.76 mg/mL）。
S18 1.247 4.798 3.789 3.149 2.346
表7 阿卡波糖和广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶的抑制
表 6 18 批 广 金 钱 草 药 材 多 糖 中 各 单 糖 的 摩 尔 比 作用
（n＝3） Tab 7 Inhibitory effects of acarbose and polysaccha-
Tab 6 The molar ratios of monosaccharides in poly- rides from D. styracifolium on α-glucosidase
saccharide from 18 batches of D. styracifolium 待测物 质量浓度，mg/mL 抑制率（x±s），％ IC50，mg/mL
（n＝3） 阿卡波糖 2.50 25.27±0.26 7.76
5.00 39.69±0.51
编号 鼠李糖 半乳糖醛酸 葡萄糖 半乳糖 阿拉伯糖 7.50 49.76±0.65
S1 1 2.47 6.59 2.31 1.31 10.00 55.66±0.83
S2 1 3.83 2.26 2.47 2.15
15.00 65.08±1.01
S3 1 3.39 4.90 2.40 1.85 20.00 70.50±2.02
S4 1 1.85 5.16 2.39 2.09 25.00 75.15±1.98
S5 1 1.97 19.95 2.77 2.86
广金钱草多糖 0.50 35.34±0.41 0.70
S6 1 2.01 8.32 2.72 2.26 1.00 61.13±0.79
S7 1 2.30 19.69 2.20 2.09 1.50 74.88±1.48
S8 1 1.58 8.55 2.24 1.79 2.00 79.65±2.21
S9 1 2.22 19.39 2.46 2.28 2.50 83.00±2.37
S10 1 1.94 7.31 2.52 2.25 4.00 84.78±2.09
S11 1 3.82 16.47 3.19 2.08
S12 1 3.11 4.55 2.95 2.03 3 讨论
S13 1 2.58 6.98 2.38 2.56 3.1 衍生化条件的优化
S14 1 1.73 7.46 2.87 2.16 本课题组前期以单糖峰面积为评价指标，分别对广
S15 1 4.07 6.22 2.98 2.28
S16 1 2.80 6.13 4.21 1.54 金钱草多糖的酸水解时间、PMP衍生化温度及衍生化时
S17 1 3.25 2.77 2.30 2.06 间进行优化，得到最佳的柱前衍生化条件（即酸水解 8
S18 1 3.71 8.12 2.57 2.07
h，70 ℃下衍生化 1 h）。在 PMP 衍生化过程中，本课题
2.5 广金钱草多糖对α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性 组还比较了磷酸盐（KH2PO4 ）的加入对样品 HPLC 色谱
采用PNPG法进行考察。 图的影响。结果发现，于氯仿萃取前在供试品液中加入
2.5.1 阿卡波糖对照品溶液的制备 适量 KH2PO4溶液，可明显抑制 PMP 峰，改善基线状态，
精密称取阿卡波糖对照品适量，加水溶解并稀释， 有利于单糖的定量分析。
制 得 质 量 浓 度 分 别 为 2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、 3.2 单糖检测方法的选择
20.00、25.00 mg/mL的对照品系列溶液。 生物多糖中单糖组成分析常用的方法包括薄层色
2.5.2 多糖供试品溶液的制备 谱法、气相色谱峰、HPLC 法等。其中，薄层色谱法样品

·188 · China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 2 中国药房 2020年第31卷第2期