Page 69 - 2020年1月第31卷第2期
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Hyp，the mRNA expression of Col- Ⅰ ，TIMP-1 and TIMP-2，as well as the protein expression of MMP-2 and TGF-β 1 were
        increased significantly，while the contents of SOD and GSH-Px were decreased significantly（P＜0.01）. Compared with model
        group，the contents of ALT，AST，HA，IL-6，MDA and Hyp，the mRNA expression of Col-Ⅰ，TIMP-1 and TIMP-2，as well as
        the protein expression of MMP-2 and TGF-β 1 were decreased significantly，while the contents of SOD and GSH-Px were increased
        significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS：TA has a significant protective effect on liver tissue and anti-fibrosis effects
        in liver fibrosis model mice，the mechanism of which may be associated with inhibiting lipid peroxidation and collagen synthesis，
        down-regulating the mRNA expression of Col-Ⅰ，TIMP-1 and TIMP-2 as well as the protein expression of MMP-2 and TGF-β1.
        KEYWORDS    Tadehaginoside；Carbon tetrachloride；Hepatic fibrosis；Lipid peroxidation；Collagen；MMPs；TIMPs；TGF-β 1；
        Mice



            肝纤维化（Hepatic fibrosis）是一种肝脏内纤维结缔               pendorf 公司）；Gel Doc 2000 型凝胶成像分析系统、
        组织异常沉积的病理过程，其并非独立疾病，而是多数                           PAC-300 型低压电泳仪、9700 型聚合酶链反应（PCR）扩
                              [1]
        慢性肝病共同的病理特征 。当肝脏细胞发生坏死或受                           增仪、HD-4N型核酸蛋白测定仪、Model 450型自动酶标
        到炎症刺激时，肝脏中胶原蛋白等细胞外基质的增生与                           仪（美国 Bio-Rad 公司）；5200 型全自动化学发光图像分
        降解可能会失去平衡，从而导致肝纤维化的形成；若纤                           析系统（上海天能科技有限公司）；DY89-Ⅱ型匀浆器（宁
        维化的过程长期持续就会发展成肝硬化，甚至是肝                             波新芝生物科技股份有限公司）。
        癌 。目前，现有西医治疗肝纤维化的方法疗效欠佳，且                          1.2 药品与试剂
          [2]
                           [3]
        复发率高、副作用较大 。因此，寻找和研究缓解甚至逆                              葫芦茶苷对照品（纯度：＞98.0％）由本课题组从葫
        转肝纤维化及肝硬化的有效手段具有重要的临床意义。                           芦茶[T. triquetrum（L.）Ohashi]枝叶中分离所得，临用前
            葫芦茶为豆科植物葫芦茶[Tadehagi triquetrum（L.）            用 2％羧甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液稀释，制成相应
        Ohashi]的枝叶，是广西常用壮药，壮名“Gohuzluzcaz.”，               质量浓度的混悬液；秋水仙碱片（广东彼迪药业有限公
        主要分布于广西、广东、海南等地。该药味苦、涩，性凉，                         司 ，批 号 ：20181001，规 格 ：0.5 mg）；丙 氨 酸 转 氨 酶
        具有清热解毒、利湿退黄、消积杀虫的功效，临床上常用                          （ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、羟脯氨酸（Hyp）、超氧
        于治疗感冒发热、咽喉肿痛、肺痈、黄疸肝炎、肠炎、风湿                         化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物
                             [4]
        关节痛、小儿疳积等症 。葫芦茶苷（3，5-二羟基苯                          酶（GSH-Px）试剂盒均购自南京建成生物工程研究所
        基-6-O-反式-对羟基肉桂酰基-β-D-葡萄吡喃糖苷）是从                     （批号分别为20170801、20170601、20170801、20171221、
        葫芦茶乙醇提取物中分离得到的活性成分 。本课题组                           20170601、20171022）；透明质酸（HA）、白细胞介素 6
                                            [5]
        前期研究发现，葫芦茶苷具有明显的体外抗乙型肝炎病                           （IL-6）试剂盒均购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公
        毒作用，其机制可能与激活 Janus 激酶/信号传导及转录                      司（批号分别为 N20012900、AK0017FEB22012）；First
                                        [6]
        激活因子（JAK/STAT）信号通路有关 ；此外，该化合物                      Strand cDNA Synthesis Kit（美 国 MBI 公 司 ，批 号 ：
        还能通过激活核因子 E2 相关因子 2（Nrf2）信号通路来                     00064478）；2×PCR Taq Mix（日本 Takara 公司，批号：
        减轻有害物质对肝细胞的损害，抑制肝细胞凋亡，对四                           9108）；兔抗小鼠基质金属蛋白酶 2（MMP-2）抗体、兔抗
        氯化碳（CCl4 ）致急性肝损伤模型大鼠具有明显的保护                        小鼠转化生长因子β 1 （TGF-β 1 ）抗体（美国 Abcam 公司，
        作用  [7-9] 。然而，葫芦茶苷对CCl4致小鼠肝纤维化的抑制                  批号分别为 GR105729-1、GR121504-3）；小鼠β-肌动蛋
        作用及其机制尚未见相关报道。为此，本课题组基于前                           白（β-actin）抗体（内参，无锡傲锐东源生物科技有限公
        期研究结果，以 CCl4诱导建立小鼠肝纤维化模型，进一                        司，批号：18AV0315）；山羊抗小鼠免疫球蛋白G（IgG）二
        步探讨葫芦茶苷对肝纤维化的抑制作用及可能机制，以                           抗、山羊抗兔 IgG 二抗（北京中杉金桥生物技术有限公
        期为开发广西特色抗肝纤维化壮药提供实验依据和理                            司，批号分别为 112638、134529）；Trizol 试剂、莫洛尼氏
        论基础。                                               鼠白血病病毒（M-MLV）逆转录酶（美国 Invitrigen 公
        1 材料                                               司）；琼脂糖（西班牙Biowest公司）；十二烷基硫酸钠-聚
        1.1 仪器                                             丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）蛋白上样缓冲液（北京百奥
            722S型可见光分光光度计（上海精密科学仪器有限                       莱博科技有限公司）；增强化学发光法（ECL）显色剂（美
        公司）；TDL-5型台式低速大容量离心机（上海安亭科学                        国Thermo Fisher Scientific公司）；RIPA裂解液（含1％蛋
        仪器厂）；WH-1 型微型旋涡混合器（上海沪西分析仪器                        白酶抑制剂）、BCA蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生
        有限公司）；5810R 型高速冷冻多用途离心机（德国 Ep-                     物技术有限公司）；PCR 扩增引物由上海英骏生物技术


        中国药房    2020年第31卷第2期                                               China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 2  ·191  ·
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