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14.21％（n＝6），均符合相关规定。 或者忽略基质效应，直接采用对照品溶液进行方法学考
2.10.3 冻融稳定性 取同一份已知含量的健康人体尿 察。另一方面，由于仪器灵敏度限制，许多内源性物质
液上清液，分别加入不同质量浓度的混合对照品溶液， 的LC-MS/MS法样品前处理方法烦琐、耗时长、费用高。
分别制成3个质量浓度的溶液，每个浓度制备3份，其中 5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨
5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、缬氨酸、庚二酸、脯氨酸、酪 酸、酪氨酸、色氨酸、酪胺和缬氨酸是人体尿液中的内源
胺的质量浓度分别为20、1 000、2 500 ng/mL，色氨酸、酪 性物质，含量低，与临床多种疾病紧密相关。本文建立
氨酸、马尿酸的质量浓度分别为 2 000、10 000、50 000 了 LC-MS/MS 法测定抑郁症患者尿液中 5-羟基吲哚乙
ng/mL，连续－20 ℃冷冻、室温融化3次后，再按照“2.3” 酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨酸、色氨酸、
项下方法处理后进样分析，计算测定值与标示值的 酪胺和缬氨酸的浓度，采用扣除内源性物质本底的方法
RE。结果显示，待测物的 RE 均＜13.25％（n＝3），均符 进行方法学考察，对于其他生物内源性物质的定量测定
合相关规定。 具有借鉴意义，同时该检测方法样本采用直接沉淀法，
2.10.4 长期稳定性 取同一份已知含量的健康人体尿 操作十分便捷。
液上清液，分别加入不同质量浓度的混合对照品溶液， 综上所述，本方法灵敏度高、重现性好、回收率高，
分别制成3个质量浓度的溶液，每个浓度制备3份，其中 可用于人体尿液中上述9种内源性物质的定量检测。
5-羟基吲哚乙酸、谷氨酰胺、缬氨酸、庚二酸、脯氨酸、酪 参考文献
胺的质量浓度分别为20、1 000、2 500 ng/mL，色氨酸、酪 [ 1 ] WANG C，LIN H，YANG N，et al. Effects of platycodins
氨酸、马尿酸的质量浓度分别为 2 000、10 000、50 000 folium on depression in mice based on a UPLC-Q/TOF-
ng/mL，于－20 ℃下分别冻存1、15、30 d后，再按照“2.3” MS serum assay and hippocampus metabolomics[J]. Mole-
项下方法处理后进样分析，计算测定值与标示值的 cules，2019.DOI：10.3390/molecules24091712.
RE。结果显示，9种待测物的RE均＜14.52％（n＝3），均 [ 2 ] KAMLEH MA，SNOWDEN SG，GRAPOV D，et al. LC-
符合相关规定。 MS metabolomics of psoriasis patients reveals disease se-
2.11 应用 verity-dependent increases in circulating amino acids that
按本文方法分别测定6例抑郁症患者晨尿中的5-羟 are ameliorated by anti-TNFalpha treatment[J]. J Pro-
基吲哚乙酸、谷氨酰胺、马尿酸、庚二酸、脯氨酸、酪氨 teome Res，2015，14（1）：557-566.
酸、色氨酸、酪胺和缬氨酸的含量，结果见表7。 [ 3 ] ZHAO C，GAMMIE SC. Glutamate，GABA，and gluta-
mine are synchronously upregulated in the mouse lateral
表7 抑郁症患者晨尿中9种物质的含量结果（n＝6）
septum during the postpartum period[J]. Brain Res，2014，
Tab 7 Concent of 9 substances in morning urine of de-
1591（1）：53-62.
pression patients（n＝6）
[ 4 ] SALES FA，PACHECO D，BLAIR HT，et al. Identifica-
待测物 抑郁症患者，ng/mL
5-羟基吲哚乙酸 1 906.0±445.4 tion of amino acids associated with skeletal muscle
谷氨酰胺 1 202.0±457.9 growth in late gestation and at weaning in lambs of well-
马尿酸 20 820±2 215 nourished sheep[J]. J Anim Sci，2014，92（11）：5041-5052.
庚二酸 1 038.0±103.9 [ 5 ] OH HA，LEE H，PARK SY，et al. Analysis of plasma met-
脯氨酸 70.27±23.73
酪氨酸 23 860±9 695 abolic profiling and evaluation of the effect of the intake
色氨酸 22 580±5 071 of angelica keiskei using metabolomics and lipidomics[J].
酪胺 243.50±93.14 J Ethnopharmacol，2019.DOI：10.1016/j.jep.2019.112058.
缬氨酸 1 176.0±456.9
[ 6 ] 朱晓伟，高新星，安芳，等.柱前衍生化HPLC-荧光检测法
3 讨论
测定高血压患者尿液中22种游离氨基酸的浓度[J].中国
生物体内内源性物质由于浓度极低、干扰物质多，
药房，2010，21（30）：2823-2825.
一直是定量分析的难点。经典的离子交换法和柱后衍
[ 7 ] 马晓丽，孟磊，巴吐尔，等.两种柱前衍生反相高效液相色
生法也存在一些固有不足，如检测时间长、前处理过程
谱法测定血液和尿液中游离氨基酸[J].氨基酸和生物资
烦琐、条件限制较多、干扰物质多。LC-MS/MS 法具有 源，2012，34（3）：19-21.
普适性好、分析时间短，且可以同时检测多种内源性物 [ 8 ] FILEE R，SCHOOS R，BOEMER F. Evaluation of physio-
质的特点，在内源性物质的体内含量分析中发挥着重要 logical amino acids profiling by tandem mass spectrometry
的作用。然而，现有的测定内源性物质的 LC-MS/MS [J]. JIMD Rep，2014.DOI：10.1007/8904_2013_265.
法，通常需要使用昂贵的不含有内源性物质的特殊介质 [ 9 ] THIANGTHUM S，HEYDEN YV，BUCHBERGER W，

中国药房 2020年第31卷第1期 China Pharmacy 2020 Vol. 31 No. 1 ·97 ·