Page 94 - 2019年11月第30卷第21期

decreasing the phosphorylation of JNK and IRS-1 proteins and increasing the phosphorylation of Akt proteins in pancreatic islets.
KEYWORDS Zicui yin；Type Ⅱ diabetes；Rat；Insulin；JNK；Akt；IRS-1；Blood glucose；Mechanism

糖尿病是一种慢性代谢性疾病，以葡萄糖和脂肪代 1.2 药品与试剂
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谢紊乱、血浆葡萄糖水平升高为基本特征 。糖尿病病 生黄芪、生地、生山药、山茱萸购自于黑龙江中医药
理生理基础为胰岛素分泌不足以及胰岛素的敏感性下 大学附属第一医院，经黑龙江中医药大学肖洪彬教授鉴
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降和胰高血糖素活性升高 。据 2017 年世界糖尿病联 定为真品；生猪胰腺购自于哈尔滨市中盛生猪定点屠宰
盟报道，与 2017 年相比，预计到 2045 年，全球糖尿病患 场；盐酸二甲双胍片（澳大利亚艾华大药厂，批号：
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者将增长 35％左右 。2 型糖尿病的发病机制尚不明 8066462，规格：0.5 g）；胰岛素试剂盒（北京诚林生物科
确，多认为是由胰岛素抵抗和胰岛 B 细胞功能障碍引 技有限公司，批号：201810）；RNase 酶抑制剂（批号：
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起 。胰岛素抵抗是 2 型糖尿病发病的重要机制之一， RP5602）、总 RNA 提取试剂盒（批号：RP1001）、Super
是胰岛素无法有效地调节组织和细胞摄取及利用葡萄 M-MLV 逆转录酶试剂盒（批号：PR6502）均购自北京百
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糖的一种代谢状态 。 泰克生物技术有限公司；十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺
c-Jun 氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK） 凝胶电泳（SDS-PAGE）制备试剂盒（批号：WLA013）、蛋
是哺乳类动物细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信 白提取试剂盒（批号：WLA019）、BCA 蛋白定量试剂盒
号通路的一个亚类，具有干扰胰岛素的作用，能被炎性 （批号：WLA004）、高敏化学发光试剂盒（批号：WLA003）、
细胞因子和游离脂肪酸激活 [6-8] 。JNK 基因在胰岛细胞 JNK 一抗（批号：WL01295）、磷酸化 JNK（p-JNK）一抗
内的表达会增加胰岛细胞的凋亡，阻碍胰岛素合成信 （批号：WL01813）、Akt 一抗（批号：WL0003b）、磷酸化
号，抑制胰岛素的生成，导致机体出现胰岛素抵抗，从而 Akt（p-Akt）一抗（批号：WLp001a）、IRS-1 一抗（批号：
影响机体对葡萄糖的吸收和利用。JNK 信号通路处于 WL03123）、山羊抗兔二抗（批号：WLA023）、β-肌动蛋白
激活状态时，能够降低胰岛素受体底物1（IRS-1）上酪氨 （β-actin）抗体（批号：WL01845）均购自沈阳万类生物科
酸激酶的活性，抑制 IRS-1 的磷酸化，从而抑制 IRS-1 上 技有限公司；磷酸化 IRS-1（p-IRS-1）一抗（美国 CST 科
的酪氨酸残基与蛋白激酶 B（Akt）上的亚基结合、抑制 技有限公司，批号：2385s）。
Akt的激活，最终导致胰岛素信号转导受阻，抑制胰岛素 1.3 动物
和葡萄糖激酶的基因转录和合成 [9-11] 。因此，抑制 JNK SPF级SD大鼠90只，体质量200～220 g，购于哈尔
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的激活对胰岛细胞功能障碍有保护作用 。 滨医科大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK
双胍类降糖药是临床上最为常用的降糖药物，其长 （黑）2016-001。实验动物饲养环境：温度为 20～22 ℃，
期应用所导致的抗药性及副作用限制了其应用 。传 相对湿度为 50％～65％。本研究经黑龙江中医药大学
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统的中药复方制剂，具有不良反应较少的特点，在治疗 实验动物伦理委员会批准，所有研究均符合中国伦理委
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糖尿病方面，具有一定的效果 。滋膵饮方（由生黄芪、 员会有关动物研究指导原则。
生地、生山药、山茱萸、生猪胰腺组成）源自张锡纯的《医 2 方法与结果
学衷中参西录》 。现代研究表明，滋膵饮方加地骨皮、 2.1 滋膵饮的制备
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天花粉、葛根、黄精、川连加味方药对2型糖尿病、无自觉 将生黄芪 15 g，生地 50 g，生山药 50 g，山茱萸 15 g
症状2型糖尿病等均有一定的治疗作用 [16-17] 。相关药理 四味药材加入到10倍量的水中浸泡0.5 h后，煎煮2次，
研究发现，滋膵饮方能够修复糖尿病模型大鼠损伤的胰 合并水煎液，药液浓缩至质量浓度为 0.7 g /mL，于 4 ℃
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岛组织 。基于此，本研究通过建立 2 型糖尿病模型大 保存备用。取猪胰腺 15 g 剔除筋膜组织后，液氮速冻
鼠，研究滋膵饮对其血糖的干预作用及其作用机制，为 后，粉碎成细粉，临用时每 1 mL 药液中加入 0.07 g，混
滋膵饮临床防治糖尿病提供理论基础和科学依据。 匀，备用。
1 材料 2.2 2型糖尿病模型大鼠的制备
1.1 仪器 取 90 只大鼠，适应性饲养 1 周后，随机抽取 10 只作
UV-160PC 紫外分光光度计（日本 Shimadzu 公司）； 为正常组，每笼5只，给予基础饲料喂养，自由饮水。其
NANO 2000 紫外分光光度计（美国 Thermo 公司）；AC- 余大鼠给予高糖高脂饲料（67％大鼠维持饲料+10％猪
CU-CHEK罗氏卓越血糖仪、卓越金锐血糖试纸（德国罗 油+20％蔗糖+2.5％胆固醇+0.5％胆酸钠），每笼5只，自
氏诊断有限公司）；H-2050R超速冷冻离心机（湖南湘仪 由饮水。喂养4周后，除正常组大鼠外，其余大鼠禁食不
实验室仪器开发有限公司）；Exicycler 96 荧光定量聚合 禁水 12 h，单次腹腔注射 1％链脲佐菌素溶液（STZ）35
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酶链式反应（PCR）仪（韩国Bioneer公司）；WD-9413B凝 mg/kg 造模。分别于注射STZ 3、7 d后，禁食不禁水过
胶成像系统（北京六一仪器厂）；ELX-800 酶标仪（美国 夜（约8 h），尾尖取血测定空腹血糖值。当2次空腹血糖
Biotek公司）。 值均大于＞11.1 mmol/L 时，表明造模成功。最后本实

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