Page 88 - 2019年11月第30卷第21期

白鲜碱对小鼠脾淋巴细胞活力的体外抑制作用及机制研究 Δ

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丛 欢 ，杨 莹，包亚男，洪 博，郭丽娜（齐齐哈尔医学院药学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006）

中图分类号 R285；R992 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2019）21-2963-05
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.21.17

摘 要 目的：研究白鲜碱对小鼠脾淋巴细胞活力的体外抑制作用并探讨其可能的作用机制。方法：分离并培养小鼠原代脾淋巴
细胞，以 0（空白对照）、50、100、150 μmol/L 白鲜碱作用细胞 24 h 后，采用 MTT 法检测细胞活力，乳酸脱氢酶（LDH）法检测细胞
LDH释放率，流式细胞术检测细胞早期凋亡率，Hoechst 33342和碘化丙啶（PI）双染法检测细胞坏死率，Western blot法检测细胞中
胱天蛋白酶3（Caspase 3）、剪切体Caspase 3（Cleaved-Caspase 3）蛋白表达水平以及彗星试验法检测细胞DNA损伤（以DNA拖尾
区域比例反映）。结果：与空白对照比较，100、150 μmol/L白鲜碱可显著抑制细胞活力（P＜0.01）；150 μmol/L白鲜碱可显著增加细
胞 LDH 的释放（P＜0.05），释放率达到 79.37％；50、100、150 μmol/L 白鲜碱均可提高细胞的早期凋亡率，但差异均无统计学意义
（P＞0.05）；150 μmol/L 白鲜碱可显著增加细胞坏死率（P＜0.05），坏死率达到 78.64％；50、100、150 μmol/L 白鲜碱均可升高 Cas-
pase 3蛋白表达水平，但差异均无统计学意义（P＞0.05），然而50、100 μmol/L白鲜碱可显著提高Cleaved-Caspase 3蛋白表达水平
（P＜0.05）；白鲜碱可呈剂量依赖性地引起DNA损伤，其中100、150 μmol/L白鲜碱可显著增加DNA拖尾区域比例（P＜0.01）。结
论：白鲜碱可以抑制脾淋巴细胞活力，其作用机制可能与诱导脾淋巴细胞坏死和造成DNA损伤有关。
关键词 白鲜碱；脾淋巴细胞；凋亡；坏死；DNA损伤；体外试验

Study on the Viability Inhibitory Effects and Mechanism of Dictamnine on Mice Spleen Lymphocyte in vitro
CONG Huan，YANG Ying，BAO Yanan，HONG Bo，GUO Lina（College of Pharmacy， Qiqihar Medical
University，Heilongjiang Qiqihar 161006，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the inhibitory effect of dictamnine on the viability of mice spleen lymphocyte in vitro and
explore its potential mechanism. METHODS：The primary spleen lymphocytes of mice were isolated and cultured. The cells were
treated with 0（blank control），50，100，150 μmol/L dictamnine for 24 h. MTT assay was used to determine the cell viability；
Lactic dehydrogenase （LDH） assay was used to determine release rate of LDH. Early apoptosis rate was detected by flow
cytometry. Necrosis rate was detected by Hoechst 33342 and PI double staining；Western blot assay was used to detect the protein
expressions of Caspase 3 and Cleaved-Caspase 3 in cells. Comet assay was used to detect DNA damage in cells（reflected in the
proportion of DNA tail area）. RESULTS：Compared with blank control，100，150 μmol/L dictamnine could significantly inhibit the
viability of lymphocytes（P＜0.01）. 150 μmol/L dictamnine could significantly increase the release of LDH（P＜0.05），and release
rate reached 79.37％. 50，100，150 μmol/L dictamnine could improve the early apoptotic rate of lymphocyte，but there was no
statistical significance（P＞0.05）. 150 μmol/L dictamnine could significantly increase the necrosis rate（P＜0.05），and necrosis rate
reached 78.64％. 50，100，150 μmol/L dictamnine could increase the protein expression of Caspase 3，but there was no statistical
significance（P＞0.05），while 50，100 μmol/L dictamnine could improve the protein expression of Cleaved-Caspase 3 significantly
（P＜0.05）. DNA damage was induced in a dose-dependent manner by dictamnine，in which 100 and 150 μmol/L dictamnine could
significantly increase DNA tail area （P＜0.01）. CONCLUSIONS：Dictamnine can inhibit spleen lymphocyte viability，and the
mechanism may be related to inducing spleen lymphocyte necrosis and DNA damage.
KEYWORDS Dictamnine；Spleen lymphocytes；Apoptosis；Necrosis；DNA damage；In vitro test

[7]
在湿疹、过敏特应性皮炎等病理条件下的免疫反应 肝经，表现出肝毒性 。白鲜碱作为白鲜皮的主要活性
[8]
迁延难愈，严重危害着人类的健康。白鲜皮为多年生草 成分，也具有一定的肝毒性，如郭晓培等 报道了白鲜碱
本植物白鲜和狭叶白鲜的根皮，有清热燥湿、祛风解毒 可以呈剂量依赖性地增加 HepG2 细胞上清液中丙氨酸
的功效，是治疗各种皮肤病的常见药物 [1-3] ，具有抗炎 、 转氨酶（AST）和天冬氨酸转氨酶（ALT）活性，使线粒体
[4]
[9]
[5]
[6]
抗过敏 、抗辐射 等诸多药理作用，在临床上得到了广 膜电位下降，造成细胞损伤；再如Li ZQ等 报道了白鲜
泛的应用。但白鲜皮的毒性作用也不能忽视，白鲜皮入 碱可以通过升高细胞色素 P4503A4 酶（CYP3A4）活性引
起亚慢性肝损伤。白鲜皮虽善于治疗免疫系统疾病，可
Δ 基金项目：黑龙江省教育厅基本科研业务费项目（No.2016-
白鲜皮是否对免疫系统有损伤作用却未见报道。故本
KYYWF-0862）
＊讲师，博士。研究方向：中药药理与毒理。E-mail：conghuancl@ 研究选用白鲜皮的有效成分白鲜碱作用于体外脾淋巴
163.com 细胞，考察其对脾淋巴细胞的活力的影响及机制，为白

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