Page 42 - 2019年11月第30卷第21期
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缺枸杞子阴性对照溶液。                                        放置2、4、6、8、12、24 h后分别按“2.6.1”项下色谱条件进
        2.6.5  系统适用性考察         取“2.6.2”项下甜菜碱对照品            样测定，记录峰面积。结果，甜菜碱峰面积的 RSD 为
        溶液和“2.6.3”项下供试品溶液，分别按“2.6.1”项下色谱                   0.07％（n＝6），表明供试品溶液在室温条件下放置 24 h
        条件进样测定，记录色谱图。结果，甜菜碱与相邻峰间                           内稳定性良好。
        分离度均大于1.5，以甜菜碱峰计理论板数＞4 000，阴性                      2.6.10  加样回收试验        称取已知含量的肝肾颗粒新工
        对照在与对照品色谱保留时间相同的位置上无色谱峰                            艺样品（批号：201806）共 9 份，每份约 0.3 g，精密称定，
        出现，表明本方法专属性良好。甜菜碱的高效液相色谱                           分别置于具塞锥形瓶中，分别按样品中甜菜碱含量的
        图见图4。                                              80％、100％、120％加入对照品，按“2.6.2”项下方法制备
           200                                             供试品溶液，再按“2.6.1”项下色谱条件进样测定，记录
                                          甜菜碱
           150                                             色谱图，并计算平均回收率。结果，甜菜碱平均回收率
          mAU  100                                         为97.02％（RSD＝0.79％，n＝9）。
            50
                                                           2.6.11  样品含量测定        分别称取 10 批肝肾颗粒样品
             0
                                                           （批号：201801、201802、201803、201804、201805、201806、
              0    2.5   5   7.5   10   12.5  15  17.5
                                t，min                      201807、201808、201809 和 201810），每份约 0.6 g，精密
                             A.供试品溶液
                                                           称定，按“2.6.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.6.1”项
           200
                                          甜菜碱              下色谱条件进样测定，记录峰面积，结果10批肝肾颗粒
           150
          mAU  100                                         样品中甜菜碱平均含量为4.298 mg/g。
            50                                             2.7  党参炔苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定
                                                           2.7.1  色谱条件      色谱柱：Apollo C18 （250 mm×4.6 mm，
             0
              0    2.5   5   7.5   10   12.5  15  17.5     5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱；流速：1.0
                                t，min
                           B.甜菜碱对照品溶液                      mL/min；检测波长：270 nm，柱温：35 ℃；进样量：10
           200                                             μL。梯度洗脱条件见表4。
           150                                                             表4   梯度洗脱条件
          mAU  100                                                  Tab 4 Gradient elution conditions

            50                                             时间，min              流动相A               流动相B
             0                                             0.01～30            5％～15％             95％～85％
              0    2.5   5   7.5   10   12.5  15  17.5     30～60              15％～35％            85％～65％
                                t，min                      60～100             35％～35％            65％～65％
                             C.阴性对照溶液                      100～120            35％～55％            65％～55％
              图4   甜菜碱含量测定的高效液相色谱图                         2.7.2  混合对照品溶液的制备            取党参炔苷、毛蕊异黄
        Fig 4  HPLC chromatograms for the determination of  酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL
              betaine content                              含党参炔苷 0.2 mg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷 0.1 mg 的溶
        2.6.6  线性关系考察       分别精密吸取甜菜碱对照品溶                  液，即得。
        液8、10、12、14和16 μL注入色谱仪，按“2.6.1”项下色谱                2.7.3  供试品溶液的制备          称取肝肾颗粒新工艺样品
        条件进样测定，记录峰面积。以对照品进样量对数为横                           （批号：201806）3 g，精密称定，置于锥形瓶中，加入甲醇
        坐标（x）、峰面积对数为纵坐标（y）进行回归分析，得甜                        50 mL，超声处理30 min，取续滤液，蒸干，残渣加氨试液
        菜碱的回归方程为 y＝1.050x+5.603（r＝0.999 1），表明              25 mL溶解，水饱和正丁醇萃取4次，每次25 mL，合并正
        甜菜碱进样量在4.32～8.64 μg范围内线性关系良好。                      丁醇层，蒸干，残渣加水 5 mL 溶解，放冷，通过 D101 型
        2.6.7  精密度试验      精密吸取“2.6.2”项下甜菜碱对照               大孔吸附树脂柱（内径为 1.5 cm，柱高为 10 cm），以水
        品溶液 12 µL，按“2.6.1“项下色谱条件连续进样测定 5                   50 mL 洗脱，弃去洗脱液，再以 50 mL 30％乙醇洗脱，弃
        次，记录峰面积。结果，甜菜碱峰面积的 RSD 为 0.05％                     去洗脱液，最后以80 mL 80％乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸
       （n＝5），表明仪器的精密度良好。                                   干，残渣加甲醇溶解，并于5 mL量瓶中定容摇匀，即得。
        2.6.8  重复性试验      按“2.6.2”项下方法制备供试品溶               2.7.4  系统适用性试验         取“2.7.2”项下混合对照品溶
        液共 5 份，按“2.6.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面                     液和“2.7.3”项下供试品溶液，分别按“2.7.1”项下色谱条
        积。结果，甜菜碱峰面积的 RSD 为 1.33％（n＝5），表明                   件进样测定，记录色谱图。结果，党参炔苷和毛蕊异黄
        本方法重复性良好。                                          酮葡萄糖苷与相邻峰间分离度均大于 1.5，以党参炔苷
        2.6.9  稳定性试验      取“2.6.2”项下供试品溶液，室温下              和毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计理论板数计均＞4 000，党参


        中国药房    2019年第30卷第21期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 21  ·2917  ·
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