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volume fraction，material-liquid ratio，extraction time，extraction temperature and times were selected as investigation factors，and
the content of total flavonoids was selected as response value，Plackett-Burman design was used to screen the factors that had
significant influence on the content of total flavonoidsfrom C. alfrdii. Then steepest climbing test was adopted to confirm the
optimum valuing range；the extraction technology of total flavonoids was optimized by Box-Behnken response methodology.
RESULTS：The linear range of total flavonoids were 0.012-0.036 mg/mL （r＝0.999 9）；RSDs of precision，stability and
repeatability tests were less than 3％；the recovery ranged from 92.98％ to 99.86％（RSD＝2.71％，n＝6）. The optimal extraction
technology included that 60％ ethanol，material-liquid ratio of 1 ∶ 34（g/mL），extracting for 3 times，lasting for 60 min，extraction
temperature of 80 ℃. Under this technology，average content of total flavonoids from C. alfrdii was 2.71％（RSD＝1.69％，n＝
6），and the relative error was 2.65％ compared with predicted value of the model（2.64％）. CONCLUSIONS：Established method
is stable and reproducible，and can be used for content determination of total flavonoids from C. alfrdii. The optimized extraction
method is stable and feasible.
KEYWORDS Combretum alfrdii；Total flavonoids；Extraction technology；Plackett-Burman experiment；Box-Behnken response
surface methodology；UV spectrophotometry；Content determination

水石榴为使君子科风车子属植物风车子（Combre- 表1 药材样品来源
tum alfrdii Hance）的干燥根、茎、叶，别名水番桃、清凉 Tab 1 Source of samples
树，是广西壮族和瑶族等少数民族常用药材，主产于广 编号 来源 采集时间 药用部位 干燥方式
S1 广西金秀桐木 2017年12月 茎与叶 自然阴干
西、广东、云南等地，其性平、淡，味微苦、甘，常被用于治
S2 广西来宾迁江 2017年12月 茎与叶 自然阴干
疗黄疸型肝炎、蛔虫病、消化不良等疾病 。有文献报 S3 广西恭城莲花 2017年12月 茎与叶 自然阴干
[1]
道，水石榴主要含有二苯乙烯类、三萜类、菲类及黄酮类 S4 广西隆安龙虎山 2018年4月 茎与叶 自然阴干
S5 广西柳城太平乡 2018年5月 茎与叶 自然阴干
等化学成分 。黄酮类化合物广泛存在于多种植物中，
[2]
S6 广西武鸣罗圩 2018年4月 茎与叶 自然阴干
对心血管系统、生殖系统、消化系统、内分泌系统、神经 S8 广西中医药大学药用植物园 2017年11月 茎与叶 自然阴干
系统均具有较好的药理作用 [3-4] 。目前对于水石榴的研 S9 广西柳州沙塘 2018年5月 茎与叶 自然阴干
S10 广西都安地苏 2018年4月 茎与叶 自然阴干
究主要集中在其化学成分研究方面 [5-7] ，尚未见对其黄酮
类成分的提取工艺及含量测定的相关研究。为此，本研 2 方法与结果
2.1 水石榴中总黄酮的含量测定
究采用紫外-可见光分光光度法测定水石榴中总黄酮的
采用紫外-可见光分光光度法测定水石榴中总黄酮
含量，通过 Plackett-Burman 试验结合 Box-Behnken 响应
的含量。
面法优化其总黄酮的提取工艺，旨在为水石榴中总黄酮
2.1.1 对照品溶液的制备 取芦丁对照品 12.0 mg，置
的质量控制以及药材资源的有效利用提供参考。
于 50 mL 量瓶中，加 70％乙醇稀释并定容，即得质量浓
1 材料
度为0.24 mg/mL的对照品溶液。
1.1 仪器
2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取药材样品粉末
UV1780型紫外-可见光分光光度计（日本Shimadzu
1.00 g，置于50 mL锥形瓶中，加70％乙醇30 mL，称定质
公司）；SQP型分析天平[赛多利斯科学仪器（北京）有限
量，于70 ℃水浴加热回流提取1 h，放冷，用70％乙醇补
公司]；HWS-26 型电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器
足减失的质量，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
有限公司）；SDFY-200A型高速万能粉碎机（上海比朗仪
2.1.3 显色剂的制备 取三氯化铝 18.10 g，置于 1 000
器有限公司）；UPC-11-10T 型优普系列超纯水器（四川
mL量瓶中，加水溶解并定容，即得1％三氯化铝水溶液。
优普超纯科技有限公司）。 2.1.4 空白对照溶液的制备 取 70％乙醇 1 mL，置于
1.2 药品与试剂 10 mL 量瓶中，精密加入“2.1.3”项下 1％三氯化铝水溶
芦丁对照品（上海融禾医药科技有限公司，批号： 液5 mL进行显色反应，加70％乙醇定容，作为空白对照
131105，纯度：≥99％）；三氯化铝（分析纯，广东光华科 溶液。
技股份有限公司）；乙醇（分析纯，天津市富宇精细化工 2.1.5 检测波长的确定 以上述空白对照溶液在400～
有限公司）；水为超纯水。 800 nm波长范围内进行基线调零，取对照品溶液和供试
1.3 药材 品溶液适量，在400～800 nm波长范围内扫描，结果见图
水石榴药材（编号：S1～S10），来源见表1，经广西中 1。由图 1 可知，对照品溶液、供试品溶液分别在 410、
医药大学药学院郭敏副教授鉴定为使君子科风车子属 406 nm波长处有最大吸收，空白对照溶液在对应波长处
植物风车子（C. alfrdii Hance）的干燥茎与叶。药材经粉 均无吸收，故确定406 nm为检测波长。
碎后，过50目筛，密封保存，备用。 2.1.6 线性关系考察 取“2.1.1”项下对照品溶液 0.5、

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