Page 60 - 2019年10月第30卷第20期

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（R ＝0.999 2）。结果，UA 检测质量浓度的线性范围为 16.00、32.00、40.00 μg/mL 的系列对照品溶液，按“2.2.1”
40.10～401.00 μg/mL。 项下色谱条件进样分析，记录色谱图。以待测物质量浓
2.1.5 定量限与检测限考察 取“2.1.4”项下40.10 μg/mL 度为横坐标（c，μg/mL）、其峰面积为纵坐标（A）进行线性
的UA对照品溶液适量，用乙醇逐级稀释，并按“2.1.1”项 回归，得线性回归方程为 A＝2585 080c－29 936（R ＝
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下色谱条件进样分析。当信噪比为10 ∶ 1时，得UA定量 0.999 9）。结果，DOX 检测质量浓度的线性范围为
限为 2.23 μg/mL；当信噪比为 3 ∶ 1 时，得 UA 检测限为 4.00～40.00 μg/mL。
0.808 μg/mL。 2.2.5 定量限与检测限考察 取“2.2.4”项下40.00 μg/mL
2.1.6 精密度、准确度、重复性、加样回收率和稳定性试 的UA对照品溶液适量，用乙醇逐级稀释，并按“2.2.1”项
验 参照 2015 年版《中国药典》（四部）要求 进行精密 下色谱条件进样分析。当信噪比为 10 ∶ 1 时，得 DOX 定
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度、准确度、重复性、加样回收率和稳定性试验。结果， 量限为2.263 μg/mL；当信噪比为3 ∶ 1时，得DOX检测限
精密度、准确度、重复性、加样回收率均符合药典相关规 为0.608 μg/mL。
定，供试品溶液在室温下放置24 h基本稳定。 2.2.6 精密度、准确度、重复性、加样回收率和稳定性试
2.2 DOX含量测定 验 参照 2015 年版《中国药典》（四部）要求 进行精密
[12]
采用HPLC法测定。 度、准确度、重复性、加样回收率和稳定性试验。结果，
2.2.1 色谱条件 色谱柱：Dikma Diamonsil C18 （250 精密度、准确度、重复性、加样回收率均符合药典相关规
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：磷酸缓冲液[500 mL 水中 定，供试品溶液在室温下放置24 h基本稳定。
加入磷酸 0.68 mL、十二烷基硫酸钠（SDS）1.44 g]-乙腈- 2.3 UA包封率和载药量测定
甲醇（500 ∶ 500 ∶ 60，V/V/V）；检测波长：254 nm；流速：1.0 精密量取所得 UA/PF127/TPGS-DOX 混合纳米胶
mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。 束溶液适量，经 0.22 μm 微孔滤膜滤过后，取续滤液，用
2.2.2 溶液的配制 ①DOX 贮备液：精密称取 DOX· 乙醇稀释，以 12 000 r/min 离心 10 min，取上清液，按
HCl对照品4.00 mg，用pH 7.4的磷酸盐缓冲液（PBS，含 “2.1.1”项下色谱条件进样测定，并采用标准曲线法计算
20％乙醇）溶解并定容至100 mL量瓶中，制得质量浓度 其被包封的 UA 含量（m 包 封）；精密量取 UA/PF127/TP-
为 40.00 μg/mL（以 DOX·HCl 质量计，下同）的 DOX 贮 GS-DOX 混合纳米胶束溶液适量，不经滤过处理，同法
备液。②供试品溶液：按“2.1.2②”项下方法制备供试品 离心后取上清液，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，并
溶液。③阴性对照溶液：按“2.1.2③”项下方法制备阴性 采用标准曲线法计算 UA 的总量（m 总）。包封率（％）＝
对照溶液。 （m 包封/m 总）×100％，载药量（％）＝[m 包封/（m 投药+m 载体）]×
2.2.3 专属性考察 分别取“2.2.2”项下 DOX 贮备液、 100％（式中，m 投药为UA投药量，m 载体为载体总量） [13-14] 。
供试品溶液、阴性对照溶液各适量，按“2.2.1”项下色谱 2.4 UA/PF127/TPGS纳米胶束处方工艺优化
条件进样分析，记录色谱图，详见图 2。结果显示，在该 采用薄膜水化法 制备UA/PF127/TPGS纳米胶束：
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色谱条件下，DOX 峰形较好，保留时间约为 10.5 min； 称取一定量的 UA 原料药以及一定摩尔比的载体材料
UA 在此波长下无吸收，TPGS、PF127 等对 DOX 的测定 PF127、TPGS（载体材料共100 mg），置于同一100 mL茄
无干扰，提示本方法专属性良好。 型瓶中，加入适量有机溶剂使其充分溶解，于45 ℃下旋
0.4 DOX 0.16 DOX 转蒸发1 h以挥干有机溶剂，残渣于室温真空干燥箱中静
0.3 0.12
AU 0.2 AU 0.08 置过夜，即得透明干燥的含药薄膜。将上述含药薄膜用
0.1 0.04
0 0 一定量的水进行水化后，于一定温度水浴中以700 r/min
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14
t，min t，min 搅拌30 min，冷却至室温，即得。
A. DOX贮备液 B. 供试品溶液
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2.4.1 单因素试验 参考现有研究 ，以纳米胶束溶液
0.40
0.30 澄清程度为指标，对有机溶剂种类进行考察；以UA包封
AU 0.20
0.10 率为考察指标，对UA投药量、PF127与TPGS的摩尔比、
0
0 2 4 6 8 10 12 14 水化温度、水化体积等进行单因素考察。各因素水平均
t，min
C. 阴性对照溶液 平行操作3次，结果见表1、表2（表1中，“++”表示澄清，
图2 高效液相色谱图（DOX定量分析） “+”表示较澄清，“－”表示浑浊）。由表 1、表 2 可见，以
Fig 2 HPLC chromatograms（DOX quantitative ana- 乙醇作为溶剂，可获得澄清的纳米胶束溶液；当UA投药
lysis） 量为 8 mg、PF127 与 TPGS 的摩尔比为 3 ∶ 7、水化温度为
2.2.4 线性关系考察 取“2.2.2①”项下DOX贮备液适 37 ℃、水化体积为 4 mL 时，所得 UA/PF127/TPGS 纳米
适量，用乙醇稀释，制得质量浓度分别为 4.00、8.00、 胶束的包封率相对较高。

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