Page 56 - 2019年10月第30卷第20期

脂酰乙醇胺相结合，再与自噬体膜上的LC3Ⅱ结合形成
Bcl-2 26 kDa
复合物，进入到自噬体后最终与溶酶体融合形成自噬溶
酶体从而被清除，是评价自噬体降解的重要指标 [18-19] 。
Bax 21 kDa
当自噬流被活化时，P62 水平会下降；自噬流被抑制时，
Active Caspase-3 17 kDa
P62 水平则会增加 。本研究结果显示，经不同剂量
[20]
BAC（200、400 μmol/L）作用 48 h 后，A549 细胞中 Be-
β-actin 43 kDa
clin1、LC3（LC3Ⅱ/Ⅰ）的mRNA及蛋白表达水平均有不
对照组 BAC低剂量组 BAC高剂量组
A.Bcl-2、Bax、Active Caspase-3蛋白 同程度的升高，P62的mRNA及蛋白表达水平则均有不
Beclin1 52 kDa 同程度的降低，且呈剂量依赖趋势。这表明 BAC 可诱
导A549细胞发生自噬，并可能具有剂量相关性。
P62 62 kDa
有研究表明，抑制自噬有利于NSCLC细胞成活、减
少其凋亡，从而促进早期肺癌的发展，而诱导自噬则可
LC3Ⅰ 16 kDa
LC3Ⅱ 14 kDa
导致NSCLC细胞凋亡增加 [21-22] 。自噬参与肿瘤的发生、
β-actin 43 kDa 发展过程并非是一个独立作用，而需要与各通路相互作
[23]
对照组 BAC低剂量组 BAC高剂量组 用，尤其与凋亡途径的关系最为密切 。凋亡是由基因
B.Beclin1、LC3、P62蛋白 控制的一种细胞的程序性死亡，其病理生理的主要表现
图4 BAC对A549细胞中Bcl-2、Bax、Active Caspase-3、
[24]
为细胞核皱缩、染色体聚集和凋亡小体的形成 。Bcl-2
Beclin1、LC3ⅡⅡ/ⅠⅠ、P62蛋白表达影响的电泳图
是与凋亡关系最密切的抗凋亡基因，Bax则是与Bcl-2作
Fig 4 Electrophoresis of the effects of BAC on protein
用相对抗的促凋亡基因，在细胞凋亡的两种信号传导
expression of Bcl-2，Bax，Active Caspase-3，
途径中，Bcl-2/Bax 基因的比值是启动凋亡的重要分子
Beclin1，LC3ⅡⅡ/ⅠⅠ and P62 in A549 cells [25-26]
表 6 BAC 对 A549 细胞中 Bcl-2、Bax、Active Caspase- 开关 。Bcl-2/Bax基因能够通过线粒体途径调节Cas-
[27]
pase-3基因的活性，继而调节细胞凋亡过程 。Caspase-3
3、Beclin1、LC3ⅡⅡ/ⅠⅠ、、P62 蛋白表达水平的影响
是细胞凋亡过程中主要的终末剪切酶和最重要的凋亡
（x±±s，n＝3）
执行者，Active Caspase-3 蛋白是 Caspase-3 蛋白的活化
Tab 6 Effects of BAC on the protein expression of
形式，当凋亡发生时，Caspase-3 蛋白发生活化，增加的
Bcl-2，Bax，Active Caspase-3，Beclin1，LC3
Active Caspase-3 可特异性地切割 DNA，促使染色质凝
Ⅱ/ⅠⅠ and P62 in A549 cells（x±±s，n＝3）
Ⅱ
固和核酸激活，导致细胞凋亡 。因此，Active Cas-
[28]
剂量，
组别 Bcl-2 Bax Active Caspase-3 Beclin1 LC3Ⅱ/Ⅰ P62
μmol/L pase-3 蛋白表达水平是反映细胞发生凋亡的标志之一。
对照组 0 1.723±0.657 1.354±0.243 0.577±0.148 0.323±0.091 0.597±0.167 1.699±0.151 本研究结果显示，不同剂量BAC（200、400 μmol/L）作用
BAC低剂量组 200 1.466±0.400 1.376±0.192 1.075±0.209 0.707±0.179 0.899±0.102 0.595±0.104 ＊＊ 48 h 后，A549 细胞中 Bax、Caspase-3（Active Caspase-3）
＊
＊
＊
＊
＊＊
＊
BAC高剂量组 400 0.672±0.211 1.889±0.293 1.695±0.255 1.036±0.205 1.339±0.213 0.450±0.187 ＊＊
＊＊
＊＊
＊
的 mRNA 及其蛋白表达水平均有不同程度的升高，
注：与对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
＊＊
＊＊
＊
Note：vs. control group， P＜0.05， P＜0.01 Bcl-2 的 mRNA 及其蛋白表达水平均有不同程度的降
A549 细胞的增殖，且呈剂量和时间依赖趋势，其中以 低，且呈剂量依赖趋势。这表明 BAC 可诱导 A549 细胞
200、400 μmol/L 剂量作用于细胞 48 h 后该抑制作用尤 发生凋亡，并可能具有剂量相关性。
为 明 显 ，细 胞 增 殖 抑 制 率 分 别 达（28.96 ± 4.90）％ 、 综上所述，BAC可抑制肺癌A549细胞的增殖、促进
（51.69±5.48）％以上。流式细胞术检测结果显示，BAC 其凋亡，并且能促进Beclin1、LC3（LC3Ⅱ/Ⅰ）和抑制P62
能引起A549细胞的凋亡，且随着药物剂量的增加，细胞 等自噬相关基因及蛋白的表达，促进 Bax、Caspase-3
早期和晚期凋亡率均逐渐增加，且呈剂量和时间依赖 （Active Caspase-3）和抑制Bcl-2等凋亡相关基因及蛋白
趋势。 的表达；其作用机制可能与 BAC 通过促进 A549 细胞发
自噬是不同于凋亡和坏死的一种细胞死亡方式，与 生过度自噬从而导致细胞凋亡有关。本研究可为肺癌
细胞生长、凋亡、内环境稳态密切相关 。Beclin1 为自 尤其是NSCLC的临床治疗提供新的靶点和思路。后续
[15]
[16]
噬的正调节因子，同时也是自噬起始的重要因子 。 本课题组将联合应用自噬促进剂或抑制剂从细胞和动
LC3是自噬的标志性因子，也为正调节因子，其存在LC3 物两方面进行体内外研究，进一步深入研究 BAC 对自
Ⅰ、LC3Ⅱ两种形式，当自噬被激活时，LC3Ⅰ发生脂质 噬和凋亡的调控机制。
化形成LC3Ⅱ，因此LC3Ⅱ蛋白表达的增加可作为自噬 参考文献
激活的标志 。P62是一种在细胞质中合成的位于细胞 [ 1 ] DESANTIS CE，MA J，GODING SA，et al. Breast cancer
[17]
核的蛋白，当自噬被激活时，P62首先会与泛素化蛋白磷 statistics，2017，racial disparity in mortality by state[J].
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