Page 55 - 2019年10月第30卷第20期

表 3 BAC 作用不同时间下 A549 细胞的增殖抑制率 表4 不同剂量BAC作用不同时间后A549细胞凋亡率
（x±±s，n＝3） （x±±s，n＝3）
Tab 3 Inhibition rate of A549 cells proliferation after Tab 4 Apoptosis rate of A549 cells after treated with
treated with BAC for different time（x ±± s， different doses of BAC for different time（x±±s，
n＝3） n＝3）
细胞增殖抑制率，％ 凋亡率（24 h），％ 凋亡率（48 h），％
组别 剂量，μmol/L 组别 剂量，μmol/L
24 h 48 h 72 h 早期凋亡 晚期凋亡 早期凋亡 晚期凋亡
对照组 0 0 0 0 对照组 0 1.66±0.42 2.66±0.74 1.76±0.55 2.07±0.26
BAC低剂量组 200 19.40±5.70 ＊ 28.96±4.90 ＊＊ 29.86±6.72 ＊＊ BAC低剂量组 200 2.76±0.70 4.15±1.74 4.18±1.36 ＊ 9.19±1.04 ＊
BAC高剂量组 400 42.42±3.68 ＊＊ 51.69±5.48 ＊＊ 51.83±1.73 ＊＊ BAC高剂量组 400 3.48±0.73 ＊ 6.66±1.60 ＊ 6.38±0.97 ＊＊ 26.74±3.21 ＊＊
＊＊
注：与对照组比较，P＜0.05， P＜0.01 注：与对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
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＊
＊＊
Note：vs. control group， P＜0.05， P＜0.01 Note：vs. control group， P＜0.05， P＜0.01
＊
＊＊
时）差异均有统计学意义（P＜0.05）。流式细胞图见图3 Beclin1、LC3 的 mRNA 表达水平均有不同程度的升高，
（注：图中Q1象限代表机械性死亡细胞，Q2象限代表晚 且随 BAC 剂量的增加，上述基因 mRNA 表达水平的下
期凋亡细胞，Q3象限代表早期凋亡细胞，Q4象限代表活 降或上升越明显，提示该影响作用具有剂量依赖趋势；
细胞），凋亡率检测结果见表4。 其中，BAC 低剂量组 Caspase-3 的 mRNA 表达水平以及
10 6 10 6 BAC 高剂量组各目标基因的 mRNA 表达水平与对照组
Q1 Q2 Q1 Q2
10 5 0.088％ 2.24％ 10 5 0.053％ 2.37％ 比较，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。各目
PE-A 10 4 PE-A 10 4 标基因mRNA表达水平检测结果见表5。
Comp-FL2-A： 10 3 2 Comp-FL2-A： 10 3 2 表 5 BAC 对 A549 细胞中 Bcl-2、Bax、Caspase-3、Be-
10
10
10 1 Q4 Q3 10 1 Q4 Q3 clin1、LC3、P62 mRNA表达水平的影响（x±±s）
96.1％ 1.61％ 96.4％ 1.20％ Tab 5 Effects of BAC on the mRNA expression of
10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 Bcl-2，Bax，Caspase-3，Beclin1，LC3 and P62
Comp-FL1-A:FITC-A Comp-FL1-A:FITC-A in A549 cells（x±±s）
A. 对照组（24 h） B. 对照组（48 h）
10 6 10 6 组别 剂量，μmol/L Bcl-2 Bax Caspase-3 Beclin1 LC3 P62
Q1 Q2 Q1 Q2
10 5 0.11％ 2.99％ 10 5 0.96％ 8.02％ 对照组 0 1.151±0.198 1.099±0.146 1.067±0.112 1.388±1.404 1.807±0.867 1.101±0.453
PE-A 10 4 PE-A 10 4 BAC低剂量组 200 0.813±0.157 1.308±0.127 1.560±0.220 1.744±0.903 2.025±0.984 1.020±0.671 ＊
＊
Comp-FL2-A： 10 3 2 Comp-FL2-A： 10 3 2 注：与对照组比较，P＜0.05， P＜0.01
＊
＊
400
＊＊
BAC高剂量组
0.537±0.055 1.807±0.209 1.858±0.190 1.908±1.374 2.187±0.966 0.581±0.165
＊＊
＊＊
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＊＊
10
10
＊＊
＊
10 1 Q4 Q3 10 1 Q4 Q3 Note：vs. control group， P＜0.05， P＜0.01
93.5％ 3.39％ 86.4％ 4.58％ 3.5 BAC 对 A549 细胞中 Bcl-2、Bax、Active Caspase-3、
10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 Beclin1、LC3ⅡⅡ/ⅠⅠ、P62蛋白表达的影响
Comp-FL1-A:FITC-A Comp-FL1-A:FITC-A
C. BAC低剂量组（24 h） D. BAC低剂量组（48 h） 与对照组比较，BAC 各剂量组细胞中 Bcl-2、P62 蛋
10 6 10 6 白表达水平均有不同程度的降低，Bax、Active Caspase-3、
Q1 Q2 Q1 Q2
10 5 0.093％ 5.82％ 10 5 1.69％ 30.2％ Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ（LC3Ⅱ和LC3Ⅰ分别为LC3蛋白的两
PE-A 10 4 PE-A 10 4 种表现形式，此处即两者蛋白表达水平之比，下同）蛋白
Comp-FL2-A： 10 3 2 Comp-FL2-A： 10 3 2 表达水平均有不同程度的升高，且随着 BAC 剂量的增
10
10
10 1 Q4 Q3 10 1 Q4 Q3 加，上述蛋白表达水平的下降或上升越明显，提示该影
90.8％ 3.27％ 61.4％ 6.79％ 响作用具有剂量依赖趋势；其中，除 BAC 低剂量组 Bax
10 0 10 0
10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 10 0 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 10 6 蛋白外，其余各组目标蛋白表达水平与对照组比较，差
Comp-FL1-A:FITC-A Comp-FL1-A:FITC-A
E. BAC高剂量组（24 h） F. BAC高剂量组（48 h） 异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜0.01）。各目标蛋白
图3 不同剂量BAC作用不同时间后A549细胞的流式 表达水平检测结果见图4、表6。
细胞图 4 讨论
Fig 3 Flow cytometry plot of A549 cells after treated BAC为单酯型生物碱，主要存在于乌头属植物中 ，
[13]
with different doses of BAC for different time 具有抗肿瘤活性，可抑制人胎盘绒膜癌细胞和心肌细胞
3.4 BAC 对 A549 细 胞 中 Bcl-2、Bax、Caspase-3、Be- 等的生长，促进细胞凋亡 [11，14] 。本研究结果显示，BAC能
clin1、LC3、P62 mRNA表达的影响 显著影响人肺癌 A549 细胞的正常生长形态，随着 BAC
与对照组比较，BAC 各剂量组细胞中 Bcl-2、P62 的 剂量的增加，A549 细胞开始出现皱缩、变小、溶解等现
mRNA 表达水平均有不同程度的降低，Bax、Caspase-3、 象。进一步通过 CCK-8 试验证实，BAC 能明显抑制
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