Page 43 - 2019年10月第30卷第20期
P. 43

2.1.1  附子脂溶性生物碱的制备              取黑顺片 5 kg，粉         注射 10％水合氯醛（3 mL/kg）麻醉，用含促凝剂的真空
        碎，用二氯甲烷、5％Na2CO3溶液先后浸泡，再以二氯甲                        采血管从其腹主动脉采集血样，静置 30 min 后，在 4 ℃
        烷为溶剂加热回流提取2次；合并提取液，回收溶剂并浓                           条件下以 1 000×g 离心 10 min，收集上层血清。血样采
        缩后，以 0.05 mol/L 硫酸溶液萃取 2 次；合并酸水萃取                   集完毕后，迅速断颈处死大鼠，收集注射足的对侧足（左
        液，加氨水调pH至9～10，再以二氯甲烷萃取3次；合并                         足）关节样本，置于 4％多聚甲醛通用型组织固定液中
        有机相萃取液，回收溶剂并浓缩，得附子脂溶性生物碱                            固定。
        浸膏（12.5 g）。                                         2.6 大鼠滑膜组织病理学检查
        2.1.2  白芍总苷的制备          取白芍药材 5 kg，粉碎，以                 取“2.5”项下固定的大鼠左足踝关节组织，在4 ℃条
        70％乙醇为溶剂加热回流提取2次；合并提取液，回收溶                          件下以 10％EDTA 脱钙液进行脱钙 60 d，期间定期更换
        剂并浓缩至无醇味；取浓缩液，过D101型大孔树脂，先后                         脱钙液；脱钙完成后取关节组织进行石蜡包埋，制作切
        以水、25％乙醇洗脱；收集25％乙醇洗脱部位，回收溶剂                         片（厚度：4 μm）；采用 HE 法染色后，置于显微镜下观
        并浓缩至无醇味，喷雾干燥，得白芍总苷粉末（200.0 g）。                      察。以结缔组织增生、炎性细胞浸润、新生血管形成等
        2.2 分组、造模与给药                                        情况评价滑膜组织病变程度。
            取大鼠 100 只，随机分为空白组，模型组，罗通定组                      2.7  大鼠血清中抗CCP抗体含量测定及配伍增效作用
                                                    [16]
        [阳性对照，10.0 mg/（kg·d）；按等效剂量系数折算法 制                   评价
        定给药剂量]，地塞米松组[阳性对照，0.3 mg/（kg·d）；按                       取“2.5”项下大鼠血清样本，按酶联免疫吸附法试剂
        罗通定组同法制定给药剂量]，附子生物碱低、高剂量组                           盒说明书操作，用酶标仪测定血清抗CCP抗体含量。根
                                                                      [19]
        [附子脂溶性生物碱浸膏12.5、25.0 mg/（kg·d）；按前期研                 据文献方法 ，计算附子脂溶性生物碱与白芍总苷配伍
              [17]
        究结果 制定剂量]，白芍总苷低、高剂量组[白芍总苷粉                          治疗风寒湿痹证的CI。首先，按公式计算各组大鼠血清
        末 200.0、400.0 mg/（kg·d）；按前期研究结果         [15] 制定剂    抗CCP抗体抑制率：抗体抑制率＝[（模型组抗CCP抗体
        量]，配伍低、高剂量组[附子脂溶性生物碱和白芍总苷分                          含量－空白组抗CCP 抗体含量）－（给药组抗CCP 抗体
        别为12.5 mg/（kg·d）+400.0 mg/（kg·d）、25.0 mg/（kg·d）+    含量－空白组抗 CCP 抗体含量）]/（模型组抗 CCP 抗体
        800.0 mg/（kg·d）；按前期研究结果 制定配伍比例，相                    含量－空白组抗 CCP 抗体含量）；然后，采用 CompuSyn
                                       [15]
        当于附子与白芍原药材配伍比例为1∶2]，每组10只。罗                         1.0软件录入附子生物碱各剂量组、白芍总苷各剂量组、
        通定片、地塞米松片、附子脂溶性生物碱浸膏、白芍总苷                           配伍各剂量组大鼠的给药剂量及其抗CCP抗体抑制率，
        粉末均在临用前以水配制成适当浓度的药液，每次给药                            由软件自动计算得到 CI 值。按以下标准判断附子脂溶
        体积均为20 mL/kg。                                       性生物碱与白芍总苷配伍的增效作用：CI＜1，表明两者
            根据文献方法 进行造模：模型组和各给药组大鼠                          配伍具有协同作用；CI＝1，表明两者配伍具有相加作
                         [17]
                                                                                             [20]
        均于右后足垫部位注射完全弗氏佐剂 0.1 mL 以建立佐                        用；CI＞1，表明两者配伍具有拮抗作用 。
        剂性关节炎（AIA）模型，然后每天将大鼠双后足踝关节                          2.8  统计学方法
        以下部位浸泡于凉水 15 min，同时吹电风扇刺激，即在                            采用SPSS 21.0软件对实验数据进行统计分析。计
        AIA 模型的基础上，辅以“风、寒、湿”等外因刺激，以建                        量资料均以x±s表示，组间比较采用t检验。P＜0.05为
        立符合中医病证结合特点的风寒湿痹证模型；空白组大                            差异具有统计学意义。
        鼠在在相同部位注射生理盐水0.1 mL，并避免风、寒、湿                        3 结果
        的刺激。自注射之日起第19天时，各给药组大鼠分别灌                           3.1  大鼠关节压痛阈值测定结果
        胃相应药液，每日 1 次，连续 14 d；空白组和模型组大鼠                          与空白组比较，给药前及给药第3、6天时，模型组大
        均同法灌胃相应体积水。                                         鼠左、右足关节压痛阈值显著降低，差异有统计学意义
        2.3 大鼠关节压痛阈值测定                                     （P＜0.01）。与模型组比较，给药前，各给药组大鼠左、
            分别于给药第0（即给药前）、3、6天时，取“2.2”项下                    右足关节压痛阈值差异均无统计学意义（P＞0.05）；给
        除地塞米松组外的各组大鼠，采用电子压痛仪进行其                             药第3、6天时，罗通定组大鼠、附子生物碱各剂量组和配
        左、右踝关节疼痛情况测定。压痛阈值以大鼠产生疼痛                            伍各剂量组大鼠上述指标均显著升高，差异均有统计学
        挣扎时的仪器计数为准。                                         意义（P＜0.05或P＜0.01），而白芍各剂量组上述指标差
        2.4  大鼠关节肿胀指数测定                                     异均无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠关节压痛阈值
            分别于给药第0（即给药前）、3、6天时，取“2.2”项下                    测定结果见表1。
        除罗通定组外的各组大鼠，采用游标卡尺测量其左、右                            3.2 大鼠关节肿胀指数测定结果
        足踝关节直径，计算肿胀指数 ：肿胀指数（cm/kg）＝关                            与空白组比较，给药前及给药第3、6天时，模型组大
                                  [18]
        节直径（cm）/体质量（g）×10 。                                 鼠左、右足关节肿胀指数显著升高，差异均有统计学意
                               －3
        2.5  样本采集及处理                                        义（P＜0.01）。与模型组比较，给药前，各给药组大鼠
            末次给药后2 h，取除罗通定组外的各组大鼠，腹腔                        左、右足关节肿胀指数差异均无统计学意义（P＞0.05）；


        ·2774  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 20                                中国药房    2019年第30卷第20期
   38   39   40   41   42   43   44   45   46   47   48