Page 38 - 2019年10月第30卷第20期

mm，5 μm）；流动相：甲醇-2 mmol/L 磷酸氢二钠水溶液 量下限为0.1 mg/L（信噪比为10 ∶ 1）；以信噪比3 ∶ 1测得
（含 0.016％三乙胺，pH 为 9.8）（45 ∶ 55，V/V）；流速： 最低检测限为0.08 mg/L。
1 mL/min；检测波长：262 nm；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。 8 8
2.2 溶液的配制 6 6 2
2.2.1 青风藤碱标准溶液 精密称取青风藤碱对照品 mAU 4 mAU 4 1
10 mg于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成质量浓 2 2
度为1.0 mg/mL的对照品贮备液。取上述对照品贮备液 0 0
0 20 40 0 20 40
适量，用甲醇进一步稀释，制成质量浓度分别为1.0、5.0、 t，min t，min
10.0、15.0、25.0、40.0、50.0 mg/L 的青风藤碱系列标准溶 A.空白血浆 B.空白血浆+内标+青风藤碱
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液，于－20 ℃下密封保存，备用。
6
2.2.2 内标溶液 精密称取青藤碱对照品 10 mg 于 10 2
mAU 4 1
mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成质量浓度为 1.0
2
mg/mL的内标贮备液。取上述内标贮备液适量，用甲醇
0
进一步稀释，制成质量浓度为 100.0 mg/L 的内标溶液， 0 20 40
于－20 ℃下密封保存，备用。 t，min
C.雌性家兔给药后5 min的血浆样品
2.2.3 青风藤碱药液 精密称取青风藤碱原料药 250 注：1.内标；2.青风藤碱
mg 于 50 mL 量瓶中，加入 10％柠檬酸溶液 1 mL，超声 Note：1. internal standard；2. sinoacutine
（功率：400 W，频率：40 kHz）溶解，加生理盐水定容，制 图2 高效液相色谱图
成质量浓度为5 mg/mL的青风藤碱药液（现配现用）。 Fig 2 HPLC chromatograms
2.3 血浆样品的处理 2.4.3 精密度与准确度试验 分别按“2.4.2”项下方法
精密吸取血浆样品0.5 mL，加入100.0 mg/L内标溶 配制定量下限质量浓度（0.1 mg/L）血浆样品以及低、中、
液20 μL，涡旋3 min，加入乙酸乙酯3 mL，涡旋3 min，使 高质量浓度（0.2、2.5、4.0 mg/L，下同）的质控样品各 5
用四维旋转混合仪萃取 20 min 后，以 6 000 r/min 离心 份，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进
10 min；精密吸取上清液 2.4 mL，于 50 ℃水浴中以氮气 样分析，考察日内精密度；连续测定 3 d，考察日间精密
流吹干；残渣加入甲醇 150 μL 复溶，涡旋 3 min 后，以 度。同时，以实测质量浓度与理论质量浓度进行比较，
4 000 r/min 离心 10 min，取上清液，经 0.22 μm 微孔滤膜 考察准确度，结果见表1。
滤过，取续滤液20 μL，进样分析。 表1 精密度与准确度试验结果
2.4 方法学考察 Tab 1 Results of precision and accuracy tests
2.4.1 专属性 取空白血浆、空白血浆+内标（100.0 日内考察（n＝5） 日间考察（n＝15）
理论质量浓
mg/L）+青风藤碱（50.0 mg/L）、雌性家兔给药后5 min的 实测质量浓度 精密度RSD， 准确度， 实测质量浓度 精密度RSD， 准确度，
度，mg/L
血浆样品各适量，按“2.3”项下方法处理（其中，空白血浆 （x±s），mg/L ％ ％ （x±s），mg/L ％ ％
0.1 0.100±0.002 2.30 99.81±2.29 0.102±0.003 3.41 102.04±3.47
不加内标溶液）后，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记 0.2 0.205±0.012 5.96 102.37±6.11 0.200±0.016 8.23 99.80±8.21
录色谱图。结果，各待测物的理论板数均大于4 000；内 2.5 2.564±0.196 7.78 102.55±7.97 2.590±0.209 8.26 103.61±8.55
4.0 4.051±0.116 2.82 101.28±2.85 4.032±0.122 3.01 100.79±3.03
标与青风藤碱的保留时间分别约为20.8、24.3 min，呈基
2.4.4 提取回收率试验 按“2.4.2”项下方法配制低、
线分离，分离度大于 1.5，且血浆内源性物质无干扰，详
见图2。 中、高质量浓度的质控样品各 5 份，按“2.3”项下方法处
2.4.2 线性关系、定量下限及最低检测限考察 精密量 理后，再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录青风藤碱
取家兔空白血浆450 μL，分别加入“2.2.1”项下青风藤碱 与内标的峰面积比值（R1 ）；精密量取空白血浆适量，共5
系列标准溶液各50 μL，得质量浓度分别为0.1、0.5、1.0、 份，按“2.3”项下“精密吸取血浆样品 0.5 mL……精密吸
1.5、2.5、4.0、5.0 mg/L的青风藤碱系列血浆样品，按“2.3” 取上清液 2.4 mL”方法处理后，加入相应质量浓度的青
项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记 风藤碱标准溶液 50 μL，使最终质量浓度与上述质控样
录色谱图。以待测物质量浓度（x，mg/L）为横坐标、待测 品对应，以氮气流吹干，残渣用甲醇 150 μL 复溶，涡旋
物与内标的峰面积比值（y）为纵坐标进行线性回归，得 3 min后，以4 000 r/min离心10 min，取上清液滤过后，进
回归方程为 y＝0.504 5x－0.072 9（r＝0.999 5）。结果， 样分析，记录青风藤碱与内标的峰面积比值（R2 ）。提取
青风藤碱检测血药浓度的线性范围为0.1～5.0 mg/L，定 回收率＝（R1/R2 ）×100％，结果见表2。

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