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表2 提取回收率试验结果（n＝5） 死剂量（54.319 mg/kg）并按体表面积折算法换算而
Tab 2 Results of extraction recovery tests（n＝5） 得]。分别于给药前及给药后 5、10、15、30、45、60、90、
理论质量浓度，mg/L 提取回收率（x±s），％ RSD，％ 120、180、240 min 时于家兔耳缘静脉取血 1 mL，置于含
0.2 81.83±2.39 2.92 肝素钠的抗凝管中，以10 000 r/min离心10 min后，分离
2.5 80.01±5.12 6.39
4.0 84.02±4.71 5.61 上层血浆，按“2.3”项下方法处理后，再按“2.1”项下色谱
2.4.5 稳定性试验 按“2.4.2”项下方法配制低、中、高 条件进样分析，记录色谱图。采用内标法，按随行标准
质量浓度的质控样品各5份，分别于室温放置24 h、反复 曲线计算家兔血浆中青风藤碱的血药浓度，并采用
冻融（－20 ℃～室温）3 次、－80 ℃放置 2 周后，按“2.3” DAS 3.0软件绘制平均药-时曲线，并对上述平均药-时曲
项下方法处理，再按“2.1”项下色谱条件进样分析，记录 线数据进行分析，拟合房室模型，同时计算相关药动学
峰面积，以实测质量浓度与理论质量浓度的比值（即回 参数；采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析，数据以
收率）考察上述样品的稳定性，结果见表3。 x±s 表示，组间比较采用 t 检验，P＜0.05 为差异有统计
表3 稳定性试验结果（n＝5） 学意义，结果见图3、表4。
Tab 3 Results of stability tests（n＝5） 5.00
雌性
考察条件 理论质量浓度，mg/L 实测质量浓度（x±s），mg/L 回收率，％ RSD，％ 4.50 雄性
室温放置24 h 0.2 0.198±0.015 98.84±7.57 7.66 4.00
2.5 2.596±0.248 103.84±9.91 9.55 3.50
4.0 4.084±0.304 102.19±7.61 7.45 mg/L 3.00
反复冻融3次 0.2 0.214±0.024 107.05±12.06 11.26 c， 2.50
2.5 2.476±0.221 99.04±8.85 8.94 2.00
4.0 4.049±0.104 101.21±2.62 2.59 1.50
－80 ℃放置2周 0.2 0.202±0.008 101.22±4.40 4.35 1.00
2.5 2.566±0.113 102.65±4.53 4.41 0.50
4.0 4.017±0.157 100.44±3.93 3.92
0 50 100 150 200 250 300
2.5 药动学实验 t，min
将家兔按性别分组，每组 6 只。禁食、不禁水 12 h 图3 青风藤碱在家兔体内的平均药-时曲线
后，于家兔耳缘静脉单次注射“2.2.3”项下青风藤碱药液 Fig 3 Mean plasma concentration-time curves of sino-
5 mg/kg[参照本课题组前期所得小鼠静脉注射的半数致 acutine in rabbits
表4 青风藤碱在家兔体内的主要药动学参数（x±±s）
Tab 4 Main pharmacokinetic parameters of sinoacutine in rabbits（x±±s）
分布半衰期 消除半衰期 中央室表观分 周边室表观分 中央室清除 周边室清除率 药物从中央室消除 药物从中央室向周 药物从周边室向中
AUC0-t，
AUC0-∞，
动物 n （t1/2α）， （t1/2β）， 布容积（V1）， 布容积（V2）， 率（CL1）， （CL2）， mg·min/L mg·min/L 的一级速率常数 边室转运的一级速 央室转运的一级速
min min L/kg L/kg L/（min·kg） L/（min·kg） （k10），min －1 率常数（k12），min －1 率常数（k21），min －1
雌性家兔 6 11.48±1.84 141.27±25.03 2.38±0.57 4.19±0.94 0.041±0.009 0.074±0.020 203.39±37.28 311.61±94.33 0.016±0.003 0.032±0.008 0.018±0.002
雄性家兔 6 10.50±3.16 152.88±40.04 2.94±1.14 4.82±1.37 0.058±0.044 0.101±0.040 178.25±17.92 267.97±42.07 0.017±0.008 0.037±0.017 0.022±0.008
所有家兔 12 10.99±2.52 147.08±32.41 2.66±0.91 4.50±1.17 0.042±0.008 0.087±0.033 190.82±30.82 289.82±73.27 0.017±0.006 0.034±0.013 0.020±0.006
由图3、表4可知，家兔静脉注射青风藤碱后的药-时 85％，RSD 均小于 15％，其中以青藤碱的提取回收率最
曲线符合二室模型，不同性别家兔药动学参数比较，差 为稳定且相对较高；此外，青藤碱与青风藤碱的保留时
异均无统计学意义（P＞0.05）。所有家兔测得数据经处 间虽较为接近，但峰形和分离度均较好，有利于缩短检
理，t1/2α为（10.99±2.52）min，t1/2β为（147.08±32.41）min， 测所需时间，故最终选择青藤碱作为内标。
表明青风藤碱在家兔体内分布迅速、消除较快（t1/2β＜ 3.2 色谱条件的优化及血浆样品处理方法的筛选
3 h）。 本研究在 2015 年版《中国药典》（一部）青风藤中青
3 讨论 藤碱含量测定方法 [13] 的基础上对色谱条件进行了优
3.1 内标化合物的选择 化。结果发现，青风藤碱和青藤碱对流动相的比例和
本研究采用内标法检测了家兔血浆中青风藤碱的 pH 值非常敏感，最终本研究将色谱条件确定为甲醇-2
质量浓度。在前期内标化合物的筛选中，笔者以色谱峰 mmol/L 磷酸氢二钠水溶液（含 0.016％三乙胺，pH 为
峰形及提取回收率为指标，对克班宁、异克利定、荷叶 9.8）（45∶55，V/V）。在血浆样品处理方法的筛选过程中，
碱、光千金藤定碱、青藤碱等5种异喹啉类生物碱进行了 笔者分别尝试了蛋白直接沉淀法和液-液萃取法，先后
考察。结果显示，上述化合物的提取回收率为 67％～ 以甲醇、乙腈以及异丙醇、乙醚、氯仿、乙酸乙酯单独或
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