Page 34 - 2019年10月第30卷第19期
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A、B、C 各样品中总杂质含量分别为 0.016 9％、0.006％                 算 ，结果见表5。
                                                             [18]
        和 0.005％，B、C 药总杂质含量均低于原研药，2 个仿制                             表5 3个样品的急性毒性实验结果
        药与原研药在有关物质检查方面均符合质量标准。                                Tab 5 Results of acute toxicity tests of 3 samples
               表4 3个样品的含量测定结果（n＝3）                         厂家    剂量，mg/g  只数  死亡数    LD50 （95％置信区间），mg/kg  P（vs. A药）
        Tab 4 Results of content determination of 3 samples  A药   203.6  10    0     266.534（250.597～283.418）
                                                                  231.4  10    1
              （n＝3）
                                                                  263.0  10    5
        厂家      峰面积         含量，％       平均含量，％     RSD，％           298.9  10    8
        A药      1 664.199    98.23       97.95     0.25           339.7  10    10
                1 655.594    97.74                         B药     187.0  10    1     247.911（222.209～277.999）  0.162
                1 658.053    97.88                                212.5  10    3
        B药      1 611.962    95.25       95.44     0.23           250.0  10    5
                1 614.245    95.38                                277.8  10    7
                1 619.690    95.69                                308.7  10    8
        C药      1 629.334    96.24       96.50     0.23    C药     164.6  10    0     215.291（196.637～235.053）  0.124
                1 636.886    96.67                                187.0  10    3
                1 635.481    96.59                                212.5  10    6
        2.4 小鼠急性毒性实验                                              250.0  10    7
                                                                  277.8  10    9
        2.4.1  实验方法     采用 Bliss 法，进行小鼠急性毒性实
                                                               由表 5 可见，仿制药与原研药的小鼠急性毒性实验
        验 [14-16] 。首先对 A 药进行预实验，得出最大剂量和最小
                                                           结果（LD50 ）存在差别：266.534 mg/kg（A 药）＞247.911
        剂量范围。将小鼠随机分为 250.0、225.0、202.5、182.3
                                                           mg/kg（B 药）＞215.291 mg/kg（C 药）；但是，3 组间进行
        mg/kg 4 个 剂 量 组 ，组 间 距 r＝0.9，给 药 体 积 为 0.10
                                                           统计学分析时，差异未见统计学意义（P＞0.05）。
        mL/10 g，每组 10 只，尾静脉注射给药。182.3 mg/kg 和
                                                           2.4.4  小 鼠 的 急 性 毒 性 表 现     A 药 ：231.4 mg/kg 和
        202.5 mg/kg 这 2 个剂量组未见小鼠死亡，因此，最小剂
                                                           203.6 mg/kg剂量组给药后小鼠无任何异常表现；另外 3
        量基本可以确定在202.5 mg/kg（引起小鼠零死亡的较高
                                                           个剂量组中约70％的小鼠给药后立即出现四肢僵直，在
        剂量）。之后，将剂量调整为 202.5、225.0、250.0、276.0、
                                                           笼内窜动、惊叫，持续约 3 min，呈现兴奋性反应。B 药：
        309.0 mg/kg 继续给药，309.0 mg/kg 剂量仍不能致小鼠
                                                           各剂量组给药后有30％～80％小鼠表现为侧卧、四肢抽
        完全死亡，故仍需要升高剂量；最终，正式实验设定A药
                                                           搐、呼吸急促以及翻正反射消失，约 2 min 后恢复正常。
        的剂量组为203.6、231.4、263.0、298.9、339.7 mg/kg，组间
                                                           C药：各剂量组给药后有30％～70％小鼠表现为俯卧瘫
        距r＝0.88，给药体积为0.14 mL/10 g。同理，B药和C药
        按照上述方法进行预实验，B药采用187.0、212.5、250.0、                 软、全身轻微颤抖，约 5 min 后恢复正常；B、C 药均呈现
        277.8、308.7 mg/kg 5 个剂量组进行正式实验；C 药采用               抑制性反应。
        164.6、187.0、212.5、250.0、277.8 mg/kg 5 个剂量进行正       2.4.5  小鼠的体质量变化          实验前（0 d）A 药、B 药和 C
        式实验；对照组静脉注射同体积的生理盐水。正式实验                           药组小鼠的体质量，在组间和组内（每组的各剂量组间）
        时，每日取小鼠30只，随机分为3组，各组分别静脉注射                         比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。14 d 后小鼠的体
        最低剂量的A药、B药或C药，每日上午9：00给药；次日                        质量，仅 A 药 298.9 mg/kg 剂量组与对照组比较，体质量
        同法给予第二个剂量的A药、B药或C药，直至完成所有                          显著降低（P＝0.033）；其余各剂量组以及 B 药和 C 药各
        剂量的给药。每组实验后需记录14 d内小鼠的活动、体                         剂量组小鼠体质量与对照组比较，差异均无统计学意义
        质量及死亡数。观察期结束后，将存活小鼠处死，解剖                           （P＞0.05）。各组小鼠体质量比较见图2。
        主要脏器观察是否发生变化 。                                     2.5 3个样品原液给药后小鼠死亡情况比较
                                [17]
        2.4.2  统计学方法      应用SPSS 22.0软件进行统计学分                  尽管上述B药和C药的LD50值明显低于A药，但是
        析，采用 t 检验分别比较仿制药与原研药的半数致死量                         统计学分析结果显示3个样品的LD50值差异并无统计学
       （LD50 ）之间差异是否有统计学意义。单剂量一次性给                         意义（P＞0.05）。为了合理比较A、B、C 3个样品静脉注
        药的小鼠急性毒性试验结果，以死亡只数表示，采用χ 检                         射的毒性大小，笔者进一步做了A、B、C 3个样品原液单
                                                     2
        验分别比较仿制药与原研药组间的差异。小鼠体质量                            次静脉注射给药后小鼠死亡情况的比较实验。实验分3
       （g）变化数据采用实测值计算 x±s，多组间体质量均数                         批进行，每批取小鼠30只，♀♂各半，将小鼠随机分为3
        的比较采用单因素方差分析。以P＜0.05为差异具有统                         组，每组10只，各组分别尾静脉注射A药、B药或C药原
        计学意义。                                              液 。 综 合 A、B、C 3 药 的 LD50 值（依 次 为 266.534、
        2.4.3  小鼠的 LD50   采用 SPSS 22.0 软件的 Probit 回归       247.911、215.291 mg/kg），选取中间毒性的B药的LD50值
        法对急性毒性实验数据进行 LD50及 95％置信区间的计                       作为给药剂量更容易比较3个样品药物的毒性大小，因


        中国药房    2019年第30卷第19期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 19  ·2621  ·
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