Page 68 - 2019年9月第30卷第18期

1 ∶ 30（按药材原质量计）、提取时间为 60 min、提取次数 表3 正交试验设计与结果
为 1 次，分别在 60、70、80、90、100 ℃加热条件下进行回 Tab 3 Design and results of orthogonal tests
流提取，平行操作3次。按前述方法测定总多糖含量和 试验号 A B C D 综合评分
干膏得率，计算综合评分，结果见图 2B。由图 2B 可知， 1 1 1 1 1 9.11
2 1 2 2 2 9.40
当提取温度在60～80 ℃时，综合评分变化不大，趋于平 3 1 3 3 3 9.57
缓；当提取温度为80～100 ℃时，综合评分上升较快，在 4 2 1 2 3 9.13
5 2 2 3 1 9.16
100 ℃条件下综合评分达最高值（由于实验室条件有限，
6 2 3 1 2 9.19
未继续考察更高的温度）。综合以上因素，选择提取温 7 3 1 3 2 8.79
度为80～100 ℃进行后续正交试验考察。 8 3 2 1 3 8.47
9 3 3 2 1 9.24
3.1.3 提取时间的考察 称取金钗石斛和铁皮石斛粗
K1 9.360 9.013 8.923 9.172
粉混合物 8 g，提取总生物碱后取药渣，固定料液比为 K2 9.160 9.011 9.257 9.126
1 ∶ 30（按药材原质量计）、提取温度为 100 ℃、提取次数 K3 8.834 9.331 9.175 9.057
R 0.526 0.320 0.334 0.115
为1次，分别加热回流提取30、60、90、120、150 min，平行
表4 方差分析结果
操作3次。按前述方法测定总多糖含量和干膏得率，计
Tab 4 Results of variance analysis
算综合评分，结果见图2C。由图2C可知，当提取时间为
因素 离差平方和 自由度 F比 F临界值 P
90 min时，综合评分最高；虽然当提取时间在150 min以
A 0.423 2 21.150 19.000 ＜0.05
上时综合评分也有上升趋势，但考虑到时间成本和能源 B 0.204 2 10.200 19.000 ＞0.05
消耗，并未继续选择更长的提取时间进行比较。综合以 C 0.182 2 9.100 19.000 ＞0.05
D（误差） 0.020 2 1.000 19.000 ＞0.05
上因素，选择提取时间为 60～120 min 进行后续正交试
验考察。 学意义外，其余因素的影响均无统计学意义。综合考虑
3.1.4 提取次数的考察 称取金钗石斛和铁皮石斛粗 提取效率和试验条件等因素，结合单因素考察结果，确
粉混合物 8 g，提取总生物碱后取药渣，固定料液比为 定总多糖水提取工艺的最佳工艺条件为A1B3C2D1，即料
1 ∶ 30（按药材原质量计）、提取温度为 100 ℃、提取总时 液比为1 ∶ 25（g/mL）、提取温度为100 ℃、提取时间为90
间为90 min，分别加热回流提取1、2、3、4次，平行操作3 min、提取1次。
次。按前述方法测定总多糖含量和干膏得率，计算综合 3.2.2 验证试验 称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉混合
评分，结果见图2D。由图2D可知，当提取1～3次时，综 物8 g，提取总生物碱后取药渣，按“3.2.1”项下最佳工艺
合评分差异不大，但提取 4 次时综合评分有下降趋势。 条件进行水提取及干燥，平行操作3次。按前述方法测
综合以上因素，选择提取次数为1～3次进行后续正交试 定并计算水提物样品中的总多糖含量和干膏得率。结
验考察。 果，平均总多糖含量为 379.292 8 mg/g（RSD＝1.93％，
3.2 正交试验优化提取工艺 n＝3），平均干膏得率为 22.75％（RSD＝2.41％，n＝3），
3.2.1 正交试验考察 根据单因素试验结果，以料液比 表明优选水提取工艺条件稳定、合理、可行。
（A）、提取温度（B）、提取时间（C）、提取次数（D）为影响 4 讨论
因素，采用 L9 （3）正交表进行设计和试验，平行操作 3 多糖是一种结构复杂的生物大分子，是由多个单糖
4
次，按前述方法测定总多糖含量和干膏得率，计算综合 分子缩合形成糖苷键，并以糖苷键进行线性或分枝连接
评分，并以综合评分作为评价指标。因素与水平见表2， 而成的糖类化合物，是许多中药如灵芝、人参等中的活
正交试验设计与结果见表3，方差分析结果见表4。 性成分 。目前，多糖提取方法有加热提取法、微波提
[20]
表2 因素与水平 取法、超声波辅助水提法、酶解辅助提取法等 。但多
[21]
Tab 2 Factors and levels 糖经过超声或微波处理后其糖苷键可能会发生断裂；酶
水平 A，g/mL B，℃ C，min D，次 解辅助提取法虽然提取率较高，但酶反应条件要求严
1 1∶25 80 60 1
2 1∶30 90 90 2 格，会增加生产成本，且目前尚停留在实验室研究阶段，
[22]
3 1∶35 100 120 3 暂不能直接用于工厂规模化生产 。本研究采用的水
由表 3、表 4 可知，因素水平 A1B3C2D1对提取工艺影 提取法是目前最常用的多糖提取方法，工艺条件简单、
响相对较大，其中以离差平方和最小的因素项（D）为误 易控制。综合考虑石斛药材的昂贵价格，从降低生产成
差项进行方差分析，根据极值（R）大小，确定 A 因素（料 本的角度，本课题组对双斛胶囊的2种组方药材中的两
液比）对提取工艺的影响最大，各因素对综合评分影响 类主要成分采用先醇提取总生物碱，然后水提取总多糖
的顺序为 A＞C＞B＞D；除 A 因素对工艺的影响有统计 的步骤进行提取。本研究是在前期醇提取总生物碱的

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