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bp)大小接近,表明成功获得目标重组质粒,详见图 1 黄色葡萄球菌的抑制活性最明显。重组蛋白对4种常见
(注:重组表达质粒电泳图最上方条带是切下的载体片 细菌 MIC 和 MBC 的测定结果见表 2(注:“无杀菌作用”
段,下方条带是目的片段)。 是指各剂量组的细胞孔均有细菌生长)。
表1 重组蛋白对4种常见细菌的药敏试验结果(x±±s,
2 000 bp
1 000 bp n=3)
750 bp
Tab 1 Drug sensitivity test results degree of recombi-
500 bp
nant protein to 4 kinds of common bacteria
(x±±s,n=3)
250 bp
菌种 抑菌圈直径,mm 敏感度
金黄色葡萄球菌 11.38±0.63 中度
绿脓杆菌 6.04±0.26 低度
大肠杆菌 7.52±0.55 低度
100 bp
鼠伤寒沙门氏菌 4.01±0.74 低度
M 1
注:M. DNA Marker;1.经BamH I和Xho I双酶切的重组质粒 表 2 重组蛋白对 4 种常见细菌 MIC 和 MBC 的测定结
Note:M.DNA Marker;1. recombinant plasmid digested by BamH I
果(x±±s,n=3,mg/mL)
and Xho I Tab 2 Determination results MIC and MBC of recom-
图 1 pET32a(+)-GBA重组质粒双酶切鉴定电泳图 binant protein to 4 kinds of common bacteria
Fig 1 Double enzyme digestion identification electro-
phoresis of pET32a(+)- GBA recombinant plas- (x±±s,n=3,mg/mL)
菌种 MIC MBC
mid
金黄色葡萄球菌 50.00±5.00 138.33±12.58
3.2 重组蛋白的鉴定结果 绿脓杆菌 201.67±7.64 * -
所得重组蛋白(包涵体蛋白形式)经 SDS-PAGE 电 大肠杆菌 121.67±10.41 * -
鼠伤寒沙门氏菌 245.00±5.00 * -
泳和 Western blotting 法分析其表达蛋白和转膜回收蛋
注:与金黄色葡萄球菌比较,P<0.05;“-”表示无杀菌作用
*
白后显示,在近35 kDa处均出现一条明显的条带(见图2
Note:vs. Staphylococcus aureus, P<0.05;“-”means no steriliza-
*
箭头处),与预期基因序列表达蛋白分子量(14.5 kDa)和 tion effect
pET32a 上标签表达蛋白的分子量(17 kDa)之和(约 32 3.5 重组蛋白对金黄色葡萄球菌致小鼠死亡的影响
kDa)接近,表明成功获得目标重组蛋白,详见图2。 与空白对照组比较,细菌对照组小鼠死亡率显著升
116.0 kDa 高,达到100%,差异有统计学意义(P<0.01);与细菌对
66.2 kDa
照组比较,阳性药物组和重组蛋白高剂量组小鼠死亡率
45.0 kDa 均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05),且两组组
间差异无统计学意义(P>0.05);而重组蛋白中、低剂量
35.0 kDa
组小鼠死亡率与细菌对照组比较差异无统计学意义
25.0 kDa (P>0.05)。各组小鼠死亡率比较见表3。
表3 各组小鼠死亡率比较(n=10)
18.4 kDa
Tab 3 Comparison of mortality of mice in each group
14.4 kDa
(n=10)
M 1 2
注:M.蛋白 Marker;1.表达蛋白(SDS-PAGE 法获得);2.转膜回收 组别 剂量,g/kg 死亡例数,只 死亡率,%
蛋白(Western blotting法获得) 空白对照组 0 0
Note:M. protein marker;1. expressed protein(by SDS-PAGE);2. 细菌对照组 10 100 **
recovered protein by transfer membrane(by Western blotting) 阳性药物组 0.98 4 40 #
图2 目的蛋白鉴定电泳图 重组蛋白低剂量组 2.0 9 90
重组蛋白中剂量组 4.0 8 80
Fig 2 Electrophoresis of purpose protein identifica-
重组蛋白高剂量组 8.0 5 50 #
tion
**
注:与空白对照组比较, P<0.01;与细菌对照组比较,P<0.05
#
3.3 重组蛋白对4种常见细菌的药物敏感度检测结果 Note:vs. blank control group, * * P<0.01;vs. bacteria control
重组蛋白对金黄色葡萄球菌为中度敏感,对大肠杆 group,P<0.05
#
菌、绿脓杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均为低度敏感。重组蛋 4 讨论
白对4种常见细菌的药敏试验结果见表1。 在我国,银杏的药用价值早有记载。明代李时珍的
3.4 重组蛋白对4种常见细菌的MIC和MBC测定结果 《本草纲目》中载银杏有:“熟食温肺、益气、定喘嗽、缩小
重组蛋白对金黄色葡萄球菌的 MIC 值显著低于其 便、止白浊;生食降痰、消毒杀虫”之效。清代张璐璐的
他 3 种细菌,差异有统计学意义(P<0.05),提示其对金 《本经逢源》中载银杏果,又称白果,有降痰、清毒、杀虫
·2516 · China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 18 中国药房 2019年第30卷第18期