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目前，药用石斛属植物共有 40 多种，其中金钗石斛                      纯，水为超纯水。
        和铁皮石斛备受关注 。2015年版《中国药典》（一部）收                       1.3 药材
                          [7]
        录了金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl.）和铁皮石斛                  金钗石斛、铁皮石斛饮片由重庆市渝和堂药业有限
       （Dendrobium officinale Kimura et Migo），两者均具有益       公司提供，均产自云南，批号均为 20170801。两者经质
        胃生津、滋阴清热之功效 。石斛性甘、微寒，归肺、胃、肾                        检全部符合2015年版《中国药典》（一部、四部）“中药材
                            [8]
        经，为常用贵重药材，药用历史悠久，《神农本草经》将其                         与饮片”项下石斛和铁皮石斛的性状、鉴别及含量测定
        列为上品，可用于热病津伤、口干烦渴、胃阴不足和阴虚                          有关规定，以及“中药其他方法”项下浸出物测定、杂质
                            [9]
        火旺等多种病症的治疗 。现代药理学研究表明，石斛                           检查、灰分测定、二氧化硫残留量测定等有关规定。
        具有护肝、抗胃溃疡、降血糖、提高免疫力等作用                     [10-11] 。  2 双斛胶囊的总多糖含量测定
        上述药用历史和药理学成果均佐证了石斛可对ALD发                           2.1 溶液的制备
        挥治疗作用。金钗石斛和铁皮石斛的主要活性指标成                            2.1.1  对照品溶液       取葡萄糖对照品适量，精密称定，
                        [12]
        分为生物碱和多糖 ，石斛生物碱可缓解高脂血症大鼠                           加水制成质量浓度为 0.207 0 mg/mL 的对照品母液；取
        肝脏脂肪变性等症状         [13-14] ，而石斛多糖则在调节受酒精            该母液，以水逐级稀释成相应质量浓度的对照品溶液，
        影响的肝功能和脂质代谢等方面发挥着重要作用                      [15-16] ，  备用。
        这两类成分均对肝脏有一定的保护和调节作用，其药理                           2.1.2  供试品溶液       称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉混
        作用既存在差异又相互关联，从现代药理学角度推测两                           合物（按质量比1∶1混匀，过30目筛，以下同）8 g，置于圆
        者配伍可能会发挥协同功效。                                      底烧瓶中，按前期研究筛选的最佳醇提工艺提取总生物
                                                           碱（以下同）。取醇提后的药渣，加水回流提取（具体参
            基于中医辨证论治的整体观，不局限于某一客观指
                                                           数见本文后续正交试验优选水提取工艺），放冷，用少量
        标的改变，本课题组以金钗石斛和铁皮石斛的优势成分
                                                           水分次洗涤容器并用纱布过滤水提液和洗液；合并滤
        总生物碱和总多糖作为活性成分，通过现代提取和制剂
                                                           液，置于2 000 mL量瓶中，加水定容，摇匀；以3 500 r/min
        手段，制成一种对亚急性 ALD 具有改善作用的双斛胶
                                                           离心 15 min，移取上清液 1 mL，加入 5 倍体积的 80％乙
        囊。该制剂根据2015年版《中国药典》（一部）中成人日
                                                           醇，于4 ℃冷藏1 h后，再于4 ℃下以3 500 r/min离心15
              [8]
        服用量 ，将金钗石斛和铁皮石斛的用量均以 4 g（两种
                                                           min；取沉淀，用4倍体积的80％乙醇继续洗涤，以3 500
        药材质量比为 1 ∶ 1）进行配伍后提取制得。其提取工艺
                                                           r/min 离心 15 min，弃去上清液，重复操作 2 次；取沉淀，
        主要分为两个步骤：首先对金钗石斛和铁皮石斛的混合
                                                           加少量热水溶解，放冷，再加水定容至 10 mL，摇匀，
        物进行醇提取获得总生物碱成分，再将药渣进行水提取
                                                           即得。
        获得总多糖成分。本课题组前期已完成双斛胶囊总生
                                                           2.2  检测波长的选择
        物碱的醇提取工艺的优化（另文刊出），现以总多糖含量
                                                               取“2.1”项下制备的对照品溶液（0.124 2 mg/mL）和
        和干膏得率为指标，采用正交设计优化双斛胶囊总多糖
                                                           供试品溶液，采用硫酸-苯酚法            [8，17] 进行显色反应：向对照
        的水提取工艺，为该制剂的深入开发提供依据和参考。
                                                           品溶液或供试品溶液中加入 5％苯酚溶液 0.5 mL（临用
        1 材料
                                                           时配制），摇匀，再精密加入浓硫酸2.5 mL，摇匀；室温放
        1.1  仪器                                            置 5 min 后，置沸水浴中加热 20 min 进行显色反应，取
            BT125D 型十万分之一电子分析天平[赛多利斯科                      出，置于冰水浴中降温 5 min 终止反应。以水为空白溶
        学仪器（北京）有限公司]；FA2004N型电子天平（上海菁                      剂对照，采用紫外分光光度计在 400～600 nm 波长范围
        海仪器有限公司）；TU-1900型紫外-分光光度计（北京普                      内进行光谱扫描。结果，两种溶液均在488 nm波长处有
        析通用仪器有限公司）；AXTGL16M型高速冷冻离心机                        最大吸收峰，故选择488 nm作为测定波长，详见图1。
       （盐城市安信试验仪器有限公司）；HH-6 型数显恒温水                         2.3 方法学考察
        浴锅（上海上登实验设备有限公司）；FW135型中药材粉                        2.3.1  显色稳定性考察         称取金钗石斛和铁皮石斛粗
        碎机（天津泰斯特仪器有限公司）；XH-B 型旋涡混合器                        粉混合物 8 g，平行 3 份，提取总生物碱后取药渣，按
       （姜堰市康健医疗器具有限公司）；BCD-579WE 型冰箱                      “2.1.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下硫酸-
       （青岛海尔股份有限公司）。                                       苯酚法“加入 5％苯酚溶液 0.5 mL……置于冰水浴中降
        1.2 药品与试剂                                          温 5 min 终止反应”步骤处理，分别于处理完毕后第 0、
            葡萄糖对照品（中国食品药品检定研究院，批号：                         30、60、120、240 min 时，在 488 nm 波长处测定吸光度。
        0833-9501，纯度：100.0％）；无水乙醇（成都金山化学试                  结果显示，不同时间点样品吸光度的RSD为0.49％（n＝
        剂有限公司）；浓硫酸（国药集团化学试剂有限公司）；苯                         5），表明供试品溶液在显色后的240 min内稳定。
        酚（上海阿拉丁生化股份有限公司）；其余试剂均为分析                          2.3.2  线性关系考察        精密量取“2.1.1”项下对照品母


        中国药房    2019年第30卷第18期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 18  ·2509  ·
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