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目前,药用石斛属植物共有 40 多种,其中金钗石斛 纯,水为超纯水。
和铁皮石斛备受关注 。2015年版《中国药典》(一部)收 1.3 药材
[7]
录了金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)和铁皮石斛 金钗石斛、铁皮石斛饮片由重庆市渝和堂药业有限
(Dendrobium officinale Kimura et Migo),两者均具有益 公司提供,均产自云南,批号均为 20170801。两者经质
胃生津、滋阴清热之功效 。石斛性甘、微寒,归肺、胃、肾 检全部符合2015年版《中国药典》(一部、四部)“中药材
[8]
经,为常用贵重药材,药用历史悠久,《神农本草经》将其 与饮片”项下石斛和铁皮石斛的性状、鉴别及含量测定
列为上品,可用于热病津伤、口干烦渴、胃阴不足和阴虚 有关规定,以及“中药其他方法”项下浸出物测定、杂质
[9]
火旺等多种病症的治疗 。现代药理学研究表明,石斛 检查、灰分测定、二氧化硫残留量测定等有关规定。
具有护肝、抗胃溃疡、降血糖、提高免疫力等作用 [10-11] 。 2 双斛胶囊的总多糖含量测定
上述药用历史和药理学成果均佐证了石斛可对ALD发 2.1 溶液的制备
挥治疗作用。金钗石斛和铁皮石斛的主要活性指标成 2.1.1 对照品溶液 取葡萄糖对照品适量,精密称定,
[12]
分为生物碱和多糖 ,石斛生物碱可缓解高脂血症大鼠 加水制成质量浓度为 0.207 0 mg/mL 的对照品母液;取
肝脏脂肪变性等症状 [13-14] ,而石斛多糖则在调节受酒精 该母液,以水逐级稀释成相应质量浓度的对照品溶液,
影响的肝功能和脂质代谢等方面发挥着重要作用 [15-16] , 备用。
这两类成分均对肝脏有一定的保护和调节作用,其药理 2.1.2 供试品溶液 称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉混
作用既存在差异又相互关联,从现代药理学角度推测两 合物(按质量比1∶1混匀,过30目筛,以下同)8 g,置于圆
者配伍可能会发挥协同功效。 底烧瓶中,按前期研究筛选的最佳醇提工艺提取总生物
碱(以下同)。取醇提后的药渣,加水回流提取(具体参
基于中医辨证论治的整体观,不局限于某一客观指
数见本文后续正交试验优选水提取工艺),放冷,用少量
标的改变,本课题组以金钗石斛和铁皮石斛的优势成分
水分次洗涤容器并用纱布过滤水提液和洗液;合并滤
总生物碱和总多糖作为活性成分,通过现代提取和制剂
液,置于2 000 mL量瓶中,加水定容,摇匀;以3 500 r/min
手段,制成一种对亚急性 ALD 具有改善作用的双斛胶
离心 15 min,移取上清液 1 mL,加入 5 倍体积的 80%乙
囊。该制剂根据2015年版《中国药典》(一部)中成人日
醇,于4 ℃冷藏1 h后,再于4 ℃下以3 500 r/min离心15
[8]
服用量 ,将金钗石斛和铁皮石斛的用量均以 4 g(两种
min;取沉淀,用4倍体积的80%乙醇继续洗涤,以3 500
药材质量比为 1 ∶ 1)进行配伍后提取制得。其提取工艺
r/min 离心 15 min,弃去上清液,重复操作 2 次;取沉淀,
主要分为两个步骤:首先对金钗石斛和铁皮石斛的混合
加少量热水溶解,放冷,再加水定容至 10 mL,摇匀,
物进行醇提取获得总生物碱成分,再将药渣进行水提取
即得。
获得总多糖成分。本课题组前期已完成双斛胶囊总生
2.2 检测波长的选择
物碱的醇提取工艺的优化(另文刊出),现以总多糖含量
取“2.1”项下制备的对照品溶液(0.124 2 mg/mL)和
和干膏得率为指标,采用正交设计优化双斛胶囊总多糖
供试品溶液,采用硫酸-苯酚法 [8,17] 进行显色反应:向对照
的水提取工艺,为该制剂的深入开发提供依据和参考。
品溶液或供试品溶液中加入 5%苯酚溶液 0.5 mL(临用
1 材料
时配制),摇匀,再精密加入浓硫酸2.5 mL,摇匀;室温放
1.1 仪器 置 5 min 后,置沸水浴中加热 20 min 进行显色反应,取
BT125D 型十万分之一电子分析天平[赛多利斯科 出,置于冰水浴中降温 5 min 终止反应。以水为空白溶
学仪器(北京)有限公司];FA2004N型电子天平(上海菁 剂对照,采用紫外分光光度计在 400~600 nm 波长范围
海仪器有限公司);TU-1900型紫外-分光光度计(北京普 内进行光谱扫描。结果,两种溶液均在488 nm波长处有
析通用仪器有限公司);AXTGL16M型高速冷冻离心机 最大吸收峰,故选择488 nm作为测定波长,详见图1。
(盐城市安信试验仪器有限公司);HH-6 型数显恒温水 2.3 方法学考察
浴锅(上海上登实验设备有限公司);FW135型中药材粉 2.3.1 显色稳定性考察 称取金钗石斛和铁皮石斛粗
碎机(天津泰斯特仪器有限公司);XH-B 型旋涡混合器 粉混合物 8 g,平行 3 份,提取总生物碱后取药渣,按
(姜堰市康健医疗器具有限公司);BCD-579WE 型冰箱 “2.1.2”项下方法制备供试品溶液,再按“2.2”项下硫酸-
(青岛海尔股份有限公司)。 苯酚法“加入 5%苯酚溶液 0.5 mL……置于冰水浴中降
1.2 药品与试剂 温 5 min 终止反应”步骤处理,分别于处理完毕后第 0、
葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院,批号: 30、60、120、240 min 时,在 488 nm 波长处测定吸光度。
0833-9501,纯度:100.0%);无水乙醇(成都金山化学试 结果显示,不同时间点样品吸光度的RSD为0.49%(n=
剂有限公司);浓硫酸(国药集团化学试剂有限公司);苯 5),表明供试品溶液在显色后的240 min内稳定。
酚(上海阿拉丁生化股份有限公司);其余试剂均为分析 2.3.2 线性关系考察 精密量取“2.1.1”项下对照品母
中国药房 2019年第30卷第18期 China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 18 ·2509 ·