Page 67 - 2019年9月第30卷第18期

表1 加样回收率试验结果（n＝6）
0.5 488 nm
Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）
0.4
称样量， 样品含量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回 RSD，
488 nm
0.3 g mg mg mg ％ 收率，％ ％
吸光度 4.003 2 1 665.249 6 1 663.920 0 3 326.380 0 99.83
0.2
4.002 3 1 664.873 6 1 663.920 0 3 340.632 0 100.71
4.008 5 1 667.452 6 1 663.920 0 3 278.196 8 96.80
0.1 A 98.65 1.45
4.008 8 1 667.577 4 1 663.920 0 3 307.378 0 98.55
0 B 4.009 3 1 667.785 4 1 663.920 0 3 316.540 0 99.09
4.004 4 1 665.747 2 1 663.920 0 3 276.060 8 96.89
400 450 500 550 600
波长，nm 3 双斛胶囊的总多糖提取工艺优化
注：A.对照品溶液；B.供试品溶液
Note：A. solution control；B. test sample 3.1 提取工艺的单因素考察
图1 紫外扫描图 参照文献方法 [18-19] 并结合预试验结果，本研究以综
Fig 1 UV scanning spectra 合评分法（以总多糖含量和干膏得率计算）进行单因素
液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分别置于刻度试管中，以水 试验。总多糖含量测定按“2”项下方法进行。取按
“2.1.2”项下方法提取获得的总多糖水提液样品200 mL，
稀释至 0.5 mL，制成葡萄糖质量浓度分别为 0.041 4、
置于 105 ℃恒质量的蒸发皿中，90 ℃水浴蒸干，然后在
0.082 8、0.124 2、0.165 6、0.207 0 mg/mL 的系列对照品
105 ℃烘箱中干燥 3 h，再转移至干燥器中冷却 30 min，
溶液，按“2.2”项下硫酸-苯酚法进行显色反应。以水为
称定质量并计算干膏得率。设定总多糖含量权重为 7
空白溶剂对照，在488 nm波长处测定吸光度。以葡萄糖
分、干膏得率权重为3分（合计10分）依据，按公式计算综
质量浓度（X，mg/mL）为横坐标、吸光度值（Y）为纵坐标
合评分：综合评分＝（总多糖含量/总多糖含量最大值）×
进行线性回归，得回归方程为 Y＝3.929 4X+0.001（r＝
7+（干膏得率/干膏得率最大值）×3。
0.999 9）。结果表明，葡萄糖质量浓度在0.041 4～0.207 0 3.1.1 料液比的考察 称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉
mg/mL范围内与吸光度的线性关系良好。 混合物 8 g，提取总生物碱后取药渣，固定提取温度为
2.3.3 精密度试验 称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉混 90 ℃、提取时间为 60 min、提取次数为 1 次，按药材的
合物8 g，提取总生物碱后取药渣，按“2.1.2”项下方法制 原质量分别以料液比1∶25、1∶30、1∶35、1∶40、1∶45（g/mL，

备供试品溶液，于4 ℃保存。分别于3个不同工作日和 下同）加水，进行加热回流提取，平行操作3次。按前述
每个工作日第 0、4、8、12、24 h 时，取该供试品溶液，按 方法测定总多糖含量和干膏得率，计算综合评分，结果
“2.2”项下硫酸-苯酚法处理后测定，并以外标法计算总 见图 2A。由图 2A 可知，综合评分在料液比为 1 ∶ 25～
多糖含量，分别考察日间与日内精密度。结果，总多糖 1 ∶ 30范围内时呈上升趋势，且在料液比为1∶30时达到最
大值，随后呈下降趋势。综合以上因素，选择料液比为
含 量 日 间 RSD 为 8.24％（n＝3），日 内 RSD 分 别 为
1 ∶ 25～1 ∶ 35 进行后续正交试验考察。
3.61％、7.50％、5.05％（n＝5），表明供试品溶液在日间
10.5 10.0
（1～3 d）和日内（0～24 h）均较不稳定，故该供试品溶液
10.0 9.5
需现配现用。 综合评分 9.5 综合评分 9.0
9.0
2.3.4 重复性试验 称取金钗石斛和铁皮石斛粗粉混 8.5 8.5
8.0 8.0
合物8 g，平行6份，提取总生物碱后取药渣，按“2.1.2”项 7.5 7.5
1∶25 1∶30 1∶35 1∶40 1∶45 60 70 80 90 100
下方法制备供试品溶液，再按“2.2”项下硫酸-苯酚法处 料液比，g/mL 提取温度，℃
A.料液比 B.提取温度
理后测定，以外标法计算总多糖含量。结果，总多糖含 10.5 10.5
量的RSD为1.49％（n＝6），表明该方法的重复性良好。 10.0 10.0
综合评分 9.5 综合评分 9.5
2.3.5 加样回收率试验 称取金钗石斛和铁皮石斛粗
粉混合物4 g，平行6份，提取总生物碱后取药渣，分别加 9.0 9.0
8.5 8.5
入16.639 2 mg/mL的葡萄糖对照品浓溶液（按“2.1.1”项 30 60 90 120 150 1 2 3 4
提取时间，min 提取次数，次
下对照品母液配制方法新配）100 mL，按“2.1.2”项下方 C.提取时间 D.提取次数
法制备供试品溶液，再按“2.2”项下硫酸-苯酚法处理后 图2 不同因素对提取效果的影响
测定，以外标法计算总多糖含量及加样回收率。结果， Fig 2 Effects of different factors on extraction
样品中总多糖的平均加样回收率为 98.65％，RSD 为 3.1.2 提取温度的考察 称取金钗石斛和铁皮石斛粗
1.45％（n＝6），表明该方法准确度良好，详见表1。 粉混合物 8 g，提取总生物碱后取药渣，固定料液比为

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