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质量浓度分别为 202.80、202.00 μg/mL 的混合对照品 条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见
溶液。 表1。
2.1.3 供试品溶液的制备 取药材样品适量，粉碎后过 表1 加样回收率试验结果（n＝6）
筛（目数参考最优工艺），精密称取 300.0 g，置于电磁裂 Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）
解仪中，按设定的试验条件加入一定比例的水提取，滤 已知样品含量， 加入量， 测得量， 加样回收率， 平均加样回收率， RSD，
待测成分
过，取滤液 3.0 mL，60 ℃挥干，置于 10 mL 量瓶中，加甲 mg mg mg ％ ％ ％
柴胡皂苷a 0.084 3 0.085 0 0.170 6 101.53 100.63 1.80
醇溶解并定容，摇匀，即得。
0.084 1 0.085 0 0.171 2 102.47
2.1.4 阴性溶液 以甲醇为阴性溶液。 0.084 9 0.085 0 0.171 5 101.88
0.084 7 0.085 0 0.170 6 101.06
2.1.5 线性关系考察 分别精密吸取“2.1.2”项下混合
0.084 2 0.085 0 0.167 7 98.23
对照品溶液2.5、4.0、5.5、7.0、8.5、10.0 mL，置于10 mL量 0.083 8 0.085 0 0.167 6 98.59
瓶中，加甲醇定容，即得柴胡皂苷 a 质量浓度分别为 柴胡皂苷d 0.113 1 0.111 8 0.223 9 99.11 100.38 1.60
0.112 7 0.111 8 0.223 2 98.84
50.70、81.12、111.54、141.96、172.38、202.80 μg/mL，柴胡
0.113 4 0.111 8 0.225 7 102.06
皂苷 d 质量浓度分别为 50.50、80.80、111.10、141.40、 0.113 2 0.111 8 0.226 7 101.52
171.70、202.00 μg/mL 的系列线性关系工作溶液。取适 0.113 0 0.111 8 0.226 9 101.88
0.112 9 0.111 8 0.223 4 98.84
量，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，以质量浓度（x，
2.1.11 样 品 含 量 测 定 取 药 材 样 品 粉 末 适 量 ，按
μg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱
柴胡皂苷a回归方程为y＝5.694 7x+6.221 4（r＝0.999 9），
条件进样测定，平行操作3次，记录峰面积并按标准曲线
柴胡皂苷d回归方程为y＝5.766 9x+4.492 9（r＝0.999 9），
法计算样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。结果，柴
表明柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 检测质量浓度的线性范围
胡皂苷 a 的含量为 2.48～3.64 mg/g、柴胡皂苷 d 的含量
分别为50.70～202.80、50.50～202.00 μg/mL。
为3.34～4.74 mg/g。
2.1.6 定量限与检测限考察 精密量取“2.1.2”项下混
2.2 柴胡水提液中柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 总提取率
合对照品溶液适量，加甲醇倍比稀释，按“2.1.1”项下色
的测定
谱条件进样测定，以信噪比10 ∶ 1、3 ∶ 1分别计算定量限、
取药材样品粉末适量，按“2.1.3”项下方法制备供试
检测限。结果，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的定量限分别为
品溶液，再按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面
0.16、0.13 μg/mL，检测限分别为0.05、0.04 μg/mL。
积并计算柴胡皂苷a与柴胡皂苷d的总提取率（Y）。Y＝
2.1.7 精密度试验 取“2.1.2”项下混合对照品溶液 10
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（C×n×V）/（L×W） ，式中 C 为柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d 质
μL，按“2.1.1”项下色谱条件连续进样测定 6 次，记录峰
面积。结果，柴胡皂苷a、柴胡皂苷d峰面积的RSD分别 量浓度之和，n为稀释体积，V为提取液总体积，L为供试
为0.5％、0.3％（n＝6），表明仪器精密度良好。 品溶液体积，W为样品质量。
2.1.8 稳定性试验 取“2.1.3”项下供试品溶液 10 μL， 2.3 单因素试验
分别于室温下放置0、3、6、12、24 h时按“2.1.1”项下色谱 2.3.1 提取次数对柴胡皂苷 a 与柴胡皂苷 d 总提取率
条件进样测定，记录峰面积。结果，柴胡皂苷 a、柴胡皂 （以下简称“总提取率”）的影响 取药材样品粉末，共 5
苷d峰面积的RSD分别为1.1％、1.0％（n＝5），表明供试 份，每份约300.0 g，以水为提取溶剂，在提取时间3 min，
品溶液于室温下放置24 h内稳定性良好。 料液比1 ∶ 25（g/mL），样品过60目筛条件下，考察不同提
2.1.9 重复性试验 取药材样品粉末，共 6 份，每份约 取次数（1、2、3、4、5 次）对总提取率的影响，结果见图
300.0 g，按“2.1.3”项 下 方 法 制 备 供 试 品 溶 液 ，再 按 3A。由图3A可见，随着提取次数的增加，虽然在提取3
“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按标准曲 次时总提取率为最高，但与其余几次比较无明显差异，
线法计算样品中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。结果，柴 综合考虑节能、省时、经济等因素，故选择提取次数为 1
胡皂苷a、柴胡皂苷d的平均含量为2.80、3.69 mg/g，RSD 次。其原因可能为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d在提取1次时
分别为0.4％、0.5％（n＝6），表明该方法重复性良好。 已基本被提取出来，此时再增加提取次数，总提取率增
2.1.10 加样回收率试验 精密称取已知含量的药材样 加不明显。
品粉末，过筛，共 6 份，每份约 150.0 g，分别精密加入一 2.3.2 提取时间对总提取率的影响 取药材样品粉末，
定量的混合对照品溶液 1.5 mL（含柴胡皂苷 a 质量浓度 共 5 份，每份约 300.0 g，以水为提取溶剂，在提取次数 1
56.64 μg/mL、柴胡皂苷 d 质量浓度 74.53 μg/mL），按 次，料液比 1 ∶ 25（g/mL），样品过 60 目筛条件下，考察不
“2.1.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1.1”项下色谱 同提取时间（1、2、3、4、5 min）对总提取率的影响，结果
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