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别、检查（杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分、重金属、黄                         2 方法与结果
        曲霉毒素）、水溶性浸出物等质控项目，尚未收载地龙含                           2.1 地龙药材中次黄嘌呤、肌苷的含量测定
        量测定及指纹图谱检测方法，不能全面地控制其质量。                            2.1.1  色谱条件     色谱柱为Purospher STAR RP-18 end-
        虽然也有学者对地龙中的多种成分同时进行了定量分                             capped（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-水
        析 [12-13] ，但仍无法从整体角度评价地龙的质量。中药指                    （B）（V/V），梯度洗脱；流速为1 mL/min；检测波长为248
        纹图谱具有整体性、相似性的特点，能突出中药的完整                            nm；柱温为 30 ℃；进样量为 20 μL。梯度洗脱程序见
        面貌，可依据相似度的特点实现对中药内在化学成分的                            表2。
        综合评价和整体质量的全面控制。基于此，本研究在                                            表2 梯度洗脱程序
        2015年版《中国药典》（一部）现有质量标准基础上，增加                                 Tab 2 Gradient elution procedure
        以核苷类成分次黄嘌呤、肌苷为定量指标，建立高效液                                时间，min            A（甲醇），％           B（水），％
        相色谱（HPLC）定量法，并建立地龙药材的 HPLC 指纹                             0                  1                99
        图谱，旨在为提高地龙药材的质量标准提供一定参考。                                  10                 1                99
                                                                  25                10                90
        1 材料                                                      30                10                90
        1.1 仪器                                                    35                75                25
            1260 型 HPLC 仪 ，包 括 G1311B 型 四 元 梯 度 泵 、         2.1.2  对照品贮备液的制备          称取次黄嘌呤、肌苷对照
        G1316A 型 柱 温 箱 、G1315D 型 二 极 管 阵 列 检 测 器 、          品适量，精密称定，加 0.9％氯化钠注射液分别制成每 1
        G1328A 型手动进样器（美国 Agilent 公司）；MS105DU                mL 含次黄嘌呤 31.6 μg、肌苷 110.4 μg 的单一溶液，
        型电子分析天平[梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公                          即得。
        司]；XB320M 型电子天平（上海双旭电子有限公司）；                        2.1.3  供试品溶液的制备         称取样品粉末（过 24 号筛）
        FW-80型高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；                         约 1.0 g，精密称定，置于圆底烧瓶中，精密加入 0.9％氯
        SMART 型超纯水机（力康生物医疗科技控股有限公                           化钠注射液50 mL，称定质量，加热回流90 min，放冷，再
        司）。                                                 次称定质量，用0.9％氯化钠注射液补足减失的质量，摇
        1.2  药品与试剂                                          匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
            本研究收集了广西、广东、海南等不同产地的共 15                        2.1.4  系统适用性试验        分别取上述对照品贮备液、供
        批地龙药材，经湖北中医药大学陈科力教授鉴定为钜蚓                            试品溶液适量，按“2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录
        科动物 P. aspergillum（E. Perrier）的干燥体；次黄嘌呤对            色谱。结果，理论板数以次黄嘌呤峰计＞6 000，基线分
        照品（上海源叶生物科技有限公司，批号：TM0313-                          离良好，待测成分与相邻峰间的分离度＞1.5。色谱图见
        XC13，纯度：98％）；肌苷对照品（中国食品药品检定研                        图1。
        究院，批号：140669-201606，纯度：98.6％）；甲醇（美国                 2.1.5  线性关系考察        精密量取“2.1.2”项下两种对照
        Tedia公司，色谱纯）；0.9％氯化钠注射液（江西科伦药业                      品贮备液各0.5、1、2、4、6、8、10 mL，分别置于不同10 mL
        有限公司，批号：D18102302-2）；其他试剂均为分析纯，                     量瓶中，用 0.9％氯化钠注射液定容至刻度，摇匀，按
        水为超纯水。15批地龙药材收集情况见表1。                              “2.1.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积
                  表1 15批地龙药材的收集情况                           为纵坐标（y）、对照品质量浓度为横坐标（x）绘制标准曲
             Tab 1  Collection of 15 batches of Pheretima   线。结果，次黄嘌呤的回归方程为 y＝87.562x+5.132 7
        编号      批号         产地             来源               （r＝0.999 9），肌苷的回归方程为 y＝54.066x－59.291
         1      170704     广西             蕲春药材市场           （r＝0.999 8）。结果表明，次黄嘌呤、肌苷分别在检测质
         2      170801     广西             亳州药材市场
         3      170802     广西             亳州药材市场            量浓度为 1.58～31.6、5.52～110.4 μg/mL 范围内与其各
         4      170803     海南             亳州药材市场            自峰面积线性关系良好。
         5      170804     海南             亳州药材市场
         6      170805     广西             亳州药材市场            2.1.6  定量限与检测限考察           取“2.1.2”项下两种对照
         7      170806     海南             亳州药材市场            品贮备液适量，倍比稀释，按“2.1.1”项下色谱条件进样
         8      170810     广西             蕲春药材市场            测定，以信噪比为 10 ∶ 1 和 3 ∶ 1 分别计算定量限和检测
         9      170811     广西             蕲春药材市场
        10      170812     海南             蕲春药材市场            限。结果，次黄嘌呤、肌苷的定量限分别为0.316 、0.552
        11      171102     广西             健民药业集团股份有限公司      μg/mL，检测限分别为0.158、0.110 μg/mL。
        12      171103     广西             健民药业集团股份有限公司      2.1.7  精密度试验      精密吸取“2.1.2”项下次黄嘌呤、肌
        13      171201     广西             健民药业集团股份有限公司
        14      180101     广西             健民药业集团股份有限公司      苷对照品贮备液 2、4 mL，置于不同 10 mL 量瓶中，分别
        15      180401     广东             健民药业集团股份有限公司      用0.9％氯化钠注射液稀释至刻度，即得次黄嘌呤、肌苷


        ·2380  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 17                                中国药房    2019年第30卷第17期
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