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司的Purospher STAR RP-18 endcapped色谱柱(250 mm× 地、批次样品设计相关试验进一步研究。本研究基于
4.6 mm,5 μm)对本品进行分析。结果采用 ZORBAX 2015年版《中国药典》(一部)现有的地龙药材质量标准,
SB-C18色谱柱时,次黄嘌呤、肌苷色谱峰都存在拖尾现 增加了对地龙中次黄嘌呤、肌苷含量测定和HPLC指纹
象;采用 Sapphire-C18 色谱柱和 Purospher STAR RP-18 图谱鉴别方法,且建立的方法操作简便、重复性好,提升
endcapped 色谱柱时,对供试品溶液各色谱峰的分离效 了地龙药材质量标准,对提高地龙药材的质量具有重要
果相对良好,但Sapphire-C18色谱柱不适合长时间用纯水 的意义。
相洗脱,故最终采用 Purospher STAR RP-18 endcapped 参考文献
色谱柱进行试验。在考察不同流动相的组成时,笔者选 [ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S]. 2015年
用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液、甲 版.北京:中国医药科技出版社,2015:122-123.
醇-10 mmol/L乙酸铵溶液等4种流动相系统进行梯度洗 [ 2 ] 吴普.神功本草经:第三卷[M].北京:人民卫生出版社,
脱。分析图谱发现,有机相选择甲醇更适合分离,当水 1963:123.
[ 3 ] 苏颂.图经本草(辑复本)[M].福州:福建科技出版社,
相为5 mmol/L乙酸铵溶液或10 mmol/L乙酸铵溶液时,
1988:463.
对色谱峰峰形、分离度并没有显著的改善,因此最终选
[ 4 ] 杨新,刘欣,万明,等.地龙抗凝血活性物质研究进展[J].
择甲醇-水流动相系统。此外,笔者还考察了不同柱温
江汉大学学报(自然科学版),2017,45(1):83-88.
(25、30、35 ℃)对分离度、峰形等的影响,结果当柱温为
[ 5 ] 利红宇,李钟,黄艳玲,等.不同炮制的广地龙平喘化痰止
30 ℃时,各峰分离度最好,因此选择柱温为30 ℃。本研 咳药效比较[J].时珍国医国药,2010,21(6):1464-1465.
究与现有报道 [14-15] 相比,选用甲醇和水为流动相,不仅可 [ 6 ] 唐鼎,凃乾,李娟,等.药用地龙的药理作用和临床研究进
达到较好的分离效果,在 35 min 内全部出峰,还可避免 展[J].中国药师,2015,18(6):1016-1019.
缓冲盐使用不当对色谱柱的影响。 [ 7 ] 孙姹,张长林.地龙的药理与临床研究概况[J].食品与药
3.2 供试品溶液制备方法的考察 品,2011,13(11):444-446.
在前期研究中,笔者分别对供试品溶液制备过程中 [ 8 ] 张晓晨.地龙药理与临床研究进展[J].中成药,2011,33
的提取溶剂、提取方法以及溶剂用量等进行了考察。(1) (9):1574-1578.
提取溶剂的考察:根据文献报道,不同溶剂用于核苷类成 [ 9 ] 杜航,孙佳明,郭晓庆,等.地龙的化学成分及药理作用
分提取效果依次为甲醇<80%甲醇<40%甲醇<30% [J].吉林中医药,2014,34(7):707-709.
[10] HASKO G,SITKOVSKY MV,SZABO C. Immunomodu-
甲醇<20%甲醇<10%甲醇<纯水,以 0.9%氯化钠注
latory and neuroprotective effects of inosine[J]. Trends
射液为提取溶剂时的色谱峰比以 95%、75%、50%及
Pharmacol Sci,2004,25(3):152-157.
25%甲醇为提取溶剂时更多 [16-17] 。在此研究背景下,本
[11] FUKUMORI Y,MAEDA N,TAKEDA H,et al. Serum
研究在供试品溶液制备中分别考察了以0.9%氯化钠注 glucose and insulin response in rats administered with su-
射液和水为溶剂的提取效果。结果显示,与以水为提取 crose or starch containing adenosine,inosine or cytosine
溶剂时比较,以 0.9%氯化钠注射液为提取溶剂时测得 [J]. Biosci Biotech Bioch,2000,64(2):237-243.
的地龙药材中次黄嘌呤和肌苷含量均更高,故最终以 [12] 周恒,曹依敏,苗水,等. HPLC法测定沪地龙中7个核苷
0.9%氯化钠注射液为提取溶剂进行供试品溶液的制 类成分的含量[J].药物分析杂志,2018,38(1):97-103.
备。(2)提取方法的考察:笔者考察了超声提取法和加热 [13] 张彬,李倩,党爱华. HPLC 法同时测定赤子爱胜蚓药材
[18]
回流提取法 的提取效果。结果,与超声提取法相比, 中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、腺苷的含量[J].中国
加热回流提取法提取得到的次黄嘌呤和肌苷含量相对 药房,2016,27(12):1692-1694.
[14] 姜文红,张清波.地龙 HPLC 指纹图谱分析方法的研究
较高;改变回流提取时间(30、60、90、120 min),发现在提
[J].中医药学报,2006,34(6):13-14.
取90 min时待测物提取含量达到最高,故最终选择采用
[15] 吴文如,李薇,赖小平. HPLC 法测定不同产地地龙中尿
加热回流提取90 min。(3)溶剂用量的考察:笔者还考察
嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量[J].中国药师,2011,
了不同溶剂用量(25、50、100 mL)的提取效果。结果,当
14(7):914-917.
溶剂用量为 50、100 mL 时,待测物提取含量无明显差
[16] 明凯利,向阳,杨艳霞,等.小金胶囊的HPLC指纹图谱建
异,从经济角度出发,选择溶剂用量为50 mL。故最终采 立及主成分分析[J].中国药房,2019,30(2):188-192.
用 0.9%氯化钠注射液 50 mL 加热回流提取 90 min 的方 [17] 曹文杰. HPLC法测定复方地龙胶囊中尿嘧啶、次黄嘌呤
法作为供试品溶液的制备方法。 和肌苷的含量[J].北方药学,2015,12(9):5-6.
本研究结果显示,15批地龙药材中肌苷的含量均高 [18] 黄帅,徐风,杨平,等.地龙的 HPLC 特征图谱研究[J].中
于次黄嘌呤,各地、各批次地龙药材中次黄嘌呤和肌苷 国药房,2015,26(21):2971-2974.
的含量差异较大,且未见明显规律,这可能与其生存环 (收稿日期:2019-03-19 修回日期:2019-07-24)
(编辑:林 静)
境、产地、采收时间有关,具体原因有待后期采集更多产
中国药房 2019年第30卷第17期 China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 17 ·2383 ·