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司的Purospher STAR RP-18 endcapped色谱柱(250 mm×        地、批次样品设计相关试验进一步研究。本研究基于
        4.6 mm,5 μm)对本品进行分析。结果采用 ZORBAX                    2015年版《中国药典》(一部)现有的地龙药材质量标准,
        SB-C18色谱柱时,次黄嘌呤、肌苷色谱峰都存在拖尾现                        增加了对地龙中次黄嘌呤、肌苷含量测定和HPLC指纹
        象;采用 Sapphire-C18 色谱柱和 Purospher STAR RP-18        图谱鉴别方法,且建立的方法操作简便、重复性好,提升
        endcapped 色谱柱时,对供试品溶液各色谱峰的分离效                      了地龙药材质量标准,对提高地龙药材的质量具有重要
        果相对良好,但Sapphire-C18色谱柱不适合长时间用纯水                    的意义。
        相洗脱,故最终采用 Purospher STAR RP-18 endcapped           参考文献
        色谱柱进行试验。在考察不同流动相的组成时,笔者选                           [ 1 ]  国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S]. 2015年
        用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-5 mmol/L 乙酸铵溶液、甲                          版.北京:中国医药科技出版社,2015:122-123.
        醇-10 mmol/L乙酸铵溶液等4种流动相系统进行梯度洗                      [ 2 ]  吴普.神功本草经:第三卷[M].北京:人民卫生出版社,
        脱。分析图谱发现,有机相选择甲醇更适合分离,当水                                1963:123.
                                                           [ 3 ]  苏颂.图经本草(辑复本)[M].福州:福建科技出版社,
        相为5 mmol/L乙酸铵溶液或10 mmol/L乙酸铵溶液时,
                                                                1988:463.
        对色谱峰峰形、分离度并没有显著的改善,因此最终选
                                                           [ 4 ]  杨新,刘欣,万明,等.地龙抗凝血活性物质研究进展[J].
        择甲醇-水流动相系统。此外,笔者还考察了不同柱温
                                                                江汉大学学报(自然科学版),2017,45(1):83-88.
       (25、30、35 ℃)对分离度、峰形等的影响,结果当柱温为
                                                           [ 5 ]  利红宇,李钟,黄艳玲,等.不同炮制的广地龙平喘化痰止
        30 ℃时,各峰分离度最好,因此选择柱温为30 ℃。本研                            咳药效比较[J].时珍国医国药,2010,21(6):1464-1465.
        究与现有报道      [14-15] 相比,选用甲醇和水为流动相,不仅可              [ 6 ]  唐鼎,凃乾,李娟,等.药用地龙的药理作用和临床研究进
        达到较好的分离效果,在 35 min 内全部出峰,还可避免                           展[J].中国药师,2015,18(6):1016-1019.
        缓冲盐使用不当对色谱柱的影响。                                    [ 7 ]  孙姹,张长林.地龙的药理与临床研究概况[J].食品与药
        3.2  供试品溶液制备方法的考察                                       品,2011,13(11):444-446.
            在前期研究中,笔者分别对供试品溶液制备过程中                         [ 8 ]  张晓晨.地龙药理与临床研究进展[J].中成药,2011,33
        的提取溶剂、提取方法以及溶剂用量等进行了考察。(1)                              (9):1574-1578.
        提取溶剂的考察:根据文献报道,不同溶剂用于核苷类成                          [ 9 ]  杜航,孙佳明,郭晓庆,等.地龙的化学成分及药理作用
        分提取效果依次为甲醇<80%甲醇<40%甲醇<30%                              [J].吉林中医药,2014,34(7):707-709.
                                                           [10]  HASKO G,SITKOVSKY MV,SZABO C. Immunomodu-
        甲醇<20%甲醇<10%甲醇<纯水,以 0.9%氯化钠注
                                                                latory and neuroprotective effects of inosine[J]. Trends
        射液为提取溶剂时的色谱峰比以 95%、75%、50%及
                                                                Pharmacol Sci,2004,25(3):152-157.
        25%甲醇为提取溶剂时更多            [16-17] 。在此研究背景下,本
                                                           [11]  FUKUMORI Y,MAEDA N,TAKEDA H,et al. Serum
        研究在供试品溶液制备中分别考察了以0.9%氯化钠注                               glucose and insulin response in rats administered with su-
        射液和水为溶剂的提取效果。结果显示,与以水为提取                                crose or starch containing adenosine,inosine or cytosine
        溶剂时比较,以 0.9%氯化钠注射液为提取溶剂时测得                              [J]. Biosci Biotech Bioch,2000,64(2):237-243.
        的地龙药材中次黄嘌呤和肌苷含量均更高,故最终以                            [12]  周恒,曹依敏,苗水,等. HPLC法测定沪地龙中7个核苷
        0.9%氯化钠注射液为提取溶剂进行供试品溶液的制                                类成分的含量[J].药物分析杂志,2018,38(1):97-103.
        备。(2)提取方法的考察:笔者考察了超声提取法和加热                         [13]  张彬,李倩,党爱华. HPLC 法同时测定赤子爱胜蚓药材
                  [18]
        回流提取法 的提取效果。结果,与超声提取法相比,                                中尿嘧啶、次黄嘌呤、黄嘌呤、尿苷、腺苷的含量[J].中国
        加热回流提取法提取得到的次黄嘌呤和肌苷含量相对                                 药房,2016,27(12):1692-1694.
                                                           [14]  姜文红,张清波.地龙 HPLC 指纹图谱分析方法的研究
        较高;改变回流提取时间(30、60、90、120 min),发现在提
                                                                [J].中医药学报,2006,34(6):13-14.
        取90 min时待测物提取含量达到最高,故最终选择采用
                                                           [15]  吴文如,李薇,赖小平. HPLC 法测定不同产地地龙中尿
        加热回流提取90 min。(3)溶剂用量的考察:笔者还考察
                                                                嘧啶、次黄嘌呤、尿苷、肌苷的含量[J].中国药师,2011,
        了不同溶剂用量(25、50、100 mL)的提取效果。结果,当
                                                                14(7):914-917.
        溶剂用量为 50、100 mL 时,待测物提取含量无明显差
                                                           [16]  明凯利,向阳,杨艳霞,等.小金胶囊的HPLC指纹图谱建
        异,从经济角度出发,选择溶剂用量为50 mL。故最终采                             立及主成分分析[J].中国药房,2019,30(2):188-192.
        用 0.9%氯化钠注射液 50 mL 加热回流提取 90 min 的方                [17]  曹文杰. HPLC法测定复方地龙胶囊中尿嘧啶、次黄嘌呤
        法作为供试品溶液的制备方法。                                          和肌苷的含量[J].北方药学,2015,12(9):5-6.
            本研究结果显示,15批地龙药材中肌苷的含量均高                        [18]  黄帅,徐风,杨平,等.地龙的 HPLC 特征图谱研究[J].中
        于次黄嘌呤,各地、各批次地龙药材中次黄嘌呤和肌苷                                国药房,2015,26(21):2971-2974.
        的含量差异较大,且未见明显规律,这可能与其生存环                                        (收稿日期:2019-03-19   修回日期:2019-07-24)
                                                                                                (编辑:林 静)
        境、产地、采收时间有关,具体原因有待后期采集更多产


        中国药房    2019年第30卷第17期                                             China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 17  ·2383  ·
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