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定），每组16只。按“2.1”项下方法对大鼠眼角至耳朵部                       以同样的方法重复上述给药过程进行致敏。于末次致
        位进行脱毛处理，并按同样方法涂抹涂膜剂空白基质或                           敏给药后第14天时，在右侧脱毛区按上述方法给药1次
        质量浓度为 20 mg/mL 的 BV 涂膜剂 300 μL，连续给药                进行激发。激发给药 6 h 后洗去残留药物，于洗去药物
        28 d。末次给药24 h后，各组大鼠均取10只进行大体解                      后即刻（0 h）和第 24、48、72 h 时分别观察皮肤过敏反
        剖，并观察心、肝、脾、肺、肾、胸腺、肾上腺、脑、睾丸、附                       应。按皮肤过敏反应评分标准 进行评分：皮肤出现红
                                                                                      [22]
        睾等脏器的外观变化，计算脏器指数；同时，采用全自动                          斑或水肿时按无、轻度、中度、重度各记 0、1、2、3 分，出
        血凝分析仪检测大鼠活化部分凝血活酶时间（APTT）、                         现水肿性红斑时记4分。按公式计算皮肤过敏反应平均
        凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原                         得分[（红斑形成总分+水肿形成总分）/受试动物总数]和
       （FIB）、纤维蛋白降解物（FDP）和D-二聚体（D-Dimer）等                  过敏发生率[出现皮肤红斑或（/和）水肿的动物例数（不
        凝血指标，采用全自动血液细胞分析仪检测大鼠白细胞                           论程度轻重）/受试动物总数×100％]。按过敏发生率判
                                                                         [23]
       （WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）                   定皮肤致敏性 ：过敏发生率为 0～8％、9％～28％、
        等血液生化指标。各组剩余的共 24 只大鼠在给药结束                         29％～64％、85％～80％、81％～100％分别表示较弱、
        后继续恢复性观察2周，在恢复期结束后全部剖杀，并同                          轻度、中度、重度、极度致敏性。同时，观察豚鼠是否出
        法观察及检测上述指标。                                        现哮喘、站立不稳或休克等严重的全身变态反应。
        2.3 皮肤刺激性实验                                        2.5 统计学方法
            根据皮肤刺激性实验要求 ，取家兔8只，随机分为                            采用Excel 2007软件处理实验数据，采用SPSS 17.0
                                  [21]
        完整皮肤组和破损皮肤组，每组4只。破损皮肤组家兔                           软件对数据进行统计分析。对于正态分布的计量资料
        于首次给药前，使用无菌注射器针头划伤给药部位（即                           进行方差分析，若方差齐，则采用Dunnet’s检验进行组间
        左右背部皮肤脱毛区）的表皮，以不伤真皮、有轻度渗血                          两两比较；对于非正态分布的计量资料和经数据转换后
        为度。两组家兔均采用同体左右侧自身对照法给药，右                           方差仍不齐的计量资料，则采用非参数检验如秩和检验
                                                                                        2
        侧去毛部位涂抹质量浓度为 15.6 mg/mL 的 BV 涂膜剂                   进行分析；对于计数资料，采用χ 检验进行分析。PT、
        0.5 mL（相当于主药 BV 8 mg/kg；剂量根据大鼠有效剂                  APTT、TT水平采用中位数±标准误（M±D）表示，脏器
        量的约5倍换算制定），左侧去毛部位则涂抹相同体积的                          指数及 FIB、FDP、D-Dimer 水平采用平均数±标准差
        涂膜剂空白基质作为对照，给药面积均为 3 cm×3 cm。                      （x±s）表示。P＜0.05为差异有统计学意义。
        连续给药 7 d，每天 1 次，末次给药 24 h 后洗去残留药                   3 结果
        物。分别于洗去药物后第1、24、48、72 h时，观察并记录                     3.1  大鼠急性毒性实验结果
        给药部位有无红斑和水肿等情况，按照皮肤刺激反应评                           3.1.1  大鼠一般情况及全身毒性反应发生情况                    给药
        分标准 进行评分：皮肤出现红斑或焦痂时按无、极轻                           后，BV涂膜剂各剂量组大鼠的活动程度降低，给药部位
              [22]
        微、清晰、中度、重度各记 0、1、2、3、4 分；出现水肿时按                    在数分钟内出现不同程度的肿大，BV 涂膜剂高剂量组
        无、轻度、清晰、中度、重度各记0、1、2、3、4分。按公式计                     个别大鼠出现轻微的腹式呼吸；洗去药物后，大鼠给药
        算刺激性反应平均得分[（各时间点红斑形成总评分+各                          部位肿胀程度有所减轻，且约在6 h后完全消失，48 h后
        时间点水肿形成总评分）/受试动物总数]。按平均得分                          腹式呼吸完全消失，基本恢复正常状态。正常对照组和
                       [22]
        判定皮肤刺激性 ：0～0.49 分为无刺激性，0.50～2.99                   空白基质组大鼠在此过程中均未观察到异常现象。给
        分为轻度刺激性，3.00～5.99 分为中度刺激性，6.00～                    药完毕后观察14 d，结果全部大鼠均存活，BV涂膜剂各
        8.00 分为强刺激性。同时，记录家兔体质量变化、死亡                        剂量组大鼠体质量变化与空白基质组比较差异均无统
        情况，观察其口腔黏膜、眼睑及眼球是否出现异常情况，                          计学意义（P＞0.05），结果见表1。
        以及是否出现咳嗽、喷嚏、流涎、流鼻涕、流泪等行为或                          表1    急性毒性实验中各组大鼠体质量变化比较（x±±s，
        体征异常。                                                    n＝12，g）
        2.4 皮肤过敏性实验                                        Tab 1 Comparison of body weight change of rats in
                                   [21]
            根据皮肤过敏性实验要求 ，取豚鼠 24 只，随机分                             acute toxicity test of each group（x±±s，n＝12，g）
        为空白基质组、阳性对照组（DNCB）和BV涂膜剂组，每                        组别            给药完毕时        给药完毕后第7天   给药完毕后第14天
        组8只。豚鼠背部两侧去毛，面积均为3 cm×3 cm，左侧                      正常对照组         220.8±5.3     225.7±8.3   237.5±12.5
                                                           空白基质组         218.3±4.2     223.2±6.7   233.5±12.8
        用于致敏给药，右侧用于激发给药。分别在各组豚鼠左
                                                           BV涂膜剂高剂量组     217.1±5.8     222.4±9.5   232.6±12.7
        侧脱毛区涂抹涂膜剂空白基质、DNCB 的 1％丙酮溶液                        BV涂膜剂中剂量组     218.3±4.7     225.5±10.1  233.3±11.6
        0.2 mL 和质量浓度为 100 mg/mL 的 BV 涂膜剂 0.12 mL           BV涂膜剂低剂量组     217.6±6.5     219.8±12.5  231.7±12.9
       （相当于主药BV 15 mg/kg；剂量根据大鼠有效剂量的约                      3.1.2  脏器外观变化及脏器指数             与正常对照组比较，
        10倍换算制定），6 h后洗去残留药物，并于第7、14天时                      空白基质组和BV涂膜剂各剂量组大鼠的各脏器外观均


        中国药房    2019年第30卷第16期                                            China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 16  ·2183  ·
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