Page 27 - 2019年8月第30卷第16期

with little irritation on intact or damaged skin. Skin anaphylaxis test showed that BV plastics produced mild erythema in the skin of
guinea pigs， belonging to light allergy. CONCLUSIONS： No acute or long-term toxicity is observed after transdermal
administration of BV plastics，which is safe and only causes mild irritation and irritability to skin，indicating there is good safety of
the plastic under experiment doses.
KEYWORDS Bee venom；Plastics；Transdermal administration；Acute toxicity；Long-term toxicity；Irritation；Anaphylaxis

蜜蜂蜂毒（Bee venom，BV）为蜜蜂科动物中华蜜蜂 称取 95％乙醇 1.875 g，依次加入 0.625 g 甘油、0.002 5 g
（Apiscerana Fabricius）等的工蜂尾部螫刺腺体中排出的 聚山梨酯80、0.002 5 g氮酮，搅拌均匀；将上述后一种溶
毒液 ，具有祛风除湿、止痛等功效 。BV是一种毒性很 液缓慢加入前一种溶液中，搅拌均匀，即得）；2，4-二硝
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强的毒素，但同时又是一种从古至今应用广泛的天然药 基氯苯（DNCB，成都格雷西亚化学技术有限公司，批号：
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物，具有抗炎 、镇痛 、抗肿瘤 等多种药理活性。多项 201208071）；其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，
研究表明，其在体内外均能明显延长血液凝固时间，改 水为超纯水。
善微循环、溶栓等，具有活血化瘀的作用 [6-8] 。 1.3 动物
目前，BV已上市的剂型主要为注射液，主要用于治 SD大鼠，SPF级，雄性，体质量250～300 g；家兔，普
疗风湿性或类风湿性关节炎、周围神经炎及神经痛等， 通级，雌雄各半，体质量1.8～2.0 kg，均由湖南莱斯克景
在获得显著临床疗效的同时也有关于其注射用药后出 达实验动物有限公司提供。白色成年豚鼠，清洁级，体
现不同程度过敏现象及溶血毒性的报道，严重者还会出 质量 250～350 g，由昆明医科大学动物实验中心提供。
现如过敏性休克 [9-12] 等，故后来逐步被蜂针疗法替代。 动物使用合格证号：SYXK（滇）2018-0002。所有动物均
蜂针疗法是一种用蜜蜂或其他蜂类的螫器官作为针具， 在光照明/暗12 h交替、温度20～26 ℃、相对湿度40％～
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对人体相关穴位进行针刺的治疗方法 。蜂针疗法集 70％的条件下适应性喂养一定时间，自由取食专用标准
针、灸、药为一身，操作简单，疗效显著，可有效治疗强直 饲料、纯净水；豚鼠单笼饲养，每天补充适量维生素 C。
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性脊柱炎 、类风湿关节炎 、中风后偏瘫 等。但由于 本研究动物处置方法均符合动物实验伦理学要求。
蜂针刺破皮肤后，毒素经血管和淋巴管吸收，极易引起 2 方法
过敏反应 ，这也是近年来蜂针疗法未能在临床治疗中 2.1 急性毒性实验
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广泛应用的主要原因。 根据急性毒性实验要求 ，取大鼠 60 只，随机分为
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因此，为改善蜂毒注射或蜂针疗法所引起的过敏反 正常对照组、空白基质组和 BV 涂膜剂高、中、低剂量组
应，本课题组研发了 BV 新型制剂——涂膜剂。该涂膜 [144、96、48 mg/kg（以主药BV计算）；给药剂量根据本课
剂不仅制备工艺简单，且使用后可在用药部位形成药膜 题组前期研究摸索所得 BV 有效剂量 1.67 mg/kg 的约
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以保护创面，具有使用舒适、刺激性小等优点，是一种很 90、60、30倍制定），每组12只。于实验前一天使用脱毛
有发展前途的剂型 。为验证BV涂膜剂的毒性反应和 膏脱去大鼠眼角至耳朵部位两侧的皮毛，作为给药部
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过敏反应，本课题组对其经皮给药的急性毒性、长期毒 位。BV涂膜剂高、中、低剂量组大鼠分别涂抹质量浓度
性、皮肤刺激性及过敏性进行考察，为评价该制剂临床 为 20 mg/mL 的 BV 涂膜剂（将 BV 原料药与涂膜剂空白
用药的安全性提供实验依据。 基质混匀即得，下同）3、2、1次，单次给药体积为600 μL，
1 材料 两侧给药面积均为 4 cm×4 cm，末次给药 24 h 后洗去残
1.1 仪器 留药物；空白基质组大鼠同法涂抹涂膜剂空白基质；正
AE240 型精密电子分析天平[梅特勒-托利多仪器 常对照组大鼠不作任何处理。给药期间和给药完毕（即
（上海）有限公司]；TL-16R型台式高速冷冻离心机（上海 洗去药物）后，每天观察并记录大鼠状态、毛发光泽、行
市离心机械研究所）；CA-510 型全自动血凝分析仪（日 为活动、死亡情况等；分别于给药前（第0天）和给药完毕
本 SYSMEX 株式会社）；xfa600 型全自动血液细胞分析 后第7、14天称量并记录大鼠体质量。给药完毕后第14
仪（南昌市铭志诚商贸有限公司）。 天，各组大鼠进行大体解剖学检查，观察心、肝、脾、肺、
1.2 药品与试剂 肾、胸腺、肾上腺、脑、睾丸、附睾等脏器的外观变化，称
BV 原料药[药用特种昆虫开发国家地方联合工程 量脏器质量并计算脏器指数[脏器指数＝脏器质量
研究中心（云南），批号：20151020；采用高效液相色谱法 （mg）/体质量（g）]。
测得纯度大于 98％]；涂膜剂空白基质由本课题组自制 2.2 长期毒性实验
（称取聚乙烯醇-124 1.0 g，加水6.25 g，称定质量，室温溶 根据长期毒性实验要求 ，取大鼠 64 只，随机分为
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胀 24 h 后，于 85 ℃水浴加热 2 h 并不断搅拌，使之混匀 空白基质组和 BV 涂膜剂高、中、低剂量组（72、48、24
溶胀成凝胶状，然后冷却至室温，加水补足减失质量；另 mg/kg；给药剂量根据 BV 有效剂量的约 44、22、11 倍制

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