Page 33 - 2019年8月第30卷第16期

μ mol/L EGCG groups were increased significantly，while relative expression of Bax in 100，200 μ mol/L EGCG groups were
decreased significantly（P＜0.05）. Animal experiments showed that no ischemia of myocardial tissue and enlargement of cardiac
cavity were observed in sham operation group. Myocardial infarction was observed in model group. Compared with sham operation
group，percentage of infarction area to cross-sectional area，the serum content of MDA，the relative expression of Bax in
myocardial tissue and p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt were increased significantly in model group，while SOD activity and relative
expression of Bcl-2 were decreased significantly（P＜0.05）. Compared with model group，myocardial infarction area of mice in
EGCG group was reduced，the percentage of infarction area to cross-sectional area，the serum content of MDA，the relative
expression of Bax in myocardial tissue and p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt were significantly decreased，the activity of SOD activity and
the relative expression of Bcl-2 were increased significantly（P＜0.05）. CONCLUSIONS：EGCG can protect against myocardial
ischemia-reperfusion injury，the mechanism of which may be associated with inhibiting the apoptosis of myocardial cells，
improving oxidation stress，regulating the expression of apoptotic protein，reducing the phosphorylation level of PI3K/Akt signaling
pathway-related proteins.
KEYWORDS Epigallocatechin gallate；Myocardial ischemia-reperfusion injury；Apoptosis；PI3K/AKT signaling pathway；H9C2
cell；C57BL/6 mice

急性心肌梗死是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所 有限责任公司）；E200型显微镜（日本Nikon公司）；Mul-
引起的心肌组织坏死。长时间的心肌缺血会导致心肌 tiskan TM FC 型酶标仪（美国 Thermo Fisher Scientific 公
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细胞大量死亡，严重影响患者预后 。近年来，随着溶栓 司）；2000CT 型超声细胞破碎仪（上海左乐仪器有限公
治疗、冠状动脉搭桥以及支架植入术的发展，急性心肌 司）；Centrifuge 5430 型高速离心机（艾本德中国有限公
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梗死患者的病死率明显降低 。然而，冠状动脉血管再 司）；EOS 6D数码相机（日本Canon公司）。
通致缺血再灌注损伤会造成患者心肌细胞受损、心肌梗 1.2 药品与试剂
死面积增大，严重影响其远期预后和心功能改善。既往 EGCG原料药（大连美仑生物技术有限公司，批号：
研究表明，心肌缺血再灌注损伤的潜在病理机制包括自 MB1672，纯度：95％）；叔丁基过氧化氢（TBHP，美国
由基损伤、钙超载、白细胞激活和微血管损伤等 [3-5] 。目 Sigma 公司，批号：416665）；MTS 检测试剂盒以及兔抗
前，临床尚无针对冠状动脉血管再通致缺血再灌注损伤 小鼠Bcl-2、Bax单克隆抗体（美国Abcam公司，批号分别
的有效治疗方案，因此寻找针对性的有效治疗药物具有 为 ab197010、ab59348、ab32503）；兔抗小鼠甘油醛-3-磷
重要的临床意义。 酸脱氢酶（GAPDH）、PI3K、磷酸化 PI3K（p-PI3K）、Akt、
表没食子儿茶素没食子酸酯（Epigallocatechin gal- 磷酸化 Akt（p-Akt）单克隆抗体以及山羊抗兔 IgG 二抗
late，EGCG）是绿茶茶多酚的主要组成成分，是从茶叶中 （美国CST公司，批号分别为#5174、#4249、#4228、#4685、
分离得到的儿茶素类单体。既往已有大量研究表明，该 #4060、#7074）；TTC染色试剂、青链霉素双抗、十二烷基
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化合物具有抗肿瘤 、抗肾损伤 、抗衰老 、抗炎 以及 硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳试剂（北京索
[7]
[10]
抗心肌缺血再灌注损伤 等作用。有研究指出，EGCG 莱宝科技有限公司，批号分别为G3005、P1400、P1200）；
是最有效的抗氧化多酚类化合物，可通过有效抑制过氧 超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）检测试剂盒
化氢生成及促进自由基清除等途径来发挥对心肌缺血 （南京建成生物工程研究所，批号分别为 20180624、
[11]
再灌注损伤的保护作用 ；同时，该化合物还可通过抗 20180623）；ECL 化学光试剂（美国 Thermo Fisher Scien-
炎和抗凋亡作用来缓解心肌缺血再灌注损伤 。鉴于 tific 公司，批号：34095）；二喹啉甲酸（BCA）蛋白浓度测
[12]
此，本研究以心肌缺血再灌注损伤模型细胞和模型小鼠 定 试 剂 盒（上 海 碧 云 天 生 物 技 术 有 限 公 司 ，批 号 ：
为对象，通过Western blotting法检测凋亡相关蛋白的表 P0010S）；DMEM 高糖培养基、胰蛋白酶、胎牛血清（美
达情况，以明确 EGCG 对心肌缺血再灌注损伤致心肌 国 Gibco 公 司 ，批 号 分 别 为 11965-084、25200-056、
细胞凋亡的体内、外抑制作用；同时，通过检测心肌细 26400044）；伊文思蓝染色试剂[金克隆（北京）生物技术
胞内磷脂酰肌醇 3 激酶（PI3K）/蛋白激酶 B（Akt）信号 有限公司，批号：YM-S1647]；PDVF膜（美国Millipore公
通路相关蛋白的磷酸化水平来初步探讨其作用机制， 司，批号：IPVH00010）；其余试剂均为分析纯，水为超
以期为临床抗心肌缺血再灌注损伤药物的研发提供 纯水。
参考。 1.3 细胞
1 材料 H9C2心肌细胞系由中国科学院上海生命科学院细
1.1 仪器 胞资源中心提供。
Gel Doc XR+型凝胶成像分析系统、96型水平电泳 1.4 动物
TM
槽（美国 Bio-Rad 公司）；BC175 型 CO2培养箱（瑞士 Sal- 清洁级健康C57BL/6小鼠，雄性，6～7周龄，体质量
vis Lab 公司）；BBS-SDC 型超净台（博科控股集团有限 16～18 g，由温州医科大学提供，动物使用许可证号：
公司）；DB081型小动物呼吸机（北京智鼠多宝生物科技 SYXK（浙）2015-0009。

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