Page 45 - 2019年2月第30卷第4期

阴性样品溶液、系统适用性溶液适量，按“2.1”项下色谱 结果，尼尔雌醇、己烯雌酚的定量限分别为 187、192
条件进样测定，记录色谱，详见图 1。由图 1 可知，尼尔 ng/mL，检测限分别为56、58 ng/mL。
雌醇峰保留时间约为15 min，与各杂质峰的分离度均大 2.6 精密度试验
于2.0，理论板数不低于3 000；己烯雌酚峰保留时间约为 分别取“2.2.1”项下尼尔雌醇对照品溶液、己烯雌酚
5 min，与杂质峰的分离度均大于 2.0，理论板数不低于 对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6
3 000。尼尔雌醇峰和己烯雌酚峰与溶剂及其他杂质峰 次，记录峰面积。结果，尼尔雌醇、己烯雌酚峰面积的
分离良好，阴性样品对测定无干扰。 RSD 分别为 0.19％、0.22％（n＝6），表明仪器精密度

10 1 10 良好。
2
mAU 5 mAU 5 2.7 稳定性试验
取“2.2.2”项 下 尼 尔 雌 醇 供 试 品 溶 液（批 号 ：
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 170103）、己烯雌酚供试品溶液（批号：170201）适量，分
t，min t，min
A.尼尔雌醇系统适用性溶液 B.己烯雌酚系统适用性溶液 别于室温下放置 0、1、2、4、6、8、12 h 时按“2.1”项下色谱
400 400 条件进样测定，记录峰面积。结果，尼尔雌醇、己烯雌酚
1 2
mAU 200 mAU 200 峰面积的 RSD 分别为 0.53％、0.59％（n＝7），表明尼尔
雌醇供试品溶液、己烯雌酚供试品溶液于室温下放置
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 12 h 内基本稳定。
t，min t，min
C.尼尔雌醇对照品溶液 D.己烯雌酚对照品溶液 2.8 重复性试验
400 400
1 2 精密称取尼尔雌醇片（批号：170103）、己烯雌酚片
mAU 200 mAU 200 （批号：170201）适量，各 6 份，分别按“2.2.2”项下方法制
备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
t，min t，min 峰面积并按外标法计算待测成分含量。结果，尼尔雌
E.尼尔雌醇供试品溶液 F.己烯雌酚供试品溶液 醇、己烯雌酚的平均含量分别为 98.66％、98.57％，RSD
400 400
分别为0.17％、0.11％（n＝6），表明本方法重复性良好。
mAU 200 mAU 200 2.9 加样回收率试验

0 0 精密称取已知含量的尼尔雌醇片（批号：170103）、
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
t，min t，min 己烯雌酚片（批号：170201）100 mg，各9份，分别置于10
G.缺尼尔雌醇的阴性样品溶液 H.缺己烯雌酚的阴性样品溶液
注：1.尼尔雌醇；2.己烯雌酚 mL量瓶中，各加一定量的尼尔雌醇对照品溶液、己烯雌
Note：1. nilestriol；2. diethylstilbestrol 酚对照品溶液，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再
图1 高效液相色谱图 按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法
Fig 1 HPLC chromatograms 计算含量和加样回收率，结果见表1。
2.4 线性关系考察 2.10 样品含量测定
精密量取“2.2.1”项下尼尔雌醇对照品贮备液、己烯 取 6 批样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供
雌酚对照品贮备液 0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，分别置 试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，平行操作
于 100 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按“2.1” 3次，记录峰面积并按外标法计算样品含量，结果见表2。
项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量 3 讨论
浓度（x，mg/mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线 雌激素类药物是以 18 个碳原子雌烃为基本结构的
性回归，得尼尔雌醇、己烯雌酚回归方程分别为 y＝ 类固醇激素 ，分子结构较为复杂。目前常用的测定雌
[13]
9.591 7 × 10 x + 2.482 2 × 10（r＝0.999 9）、y＝3.120 4 × 激素类药物含量的方法有紫外-可见光光度法、薄层色
8
6
10 x＋7.689 7×10（r＝0.999 9）。结果表明，尼尔雌醇、 谱法、气相色谱法、HPLC 法、放射免疫分析法及酶联免
6
9
己烯雌酚检测质量浓度线性范围均为0.01～0.5 mg/mL。 疫吸附法等 。随着分析技术的提高和分析仪器的发
[13]
2.5 定量限与检测限考察 展，HPLC法被广泛使用。该方法不仅具有样品用量少、
分别取“2.2.1”项下尼尔雌醇对照品溶液、己烯雌酚 灵敏度高、快速等优点，还具有分离效能好等特点，因此
[13]
对照品溶液适量，倍比稀释，按“2.1”项下色谱条件进样 可用于雌激素类药物含量的测定 。
[1]
测定，分别以信噪比 10 ∶ 1、3 ∶ 1 计算定量限、检测限。 笔者前期采用了 2015 年版《中国药典》（二部） 的

中国药房 2019年第30卷第4期 China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4 ·471 ·