Page 49 - 2019年2月第30卷第4期

采用蛋白印迹法检测。取“2.2”项下各组 5 只大鼠 1～图3。
的胃组织，－80 ℃条件下低温保存。检测时取50 mg胃
TM
黏膜组织，按照Minute 动物细胞/组织总蛋白提取试剂
盒说明书方法进行总蛋白提取后，采用 BCA 蛋白定量
试剂盒进行蛋白定量。采用 SDS-PAGE 凝胶制备试剂
盒制备 12％的分离胶和 5％的浓缩胶，取蛋白 50μg 上
样，浓缩胶80 V电泳1 h，分离胶130 V电泳1 h。根据目
的蛋白分子量切胶后，60 V转膜2 h，5％脱脂奶粉封闭2 A.正常组 B.模型组
h；分别加入Claudin-1、Occludin、VIP蛋白抗体（1∶3 000）
和β-actin抗体（1 ∶ 8 000），4 ℃孵育24 h；TBST缓冲液冲
洗3次，加入二抗（1 ∶ 7 000），常温孵育2 h；TBST缓冲液
冲洗3次，ECL发光液显影。以β-actin为参比，采用Ima-
ge Pro Plus 6.0软件分析目的蛋白条带相对灰度值，以表
示蛋白表达水平。 C.茯苓甘草汤高剂量组 D.茯苓甘草汤低剂量组
2.5 统计学方法
采用 SPSS17.0 软件对数据进行统计分析。计量资
料以 x±s 表示，组间比较采用非参数秩和检验。P＜
0.05为差异有统计学意义。
3 结果
3.1 茯苓甘草汤对大鼠胃排空功能的影响
E.联用组 F.多潘立酮组
与正常组比较，模型组大鼠胃内残渣量明显增多，
图1 各组大鼠胃黏膜组织中AQP3蛋白表达的组织切
差异有统计学意义（P＜0.01）；与模型组比较，各给药组
片显微图（苏木素染色，×400）
大鼠胃内残渣量明显减少，差异均有统计学意义（P＜
Fig 1 Histological micrograph of AQP3 protein ex-
0.05），详见表1。
pression in gastric mucosa tissue of rats in
表1 各组大鼠胃排空功能的检查结果（x±±s，n＝10）
each group（hematoxylin staining，×400）
Tab 1 Gastric emptying function of rats in each group
定量分析结果显示，与正常组比较，模型组大鼠胃
（x±±s，n＝10）
黏膜组织中 AQP3、Ghrelin 蛋白表达水平均显著降低，
组别 剂量 胃内残渣量，g
正常组 0.81±0.56 Substance P蛋白表达水平显著升高，差异均有统计学意
模型组 1.53±0.17 ＊＊ 义（P＜0.05或P＜0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠
茯苓甘草汤高剂量组 20 g/kg 1.10±0.45 # 胃黏膜组织中 AQP3 蛋白表达水平显著升高；茯苓甘草
茯苓甘草汤低剂量组 10 g/kg 1.06±0.39 # 汤高剂量组、茯苓甘草汤低剂量组和联用组大鼠胃黏膜
联用组 10 g/kg（茯苓甘草汤）+ 0.004 g/kg（多潘立酮） 1.15±0.21 #
多潘立酮组 0.004 g/kg 1.09±0.34 # 组织中Ghrelin蛋白表达水平显著升高，Substance P蛋白
#
＊＊
注：与正常组比较， P＜0.01；与模型组比较，P＜0.05 表达水平显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。
#
＊＊
Note：vs. normal group， P＜0.01；vs. model group，P＜0.05 各组大鼠胃黏膜组织中AQP3、Ghrelin、Substance P蛋白
3.2 茯苓甘草汤对大鼠胃黏膜组织中 AQP3、Ghrelin、 表达水平检测结果见表2。
Substance P蛋白表达的影响 3.3 茯苓甘草汤对大鼠胃黏膜组织中 Claudin-1、Oc-
正常组大鼠黏膜组织腺泡内 AQP3、Ghrelin 蛋白阳 cludin、VIP蛋白表达的影响
性表达较多，其中 Ghrelin 蛋白在黏膜至黏膜下层都有 与正常组比较，模型组大鼠胃黏膜组织中 Clau-
明显表达；Substance P蛋白阳性表达较少。模型组大鼠 din-1、Occludin蛋白表达水平均显著降低，VIP蛋白表达
黏膜组织腺泡内 AQP3、Ghrelin 蛋白阳性表达明显减 水平显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05 或 P＜
少，其中 AQP3 蛋白表达从黏膜至黏膜下层逐步减少； 0.01）。与模型组比较，茯苓甘草汤高剂量组、茯苓甘草
Substance P蛋白阳性表达较多，在黏膜至黏膜下层表达 汤低剂量组和联用组大鼠胃黏膜组织中 Claudin-1 蛋白
明显。茯苓甘草汤高剂量组、茯苓甘草汤低剂量组、联 表达水平显著升高；各给药组大鼠胃黏膜组织中Occlu-
用组和多潘立酮组大鼠黏膜组织中 AQP3、Ghrelin 蛋白 din 蛋白表达水平显著升高，VIP 蛋白表达水平显著降
阳性表达较多，与正常组相似；Substance P 蛋白阳性表 低，差异均有统计学意义（P＜0.05或 P＜0.01）。各组大
达较模型组明显减少。各组大鼠胃黏膜组织中 AQP3、 鼠胃黏膜组织中Claudin-1、Occludin、VIP蛋白表达电泳
Ghrelin、Substance P 蛋白表达的组织切片显微图见图 图见图4，蛋白表达水平检测结果见表3。

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