Page 36 - 2019年2月第30卷第4期

果，日内 RSD 分别为 4.35％、2.19％、3.23％、2.03％（n＝ 1.4
6），日间 RSD 分别为 1.11％、2.36％、3.34％（n＝18），表 1.2
AT原料药
明精密度良好。 1.0 AT-NS1
2.6.7 回收率试验 按“2.6.5”项下方法配制AT低、中、 血药浓度，g/mL μ 0.8 AT-NS2
0.6
高质量浓度（0.059、0.947、1.516 μg/mL）的质控样品，按 0.4
“2.6.3”项下方法处理后，再按“2.6.1”项下色谱条件进样 0.2
测定，记录峰面积并计算质量浓度。按“2.6.2”项下方法 0 0 120 240 360 480
配制AT低、中、高质量浓度（0.059、0.947、1.516 μg/mL）的 时间，min
图6 大鼠灌胃AT原料药、AT-NS1、AT-NS2的平均药-时
标准溶液，经0.45 μm微孔滤膜滤过，再按“2.6.1”项下色
曲线（n＝5）
谱条件进样测定，记录峰面积。将质控样品的 AT 实测
Fig 6 Average plasma concentration-time curves of
质量浓度与其理论质量浓度进行比较，考察方法回收
AT raw material，AT-NS1 and AT-NS2 in rats
率；将质控样品的 AT 峰面积与对应质量浓度标准溶液
after intragastrical administration（n＝5）
的 AT 峰面积进行比较，考察提取回收率。每个质量浓
表2 大鼠灌胃AT原料药、AT-NS1、AT-NS2的主要药动
度平行操作 5 次。结果，各质控样品的方法回收率为
学参数（n＝5）
89.83％ ～98.77％（RSD＜5％ ，n＝5），提 取 回 收 率 为
Tab 2 Main pharmacokinetic parameters of AT raw
80.14％～91.39％（RSD＜5％，n＝5），符合生物样品定
material，AT-NS1 and AT-NS2，in rats after
[14]
量分析的相关要求 ，详见表1。
intragastrical administration（n＝5）
表1 回收率试验结果（x±±s，n＝5）
参数 AT原料药 AT-NS1 AT-NS2
Tab 1 Results of recovery tests（x±±s，n＝5） tmax，min 17.00±6.71 5.00±0 ＊# 23.00±10.95
cmax，μg/mL 0.11±0.02 1.27±0.26 ＊# 0.28±0.08 ＊
理论质量浓度， 方法回收率试验 提取回收率试验
μg/mL 方法回收率，％ RSD，％ 提取回收率，％ RSD，％ AUC0-∞，μg·min/mL 24.47±6.05 106.73±27.11 ＊# 49.34±9.70 ＊
t1/2z，min 145.28±60.26 311.74±62.96 ＊# 164.34±48.60
0.059 92.54±2.54 2.74 86.38±4.05 4.68
#
＊
0.947 94.25±2.64 2.80 85.09±4.04 4.74 注：与AT原料药比较，P＜0.05；与AT-NS2比较，P＜0.05
1.516 95.34±2.90 3.04 88.82±1.79 2.02 Note：vs. AT raw material， P＜0.05；vs. AT-NS2，P＜0.05
#
＊
2.6.8 稳定性试验 按“2.6.5”项下方法配制AT低、中、 及 AT-NS1 组的 t1/2z均显著升高，AT-NS1 组大鼠的 tmax显
高质量浓度（0.059、0.947、1.516 μg/mL）的质控样品，按 著缩短，差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中，AT-NS1
“2.6.3”项下方法处理后，分别于室温下放置 0、8、12、24 组和AT-NS2组大鼠的cmax分别是其原料药的11.55、2.55
h 时按“2.6.1”项下色谱条件进样测定。结果，各质量浓 倍，AUC0-∞分别是其原料药的 4.36、2.02 倍。与 AT-NS2
度 质 控 样 品 实 测 质 量 浓 度 的 RSD 分 别 为 2.45％ 、 组比较，AT-NS1 组大鼠的 cmax、AUC0-∞、t1/2z均显著升高，
3.46％、2.51％（n＝4），表明其在室温放置24 h内稳定。 差异均有统计学意义（P＜0.05）。其中，AT-NS1 组大鼠
2.6.9 药动学研究 取 15 只大鼠随机分为 3 组，即 AT 的 cmax、AUC0- ∞、t1/2z 分别是 AT-NS2 组的 4.54、2.16、1.90
原料药组、AT-NS1组和AT-NS2组，每组5只。所有大鼠 倍。与 AT-NS2 组比较，AT-NS1 组大鼠的 tmax显著缩短，
均禁食、不禁水12 h后，于次日晨起分别单次灌胃AT原
差异有统计学意义（P＜0.05）。而AT-NS2组大鼠的tmax、
料药、AT-NS1 和 AT-NS2 的混悬液（均以水为溶剂），剂
t1/2z与原料药组比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。
量均为 120 mg/kg [4，15] 。分别于给药前（0 min）及给药后
3 讨论
5、10、20、30、60、120、240、360、480 min自大鼠眼眶取血
本研究初步探索了晶型对AT-NS表征、体外溶出度
0.5 mL至肝素化EP管中，3 500 r/min离心7 min，分离上
及体内药动学行为的影响，以期为 NS 口服吸收的研究
层血浆，按“2.6.3”项下方法处理后，再按“2.6.1”项下色
提供参考。本研究首先参照 2015 年版《中国药典》（一
谱条件进样测定，计算AT的血药浓度。采用Excel 2016
部） ，建立了测定 AT 体内外浓度的 HPLC 法。本课题
[17]
软件绘制平均药-时曲线，结果见图6；采用DAS 2.0软件
组前期考察了 3 种色谱柱[Kromasil 100-5 C18 （250 mm×
处理上述平均药-时曲线数据，并以非房室模型（统计距
法） 计算药动学参数，结果见表 2。采用 SPSS 21.0 软 4.6 mm，5 μm）、Inertsil ODS-3（250 mm×4.6 mm，5 μm）、
[16]
件对数据进行统计分析。计量资料以x±s表示，组间比 Agilent ZORBAX SB-C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）]的分
较采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。 离效果。结果显示，Kromasil 100-5C18的分离效果最佳，
由图 6 可见，AT-NS1 组和 AT-NS2 组大鼠的血药浓 且待测物色谱峰峰形良好，故最终以其作为HPLC分析
度较 AT 原料药组有明显提高。由表 1 可见，与 AT 原料 的色谱柱。同时，本课题组对乙腈-0.1％醋酸溶液
药组比较，AT-NS1组和AT-NS2组大鼠的cmax、AUC0-∞以 （19∶81，V/V）、乙腈-水（19∶81，V/V）、甲醇-0.1％醋酸溶液

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