Page 34 - 2019年2月第30卷第4期

8 000 2.4.4 专属性考察 取AT对照品溶液、供试品溶液、阴
7 000
6 000 AT原料药 性对照溶液（即空白溶出介质）适量，按“2.4.1”项下色谱
林克斯计数 4 000 PVP K30 条件进样测定，记录色谱图。结果，AT 峰形良好，保留
5 000
3 000
AT-NS1
2 000 时间约为 11.3 min；阴性对照溶液在上述保留时间处未
1 000 AT-NS2 见干扰，详见图3。
0
0 10 20 30 40 50 60 40
衍射角度，° 40 AT 30 AT
30
图1 X射线衍射图 mAU 20 mAU 20
Fig 1 X-ray diffractograms 10 10
0 0
取AT原料药、AT-NS1、AT-NS2各适量，经冷冻干燥 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5
时间，min 时间，min
后，分别置于扫描电镜下观察其形态。结果，AT原料药 A.对照品溶液 B.供试品溶液
呈块状，粒径较大且大小不一；AT-NS1 和 AT-NS2 形态 40
30
相似，均呈圆球状且大小均一，粒径在200 nm左右，详见 mAU 20
10
图2。 0
0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5
时间，min
C.阴性对照溶液
图3 高效液相色谱图（体外溶出试验）
Fig 3 HPLC chromatograms（in vitro dissolution test）
2.4.5 标准曲线的绘制 取“2.4.2”项下AT对照品贮备
液各适量，加甲醇稀释制得质量浓度分别为 0.95、1.89、
A. AT原料药（×4 000） B. AT-NS1（×10 000） 3.79、7.58、15.16、30.32、45.48 μg/mL 的系列标准溶液，
按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测
物质量浓度（c，μg/mL）为横坐标、峰面积（A）为纵坐标进
行线性回归，得回归方程为A＝26 271.11c－748.46（R ＝
2
0.999 8）。结果，AT 检测质量浓度的线性范围为 0.95～
45.48 μg/mL。
2.4.6 定量限与检测限考察 取“2.4.2”项下AT对照品
C. AT-NS2（×10 000） 贮备液各适量，加甲醇逐级稀释，按“2.4.1”项下色谱条
图2 扫描电镜图
件进样测定，分别以信噪比为10 ∶ 1、3 ∶ 1计算定量限、检
Fig 2 SEM images
测限。结果，AT 的定量限为 0.13 μg/mL，检测限为 0.04
2.4 体外溶出度检测
μg/mL。
2.4.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil 100-5 C18 （250 mm×
2.4.7 精密度试验 取“2.4.5”项下质量浓度为 7.58
4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1％醋酸溶液（19∶81，V/V）；
μg/mL的AT标准溶液适量，按“2.4.1”项下色谱条件连续
流速：1 mL/min；检测波长：291 nm；柱温：30 ℃；进样量：
进样测定6次，连续测定6 d，考察日内、日间精密度。结
10 µL。
果，日内 RSD 为 1.43％（n＝6），日间 RSD 为 1.78％（n＝
2.4.2 对照品溶液的制备 取 AT 对照品适量，精密称
36），表明仪器精密度良好。
定，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得质 2.4.8 稳定性试验 取同一批次 AT-NS1，按“2.4.3”项
量浓度为 0.379 0 mg/mL 的 AT 对照品贮备液。取上述 下方法制备供试品溶液，分别于室温下放置 0、2、4、8、
AT 对照品贮备液 200 μL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀 12 h 时按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。
释至刻度，得质量浓度为 7.58 μg/mL 的对照品溶液， 结果，各时间点AT峰面积的RSD为0.99％（n＝5），表明
备用。 供试品溶液在室温下放置12 h基本稳定。
2.4.3 供试品溶液的制备 取“2.1.1”项下 AT-NS1 2 2.4.9 重复性试验 取同一批次 AT-NS1，共 6 份，按
mL，放入透析袋中，参照2015年版《中国药典》（四部）通 “2.4.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱
则“溶出度与释放度测定法”第二法（桨法） ，以磷酸盐 条件进样测定，记录峰面积并计算 AT 的质量浓度。结
[14]
缓冲液（PBS，pH 4.5）500 mL 为溶出介质，控制转速为 果，AT 的平均质量浓度为 42.43 μg/mL，RSD 为 1.61％
100 r/min，温度为（37.0±0.5）℃。于溶出 24 h 时取样 1 （n＝6），表明本方法重复性良好。
mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。 2.4.10 加样回收率试验 精密量取已知含量的供试品

·460 · China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4 中国药房 2019年第30卷第4期