Page 35 - 2019年2月第30卷第4期

溶液 0.5 mL，置于 10 mL 量瓶中，平行量取 9 份；分别精 外，其余条件均同“2.4.1”项。
密加入质量浓度为 41.69 μg/mL 的对照品溶液 0.4、0.5、 2.6.2 溶液的制备 取“2.4.2”项下AT对照品贮备液各
0.6 mL 各 3 份（约 相 当 于 样 品 含 量 的 80％ 、100％ 、 适量，加甲醇稀释制得质量浓度分别为 0.237、0.474、
120％），以溶出介质定容至刻度，混匀，经 0.45 µm 微孔 0.947、3.790、7.580、15.159 μg/mL 的系列标准溶液，备
滤膜滤过。取续滤液适量，按“2.4.1”项下色谱条件进样 用。取内标（芦丁）对照品适量，精密称定，置于 25 mL
测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果，AT的加样 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，得质量浓度为 320
回 收 率 分 别 为（100.09 ± 2.40）％ 、（99.04 ± 1.52）％ 、
µg/mL的内标溶液，备用。
（97.75 ± 0.95）％ ，RSD 分 别 为 2.40％ 、1.53％ 、0.97％
2.6.3 血浆样品处理 取空白血浆 200 µL，精密加入
（n＝9）。
320 μg/mL 的内标溶液 25 µL，涡旋混匀；加入乙酸乙酯
2.5 体外溶出特性考察
1.5 mL，涡旋混匀 2 min，10 000 r/min 离心 10 min；吸取
参照2015年版《中国药典》（四部）通则“溶出度与释
1.4 mL上层有机相转移至另一EP管中，以氮吹流吹干，
[14]
放度测定法”第二法（桨法） ，分别取“2.1”项下AT原料
残渣加甲醇100 µL复溶后，13 000 r/min离心20 min，取
药混悬液（称取 AT 原料药 200 mg，加水 10 mL，搅拌均
[15]
上清液进样测定 。
匀即得）、AT-NS1 以及 AT-NS2 各 2 mL，放入透析袋中，
2.6.4 专属性考察 取空白血浆、空白血浆+AT+内标、
以 PBS 500 mL 为溶出介质 ，控制转速为 100 r/min，温
[10]
度为（37.0±0.5）℃。分别于溶出 0.5、1、2、4、8、12、16、 AT-NS1给药30 min后的血浆样品+内标，按“2.6.3”项下
20、24 h 时取样 1 mL，并同时补充等体积溶出介质。样 方法处理后，再按“2.6.1”项下色谱条件进样测定，记录
品液经0.45 μm微孔滤膜滤过，按“2.4.1”项下色谱条件进 色谱图。结果，AT和内标的保留时间分别约为14.9、9.5
样测定，记录峰面积，并按公式计算药物的体外溶出度（ρ） min，空白血浆中的内源性物质无不干扰，详见图5。
和累积溶出度，再采用Excel 2016软件绘制体外溶出曲 7.5 7.5 AT
电信号 5.0 电信号 5.0 内标
线。ρ＝cnV2/m0，累积溶出度＝ρn+（ρ1+ρ2+……+ρn－1 ）V1/V2 2.5 2.5
[式中，cn 为第 n 个取样点样品中 AT 的质量浓度（由 0 0
“2.4.5”项下回归方程计算而得），m0为 0 h 时透析袋中 0 5 10 15 20 0 5 10 15 20
时间，min 时间，min
AT的质量；ρ n为第n个取样点的溶出度，V1为取样体积， A.空白血浆 B.空白血浆+AT+内标
V2为溶出介质体积]。上述试验平行操作3次。AT原料 7.5
药、AT-NS1和AT-NS2的体外溶出曲线见图4。 电信号 5.0 内标
2.5
90 0 AT
80
0 5 10 15 20
70
时间，min
％ 60 C. AT-NS1给药30 min后的血浆样品+内标
累积溶出度， 50 Fig 5 HPLC chromatograms（pharmacokinetic study）
图5 高效液相色谱图（药动学研究）
40
30
20 AT原料药
AT-NS1 2.6.5 标准曲线的绘制及定量下限的考察 取空白血
10
AT-NS2
0 浆200 µL，加入“2.6.2”项下系列标准溶液各适量，得AT
0 4 8 12 16 20 24
取样时间，h 质量浓度分别为 0.030、0.059、0.118、0.474、0.947、1.895
图 4 AT 原料药、AT-NS1 和 AT-NS2 的体外溶出曲线 μg/mL 的血浆样品，按“2.6.3”项下方法处理后，再按
（n＝3） “2.6.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测物
Fig 4 Dissolution curves in vitro of AT raw material，
质量浓度（x，μg/mL）为横坐标、待测物与内标的峰面积
AT-NS1 and AT-NS2（n＝3）
比值（y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程为 y＝
由图 4 可知，1 h 时，AT 原料药、AT-NS1 和 AT-NS2
2
1.281 4x－0.012 0（R ＝0.999 3）。结果，AT 检测血药浓
的累积溶出度分别为 4.54％、35.01％、12.22％；12 h 时，
度的线性范围为0.030～1.895 μg/mL，定量下限为0.030
三者的累积溶出度分别为 24.01％、81.14％、64.69％；24
h 时，三者的累积溶出度分别达到 36.04％、84.87％、 μg/mL。
85.86％。这提示将AT制备成NS后，其体外溶出度明显 2.6.6 精密度试验 按“2.6.5”项下方法配制AT定量下
提高；与AT-NS2相比，AT-NS1的体外溶出更快，但两者 限浓度的血浆样品以及低、中、高质量浓度（0.030、
在24 h时的累积溶出度相当。 0.059、0.947、1.516 μg/mL）的质控样品，按“2.6.3”项下方
2.6 药动学研究 法处理后，再按“2.6.1”项下色谱条件连续进样测定6次，
2.6.1 色谱条件 除进样量为20 µL、流速为0.8 mL/min 考察日内精密度；连续测定 3 d，考察日间精密度。结

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