Page 102 - 2019年2月第30卷第4期

（C-8″），25.8（C-9″），18.3（C-10″）。以上波谱数据及化合 PBS 45 μL，混匀即得质量浓度为 5 mg/mL 的待测化合
物的理化性质与文献[13]基本一致，故确定化合物Ⅴ为
Clausenalansimin A。
化合物Ⅵ：淡黄色油状物（甲醇），分子式为C21H22O5，
1
+
分子量为 354.2。ESI-MS：m/z 377.3[M+Na] 。 H-NMR
（CDCl3，500 MHz）δ：7.93（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），7.82
（1H，d，J＝2.2 Hz，H-2′），7.46（1H，s，H-5），6.87（1H，d，
J＝2.2 Hz，H-3′），6.30（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.52（1H，
m，H-2″），5.48（1H，d，J＝15.6 Hz，H-6″），5.38（1H，dt，
J＝15.6，6.7 Hz，H-5″），4.93（2H，d，J＝7.2 Hz，H-1″），
2.61（2H，d，J＝6.7 Hz，H-4″），1.57（3H，s，8″-CH3 ），1.17
（6H，s，9″-CH3，10″-CH3 ）。 C-NMR（CDCl3，125 MHz）
13
δ：162.7（C-2），115.1（C-3），146.7（C-4），117.8（C-4a），
114.9（C-5），127.6（C-6），150.0（C-7），132.2（C-8），145.0 均值，并按以下公式计算酶抑制率：酶抑制率（％）＝
（C-8a），148.4（C-2′），107.9（C-3′），70.7（C-1″），121.3
（C-2″），143.3（C-3″），43.1（C-4″），124.9（C-5″），141.3
（C-6″），71.0（C-7″），16.5（C-8″），29.9（C-9″，10″）。以上
波谱数据及化合物的理化性质与文献[14]基本一致，故
确定化合物Ⅵ为（E，E）-8-（7-羟基-3，7-二甲基-2，5-二烯
基）补骨脂。
化合物Ⅶ：淡黄色油状物（甲醇），分子式为C21H20O6，
1
+
分子量为 368.4。ESI-MS：m/z 391.2 [M+Na] 。 H-NMR
（CDCl3，500 MHz）δ：7.78（1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），7.70
（1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.39（1H，s，H-5），6.83（1H，d，
J＝2.1 Hz，H-3′），6.37（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），5.69（1H，
t，J＝6.9 Hz，H-2″），5.06（1H，dd，J＝11.9，6.8 Hz，H-1″a）， 虫接种于燕麦培养基上，于 28 ℃条件下培养 7～10 d。
5.01（1H，dd，J＝11.9，6.8 Hz，H-1″b），4.58（1H，m，
H-5″），2.63（1H，m，H-7″），2.44（1H，dd，J＝14.0，6.8 Hz，
H-4″a），2.25（1H，dd，J＝14.0，6.8 Hz，H-4″b），2.04（1H，
ddd，J＝13.0，9.8，5.3 Hz，H-6″a），1.87（1H，dt，J＝13.0，
7.6 Hz，H-6″b），1.75（3H，s，9″-CH3 ），1.25（3H，d，J＝7.3
13
Hz，10″-CH3 ）。 C-NMR（CDCl3，125 MHz）δ ：160.6
（C-2），114.9（C-3），144.5（C-4），116.7（C-4a），113.7
（C-5），126.0（C-6），148.8（C-7），131.5（C-8），144.1
（C-8a），146.9（C-2′），106.9（C-3′），69.8（C-1″），123.7
（C-2″），137.9（C-3″），45.0（C-4″），76.6（C-5″），34.8
（C-6″），33.9（C-7″），179.9（C-8″），17.2（C-9″），15.9
（C-10″）。以上波谱数据及化合物的理化性质与文献
[15]基本一致，故确定化合物Ⅶ为Dihydroindicolactone。
2.3 化合物ⅠⅠ～ⅦⅦ对α-葡萄糖苷酶的抑制活性
采用优化后的PNPG法 进行考察。先配制好PBS
[16]
溶液（pH 6.8，0.2 mol/L）及待测化合物溶液（取化合物
Ⅰ～Ⅶ各1 mg，以DMSO 20 μL溶解；取5 μL该溶液加入
中国药房 2019年第30卷第4期
物溶液）。将以下各溶液在96孔板中混匀：待测化合物
溶液10 μL+PBS 70 μL+以PBS为溶剂的2 U/mL α-葡萄
糖苷酶溶液 20 μL（实验组 A）、10％DMSO-PBS 溶液 10
μL+PBS 70 μL+以 PBS 为溶剂的 2 U/mL α-葡萄糖苷酶
溶液20 μL（阴性对照B）、5 mg/mL阿卡波糖溶液10 μL+
PBS 70 μL + 以 PBS 为溶剂的 2 U/mL α-葡萄糖苷酶溶
液20 μL（阳性对照）、待测化合物溶液10 μL+PBS 90 μL
（背景对照A0 ）、10％ DMSO-PBS溶液10 μL+PBS 90 μL
（空白对照 B0 ）。将 96 孔板置于 37 ℃下温育 15 min，加
入 2.5 mmol/L PNPG 溶液 20 μL；继续 37 ℃下温育 30
min，加入 0.2 mol/L Na2CO3 终止液 80 μL。用酶标仪于
405 nm波长处测定并记录每孔的吸光度，重复3次取平
[16]
[ （B－B0 ）－（A－A0 ）]/（B－B0 ）×100％ （式中，B表示阴性
对照的吸光度，B0表示空白对照的吸光度，A表示实验组
的吸光度，A0表示背景对照的吸光度）。结果，在质量浓
度为0.25 mg/mL时，化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ对α-葡萄糖苷酶的
抑制率分别为（32.4±1.9）％、（37.1±6.0）％、（39.5±
1.1）％，阳性对照阿卡波糖的抑制率为（54.2±4.7）％，表
明化合物Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ具有α-葡萄糖苷酶抑制活性，其余化
合物在相同浓度下的α-葡萄糖苷酶的抑制率均小于
10％。
2.4 化合物ⅠⅠ～ⅦⅦ对全齿复活线虫的致死活性考察
参照马青云等 相关文献进行考察。将全齿复活线
[17]
按贝曼漏斗法，利用多层擦镜纸于无菌水中过滤线虫 3
次，获得线虫悬浮液。取化合物Ⅰ～Ⅶ各 1 mg 溶于
DMSO 20 μL中制成待测化合物溶液。将以下各溶液在
96 孔板中混匀：待测化合物溶液 5 μL（终浓度为 2.5
mg/mL）+线虫悬浮液30 μL（约200～300条线虫）+无菌
水 65 μL（实验组）、DMSO 5 μL+线虫悬浮液 30 μL（约
200～300 条线虫）+无菌水 65 μL（阴性对照组）、阿维菌
素 5 μL（终浓度为 2.5 mg/mL）+线虫悬浮液 30 μL（约
200～300 条线虫）+无菌水 65 μL（阳性对照组）。96 孔
板于室温条件下培养24 h，在解剖镜下观察并统计线虫
死亡数，统计的线虫数量不少于100条，重复3次取平均
值，并按以下公式分别计算线虫死亡率、线虫校正死亡
[17]
率：线虫死亡率（％）＝死亡线虫数/线虫总数×100％ ；
线虫校正死亡率（％）＝[（处理线虫死亡率－对照线虫
死亡率）/（1－对照线虫死亡率）]×100％ 。式中，处理
[17]
线虫死亡率是指阳性对照药和各化合物处理的实验组；
对照线虫死亡率是指阴性对照组。结果，在质量浓度为
China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4 ·521 ·