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返魂草（Senecionis cannabifolii Herba，SCH）为我国       径：0.3～1.25 mm，沧州宝恩吸附材料科技有限公司，批
        东北地区的一种特色药材资源，其为菊科千里光属植                             号：091011）；DMEM 培养基（批号：8117021）、胎牛血清
        物返魂草的干燥全草，具有理气化痰、镇咳平喘等功效 。                         （批号：1808455）均购自美国 Gibco 公司；磷酸盐缓冲液
                                                      [1]
        以返魂草为原料的单方制剂如返魂草颗粒、肺宁口服液                           （PBS，中国 Biosharp 公司，批号：170663）；脂多糖（LPS，
        等已广泛用于慢性支气管炎、肺内感染等疾病的治疗                      [2-4] 。  批号：095m4164V，纯度：≥99％）、四甲基偶氮唑盐
        目前，对返魂草活性成分的研究主要针对的是酚酸类和                           （MTT，批号：MKBN7264V，纯度：98％）均购自美国Sig-
        黄酮类成分     [5-6] ，而对其多糖组分的研究尚未见报道。鉴                  ma公司；白细胞介素1β（IL-1β，批号：180122）、IL-6（批
        于多糖组分具有增强机体免疫力的作用，而免疫系统紊                            号：171229）、肿瘤坏死因子α（TNF-α，批号：180122）ELI-
                                            [7]
        乱是机体炎症反应发生、发展的主要诱因 ，因此多糖组                           SA（酶联免疫吸附法）检测试剂盒均购自上海碧云天生
        分应作为返魂草抗炎作用不可缺少的物质基础之一，对                            物技术有限公司；乙腈为色谱纯，二甲基亚砜（DMSO）
        其进行研究具有重要意义。为此，本研究对返魂草的多                            等试剂均为分析纯，水为超纯水。
        糖组分进行分离，并筛选及表征其中具有免疫增强活性                            1.3 细胞
        的有效组分，以期为明确返魂草中的免疫增强活性物质                                小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞株由中国科学
        提供参考。                                               院上海细胞库提供。
        1 材料                                                2 方法与结果
        1.1 仪器                                              2.1 多糖组分提取
            UV-5100 型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有                          取SCHE 200 g，加适量水溶解，经D101大孔吸附树
        限公司）；BSA224S-CW 型电子分析天平（德国 Sartorius                脂柱，以水洗脱；收集水洗液，加95％乙醇使含醇比例分
        公司）；LC-2010型高效液相色谱（HPLC）仪，包括示差折                     别至 50％和 80％进行醇沉；以 3 000 r/min 离心 10 min，
        光检测器、LabSolutions 1.0.0.1凝胶渗透色谱软件（日本                沉 淀 加 适 量 水 溶 解 ，冻 干 ，分 别 得 50％ 醇 沉 样 品
        Shimadzu公司）；TSQ8000型气质联用（GC-MS）仪（美国                （SCHE-1）和 80％ 醇 沉 样 品（SCHE-2），收 率 分 别 为
        Thermo Fisher Scientific公司）；GZX-9076MBE型电热鼓         10.14％和 7.21％（收率＝醇沉样品质量/浸膏质量×
        风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；NDK200-                       100％）。
        2型氮吹仪（杭州米欧仪器有限公司）；TD5A-WS型离心                        2.2  免疫增强活性组分筛选
        机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；MCO-230AICU-                     2.2.1 MTT 法检测细胞活性           取处于对数生长期的
        VL-PC 型 CO2培养箱（日本Panasonic公司）；iMark型酶               RAW264.7 细胞，以 1×10 个/mL 的密度接种于 96 孔板，
                                                                                 4
        标仪（美国Bio-Rad公司）。                                    每孔 100 μL，置于 37 ℃、5％CO2培养箱中培养过夜后，
        1.2  药品与试剂                                          将其分为空白组、阴性对照组（含血清培养基）、LPS 组
            返魂草浸膏（SCHE，吉林益民堂制药有限公司，批                       （阳性对照，1 μg/mL）及 SCHE-1、SCHE-2 低、高剂量组
        号：20170709，纯度：60.87％）；葡萄糖醛酸对照品（批号：                 （0.5、1 mg/mL，均以醇沉样品计）。各给药组剂量根据
        K14J759017，纯 度 ：98％）、岩 藻 糖 对 照 品（批 号 ：              本课题组前期预试验结果设置（下同），每组设置5个复
        X16N8Y48166，纯度：98％）、阿拉伯糖对照品（批号：                     孔。吸弃各孔上清液，空白组加不含血清 DMEM 培养
        Z29O7H23894，纯度：98％）、木糖对照品（批号：B02M6W1，               基 100 μL，阴性对照组加含血清DMEM培养基100 μL，
        纯度：98％）、甘露糖对照品（批号：C16J8H28561，纯度：                   各给药组加含相应剂量药物的 DMEM 培养基 100 μL，
        98％）、半 乳 糖 对 照 品（批 号 ：Z20O7H23186，纯 度 ：             置于 37 ℃、5％CO2培养箱中培养 24 h 后，每孔加 5 mg/
        98％）、半乳糖醛酸对照品（批号：S29J8I40844，纯度：                    mL 的 MTT 溶液（溶剂为 pH 7.4 的 PBS）10 μL，置于
        98％）、葡萄糖对照品（批号：S08J6G1，纯度：98％）、鼠李                   37 ℃、5％CO2培养箱中培养 4 h。弃去上清液，各孔加
        糖对照品（批号：SJ0715GA13，纯度：98％）均购自上海                     DMSO 150 μL，振荡 10 min 后，使用酶标仪于 490 nm
        源叶生物科技有限公司；牛血清白蛋白（BSA，中国计量                          波长处测定吸光度（A），计算细胞活性[细胞活性＝
        科学研究院，批号：161205，纯度：100％）；葡聚糖（分子                    （A 给药组－A 空白组）/（A 阴性对照组－A 空白组）×100％]。采用 SPSS
        量：1 000 Da，批号：BCBS5664V，纯度：98％）、葡聚糖（分               13.0软件对数据进行统计分析。计量资料以x±s表示，
        子量：5 000 Da，批号：BCBS8248V，纯度：98％）、葡聚糖                采用单因素方差分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。
        （分子量：12 000 Da，批号：BCBR5837V，纯度：98％）、1-              不同剂量SCHE对RAW264.7细胞活性的影响见表1。
        苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP，批号：M30938，纯度：                        由表 1 可知，与阴性对照组比较，LPS 组及 SCHE-1
        99％）、三氟乙酸（TFA，批号：O47864，纯度：99％）均购                   各剂量组均可显著增强 RAW264.7 细胞的细胞活性
        自国药集团化学试剂有限公司；D101大孔吸附树脂（粒                         （P＜0.01），而SCHE-2各剂量组未表现出明显影响（P＞


        ·524  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4                                   中国药房    2019年第30卷第4期
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