Page 100 - 2019年2月第30卷第4期
P. 100

黄皮[Clausena lansium（Lour.）Skeels]为瑞香科（Ru-      1.3 药材
        taceae）黄皮属植物，具有很高的药用价值，其果实在民                           黄皮果实于 2011 年 5 月购自海南省儋州市中国热

        间主要用于治疗食积胀满、脘腹疼痛、疝痛、痰饮、咳喘                          带农业科学院农贸市场，经中国热带农业科学院热带生
        等病症，叶可用于防治感冒，根则可用于治气痛 ；黄皮                          物技术研究所王军博士鉴定为黄皮[Clausena lansium
                                                 [1]
        中含有丰富的生物碱类、香豆素类和挥发油类化合物，                           （Lour.）Skeels]，黄皮果实标本（编号：CL20110501）现存
        具有保肝解毒、降糖、抑菌、抗肿瘤和促智等生物活性                    [1-3] 。  放于中国热带农业科学院热带生物技术研究所。
        迄今，国内外对黄皮的根、茎、叶等的化学成分研究已有                          2 方法与结果
        较多报道    [4-6] ，但对种子部位的研究则相对较少。中国热                  2.1 黄皮种子中香豆素类化合物的提取与分离
        带农业科学院热带生物技术研究所戴好富研究员课题                                取黄皮种子8.0 kg，晒干粉碎后，于室温下用95％乙
        组前期对黄皮的果皮和种子分别进行研究，发现黄皮果                           醇浸提3次，每次7 d。所得浸提液过滤后经减压浓缩得
                                             [8]
                              [7]
        皮中含有丰富的香豆素类 和咔唑类生物碱 ，而种子中                          乙醇粗浸膏（500.0 g）；随后将其分散于水中制成悬浊
        则富含酰胺类生物碱         [9-10] ，并且种子粗提取物具有α-葡萄           液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别减压浓
        糖苷酶抑制活性和全齿复活线虫致死活性。本研究在                            缩得到石油醚萃取物（200.0 g）、乙酸乙酯萃取物（84.6
                                                           g）、正丁醇萃取物（120.5 g）和水相（80.0 g）4个部分。
        戴好富研究员课题组前期研究的基础上对黄皮种子中
                                                               取乙酸乙酯萃取物 84.6 g，甲醇重结晶除去大量黄
        的化学成分进行研究，并初步探讨了其中香豆素类化合
                                                           色结晶后，剩余样品经 D101 大孔吸附树脂以甲醇-水
        物的α-葡萄糖苷酶抑制活性和全齿复活线虫致死活性，
                                                           （40 ∶ 60～100 ∶ 0，V/V）和丙酮为流动相先后进行洗脱，按
        以期为其开发利用提供依据。
                                                           每个梯度分段收集，通过薄层色谱（TLC）检测，合并
        1 材料
                                                           TLC 显色相同的部分，得到 13 个流份 Fr.1～Fr.13。Fr.5
        1.1  仪器
                                                           （3.2 g）经RP-18反相色谱柱，以甲醇-水（30 ∶ 70～100 ∶ 0，
            Avance AV-500 型核磁共振波谱仪[瑞士 Brucker 公
                                                           V/V）为流动相进行梯度洗脱得到 10 个流份 Fr.5.1～
        司，四甲基硅烷（TMS）为内标]；amaZon SL 型离子阱电
                                                           Fr.5.10。Fr.5.3经凝胶柱色谱，以甲醇为流动相进行洗脱
        喷雾质谱仪（德国 Bruker 公司）；1260 型高效液相色谱
                                                           得到Fr.5.3.4，后经半制备高效液相色谱，以20％乙腈-水
        仪，包括G1311C四元梯度泵、G1329B自动进样器、Agi-
                                                           （20 ∶ 80，V/V）为流动相，分离得到化合物Ⅰ（1.8 mg）。
        lent OenLAB 工作站、G1316A 紫外检测器（美国 Agilent
                                                           Fr.5.6经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（0∶100～100∶0，V/V）为
        公司）；SUMMIT P680A 半制备高效液相色谱仪，包括
                                                           流动相进行梯度洗脱得到 7 个流份 Fr.5.6.1～Fr.5.6.7。
        P680 四元梯度泵、7725Ⅰ手动进样器、Chromeleon 工作
                                                           Fr.5.6.4 经凝胶柱色谱，以甲醇为流动相，分离得到化合
        站、UVP170U 紫外检测器（美国 Dionex 公司）；ELx800
                                                           物Ⅵ（50.8 mg）和流份 Fr.5.6.4.4。Fr.5.6.4.4 经半制备高
        型全自动酶标仪（美国BioTek公司）；SW-40型超净工作
                                                           效液相色谱，以 20％乙腈-水（20 ∶ 80，V/V）为流动相，分
        台（上海博讯实业有限公司）；IMF-2型倒置显微镜（日本                       离得到化合物Ⅴ（8.3 mg）。Fr.5.6.5 反复经硅胶柱色谱

        Olympus公司）。
                                                           分离得到化合物Ⅲ（13.8 mg）。
        1.2  药品与试剂                                             Fr.6（7.2 g）经RP-18反相色谱柱，以甲醇-水（40∶60～
            对 硝 基 苯 基 -α-D- 吡 喃 葡 萄 糖 苷（PNPG，批 号 ：         100∶0，V/V）为流动相进行梯度洗脱得到8个流份Fr.6.1～
        N0877）、阿卡波糖（批号：Y0000500）、磷酸盐粉末（PBS，                Fr.6.8。Fr.6.6经硅胶柱色谱，以氯仿-甲醇（0∶100～100∶0，
        批号：P3813-10PAK）均购自美国 Sigma 公司；阿维菌素                 V/V）为流动相进行梯度洗脱得到 6 个流份 Fr.6.6.1～
       （北京索莱宝科技有限公司，批号：A9000）；柱层析硅胶                        Fr.6.6.6。Fr.6.6.3再次经硅胶柱色谱分离后，经凝胶柱色
       （200～300 目、60～80 目）（青岛海洋化工有限公司）；                    谱，以甲醇为流动相纯化得到化合物Ⅱ（20.5 mg）。
        Sephadex LH-20、RP-18 反相色谱柱填料（德国 Merck 公            Fr.6.6.4经半制备高效液相色谱，以20％乙腈-水（20∶80，

        司）；D101 型大孔吸附树脂（山东鲁抗医药股份有限公                        V/V）为流动相，分离得到化合物Ⅳ（1.9 mg）和化合物Ⅶ
        司）；氯仿（氘代试剂，德国Merck公司）；甲醇为色谱纯，                      （1.7 mg）。
        乙醇、石油醚、乙酸乙酯、二甲基亚砜（DMSO）、碳酸氢                        2.2 结构鉴定
                                                                         1
                                                                                        13
        钠（Na2CO3 ）、正丁醇、丙酮、甲醇、氯仿等试剂均为分析                         采用氢谱（H-NMR）和碳谱（ C-NMR）方法对化合
        纯，其余试剂均为工业重蒸试剂，水为超纯水。                              物Ⅰ～Ⅶ的结构进行鉴定，其结构式见图1。

        中国药房    2019年第30卷第4期                                               China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4  ·519  ·
   95   96   97   98   99   100   101   102   103   104   105