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84.32                                       品溶液、供试品溶液各10 μL，按“2.5.1”项下色谱条件进
                                                            样测定，记录色谱峰的保留时间，进行SCHE-1单糖组分
                75.62
                                                            的分析，结果见图2。由图2可知，SCHE-1是由甘露糖、
                66.91
               mV                                           鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖组成，
               U，
                58.20                                       其摩尔比为 0.171 ∶ 0.099 ∶ 1.000 ∶ 0.218 ∶ 1.166 ∶ 0.920，提
                                                            示SCHE-1主要由半乳糖醛酸、半乳糖和阿拉伯糖组成，
                49.49
                                                            因 SCHE-1 组分中含有阿拉伯糖和少量的鼠李糖，说明
                40.78
                  0.501  6.302  12.10  17.90  23.70  29.50  SCHE-1组分可能主要为果胶类多糖。
                                 t，min
                                                                                    半乳糖醛酸
                       图1 SCHE-1的HPLC图                        300                          阿拉伯糖
                 Fig1 HPLC chromatograms of SCHE-1            200                       27.797  半乳糖
                                                              mV               甘露糖  鼠李糖 葡萄糖
        mm，5 μm）；流动相A：pH 6.8的PBS-乙腈（85 ∶ 15，V/V）；             U，                            33.141  34.539
                                                              100
        流动相 B：pH 6.8 的 PBS-乙腈（60 ∶ 40，V/V）；流速：0.9                                19.008  23.509  24.149  25.216  31.136  36.576
                                                               0
        mL/min；检测波长：250 nm；柱温：40 ℃；进样量：10 μL。                   0   5   10  15   20  25  30  35  40  45   50
                                                                                    t，min
        2.5.2  对照品溶液的制备          取甘露糖、鼠李糖、葡萄糖                      图2 SCHE-1中单糖组分的HPLC图
        醛酸、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、半乳糖、半乳糖醛酸、葡                          Fig2 HPLC chromatogram of monosaccharide com-
        萄糖对照品适量，分别加水溶解制得单一对照品贮备                                   position of SCHE-1
        液。取上述贮备液各 5 mL，分别置于螺帽试管中，加                          2.6 SCHE-1的甲基化分析
        0.5 mol/L PMP 甲醇溶液 6 mL、0.3 mol/L 氢氧化钠溶液            2.6.1 GC-MS 分析条件       色谱条件：DB-1 MS 石英毛
        5 mL，在70 ℃水浴反应1 h；加0.3 mol/L盐酸溶液5 mL                细 管 柱（30 m × 0.32 mm，0.33 μ m），进 样 口 温 度 为
        中和，用等体积三氯甲烷萃取3次；取水层，放置过夜，经                          250 ℃；升温程序为起始温度 140 ℃，保持 7.5 min，以
        0.45 μm微孔滤膜滤过，得各对照品的PMP衍生物溶液，                       2 ℃/min 升至 250 ℃，保持 20 min；载气为氮气，流速为
        浓度为2 mmol/L，作为单一对照品溶液。                              1 mL/min，进样量为1 µL，分流比为50∶1。质谱条件：电
        2.5.3  供试品溶液的制备           精密称取 SCHE-1 样品 20         喷雾离子源，喷雾电压为 4 kV，壳气为 60 arb，辅助气
        mg，加 2 mol/L TFA 于 100 ℃水解 8 h，衍生化方法同              （N2 ）为 10 arb，金属毛细管温度为 280 ℃，质荷比（m/z）
       “2.5.2”项下“加 0.5 mol/L PMP 甲醇溶液 6 mL……经               为35～550。
        0.45 μm 微孔滤膜滤过”，即得供试品的 PMP 衍生物溶                     2.6.2  供试品的制备       精密称取SCHE-1样品20 mg，置
        液，作为供试品溶液。                                          于螺母试管中，加脱水DMSO 0.5 mL，密封搅拌过夜；加
        2.5.4  方法学考察 （1）精密度试验。取“2.5.2”项下各                   NaOH-DMSO 混悬液 0.4 mL，密封搅拌 30 min，再加碘
        对照品溶液适量，按“2.5.1”项下色谱条件连续进样测定                        甲烷0.3 mL、水2 mL终止反应；加三氯甲烷3 mL萃取，
        6 次，记录峰面积。结果，甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、                         取三氯甲烷层吹干，制得甲基化衍生物，再经水解、还
        葡 萄 糖 、半 乳 糖 和 阿 拉 伯 糖 峰 面 积 的 RSD 分 别 为            原、乙酰化，即得。
        1.23％、0.88％、0.73％、1.46％、0.74％、1.11％（n＝6），其          2.6.3  方法学考察 （1）精密度试验。取“2.6.2”项下供
        余3种成分未检出，表明仪器精密度良好。（2）稳定性试                          试品溶液适量，按“2.6.1”项下试验条件连续进样测定 6
        验。取“2.5.3”项下供试品溶液适量，分别于室温下放置                        次，记录阿拉伯糖的保留时间。结果，阿拉伯糖保留时
        0、6、12、18、24、30 h 时按“2.5.1”项下色谱条件进样测                间的RSD为0.67％（n＝6），表明方法精密度良好。（2）稳
        定，记录峰面积。结果，甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡                          定性试验。取“2.6.2”项下供试品溶液（批号：20170715）
        萄糖、半乳糖和阿拉伯糖峰面积的 RSD 分别为 0.74％、                      适量，分别于室温下放置 0、6、12、18、24、30 h 时按
        1.22％、1.77％、0.51％、1.94％、1.36％（n＝6），其余 3 种          “2.6.1”项下试验条件进样测定，记录阿拉伯糖的保留时
        成分未检出，表明供试品溶液于室温下放置30 h内基本                          间。结果，阿拉伯糖保留时间的 RSD 为 1.91％（n＝6），
        稳定。（3）重复性试验。取SCHE-1样品适量，共6份，按                       表明供试品溶液于室温下放置 30 h 内基本稳定。（3）重
       “2.5.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.5.1”项下色谱                     复性试验。取SCHE-1样品适量，共6份，按“2.6.2”项下
        条件进样测定，记录峰面积。结果，甘露糖、鼠李糖、半                           方法制备供试品溶液，再按“2.6.1”项下试验条件进样测
        乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖峰面积的 RSD 分                         定，记录阿拉伯糖的保留时间。结果，阿拉伯糖保留时
        别为 0.99％、1.56％、1.59％、1.98％、1.11％、1.73％（n＝           间的RSD为1.44％（n＝6），表明本方法重复性良好。
        6），其余3种成分未检出，表明本方法重复性良好。                            2.6.4 SCHE-1的甲基化分析         甲基化分析是测定多糖
        2.5.5  SCHE-1中单糖组分的分析           分别吸取上述对照            糖链各糖残基连接方式的重要手段之一。其原理是将


        ·526  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 4                                   中国药房    2019年第30卷第4期
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