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功能受到损伤，使得细菌和内毒素穿越肠黏膜屏障播                             1.3 动物
        散至肠系膜淋巴结和全身器官，这一过程被称为细菌                                 SPF 级健康雄性 SD 大鼠 85 只，（6.2±2.7）周龄，体
        移位  [2-3] 。细菌移位可诱发全身性炎症反应，而这又是失                     质量（300±18）g，由北京维通利华实验动物技术有限公
        血性休克后继发多器官功能障碍综合征（MODS）与多                           司提供[动物使用合格证号：SCXK-（京）2013-0009]。所
        器官衰竭（MOF）的重要原因之一 。因此，在失血性休                          有大鼠均分笼适应性饲养7 d，室温控制为20～25 ℃，湿
                                     [4]
        克发生时对肠道进行有效保护，对防止肠道内细菌和内                            度为55％，昼夜更替周期为12 h。
        毒素移位、减轻由于缺血造成的机体损伤具有积极意义。                           2 方法
            已有研究证实，降低创伤失血性休克高病死率的关                          2.1 SPV溶液的制备
        键在于抑制全身炎症反应综合征（SIRS）向 MODS 发                            精密称取蒙脱石散 0.3 g、硫酸多黏菌素 B 0.5 mg
          [5]
        展 。相关拮抗炎症介质和内毒素是近年创伤肠道保护                           （相当于0.5万单位）和维生素B6 5 mg，溶于适量生理盐
        的研究方向之一。由于内毒素为大分子聚合物（1 000                          水中，得蒙脱石散、硫酸多黏菌素B、维生素B6质量浓度
        kDa），单纯通过透析很难将其有效清除，故目前多采用                          分别为 60、0.1、1 mg/mL 的 SPV 溶液（总体积为 5 mL），
        吸附剂（活性炭、树脂、免疫吸附剂）的方法来清除内毒                           即为SPV低剂量；其中、高剂量药物成分是低剂量的2、3
          [6]
        素 ，而上述吸附剂存在生产工艺复杂、药源少、价格昂                           倍。上述剂量设置均参照2015年版《中国药典》（二部）                   [8]
                 [7]
        贵等缺点 ，故开展新型吸附剂的研究很有意义。鉴于                            规定，并按照人用临床等效剂量换算而得。
        此，本研究以蒙脱石散（Smecta）、多黏菌素 B（Polymyx-                  2.2 分组与给药
        in B）、维生素B6 （Vitamin B6 ）为原料，制成新型内毒素亲                   所有大鼠禁食、不禁水 12 h 后，随机分为正常组（5
        和吸附剂（简称“SPV”），并初步探讨其对失血性休克模                         只）、休克组[每时间点（1、4、8、16 h）各 5 只，共 20 只]以
        型大鼠肠壁通透性和肠源性细菌移位的影响，以期为早                            及 SPV 低、中、高剂量组[各剂量组每时间点（1、4、8、16
        期创伤失血性休克相关的细菌移位研究提供参考。                              h）各 5 只，共 60 只]。给药组大鼠均灌胃相应药物 1 次
        1 材料                                               （分别灌胃“2.1”项下 SPV 溶液 5、10、15 mL），正常组和
        1.1  仪器                                             休克组大鼠均灌胃生理盐水5 mL 1次。
            BL-410型生物机能实验系统（成都泰盟科技有限公                       2.3  造模
        司）；A120S 型电子天平（德国 Sartorius 公司）；SABA-18                 末次给药 30 min 后，除正常组外，其余各组大鼠均
        型全自动生化分析仪（意大利 GNR 公司）；3MK 型离心                       以 10％水合氯醛麻醉，以仰卧位固定于手术台上，暴露
        机（美国Sigma公司）；E-200型生物光学摄影显微镜（日                      一侧颈内动、静脉，连接生物机能实验系统，动态监测大
        本 Nikon 公司）；恒宇电热恒温培养箱（上海跃进医疗器                       鼠的平均动脉压（MAP）；同时，于显微镜下放置导管，注
        械厂）；UV1901 型双光分光光度计（上海棱光技术有限                        入肝素钠注射液125单位/kg，暴露股动脉进行动脉插管
        公司）；SP-1920型紫外-可见分光光度计（上海光谱仪器                       放 血 ，在 10 min 内 使 其 MAP 降 至（35 ± 5）mmHg（1
        有限公司）。                                              mmHg＝0.133 kPa）并维持，建立大鼠失血性休克模型。
        1.2  药品与试剂                                          若休克状态能稳定[即大鼠存活且 MAP 维持在（35±5）
            蒙脱石散[商品名：思密达，博福-益普生（天津）制药                       mmHg]30 min 则表明模型复制成功。随后经股静脉缓
        有限公司，批准文号：国药准字 H20000690，规格：3 g]；                   慢回输抽出的血液，并输注放血量2倍的乳酸钠林格注
        注射用硫酸多黏菌素B（上海上药第一生化药业有限公                            射液进行复苏（上述操作于 20 min 内完成），监测 MAP
        司，批准文号：国药准字 H31022631，规格：50 mg ∶ 50 万               恢复至休克前的 90％。正常组大鼠进行相同的手术操
        单位）；维生素 B6注射液（石药集团欧意药业有限公司，                         作，但是不放血、不回输血液。
        批准文号：国药准字 H13021022，规格：2 mL ∶ 0.1 g]；乳              2.4 血清标本的采集与相关指标的检测
        酸钠林格注射液（安徽环球药业股份有限公司，批准文                                分别于复苏后的 1、4、8、16 h 时常规消毒休克组和
        号：国药准字 H20043020，规格：500 mL∶ 乳酸钠 1.55 g、             各给药组大鼠腹部皮肤，沿正中切口切开腹腔，轻轻拨
        氯化钠3.0 g、氯化钾0.15 g、氯化钙0.10 g）；10％水合氯                开肠管暴露下腔静脉，采集静脉血2 mL；正常组大鼠于
        醛（青 岛 宇 龙 海 藻 有 限 公 司 ，批 准 文 号 ：国 药 准 字             相同时间点同法采集静脉血 2 mL。将所采静脉血放至
        H37022673，规格：100 mL∶ 100 g）；肝素钠注射液（常州               离心管中，3 000 r/min 离心 60 s，分离血清，采用比色法
        千红生化制药股份有限公司，批准文号：国药准字                              以双光分光光度计检测血清中 DAO 活性，采用分光光
        H32022088，规格：2 mL∶ 12 500 单位）；普通琼脂培养基               度法以紫外-可见分光光度计测定血清中的内毒素、D-
        （上海华康科技开发公司，批号：20140628）；D-乳酸检测                     乳酸含量。严格按照相关试剂盒说明书操作。
        试 剂 盒（上 海 酶 联 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 ：                2.5 肠道细菌移位率的计算
        H20019002）；二胺氧化酶（DAO）和内毒素试剂盒（上海                         取血后，采用颈椎脱臼法处死各组大鼠，剪取其全
        星 科 生 物 科 技 有 限 公 司 ，批 号 分 别 为 H20030890、           部肠系膜淋巴结，称定质量后匀浆。取上述组织匀浆
        H20053009）；其余试剂均为分析纯，水为超纯水。                         0.1 mL，以涂菌法接种至普通琼脂培养基中，于 37 ℃恒


        ·208  ·  China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2                                   中国药房    2019年第30卷第2期
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