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μmol/L for SH-SY5Y cells）were investigated by Transwell cell migration and invasion experiments. The protein levels of MMP-2，
MMP-9，β-catenin，GSK3β and p-GSK3β in IMR-32 cells and SH-SY5Y cells were tested by Western blotting assay after treated
with TET of above concentrations. RESULTS：TET with 5，10，15，20 μ mol/L can reduce the survival rate of IMR-32 cells and
SH-SY5Y cells significantly（P＜0.05 or P＜0.01）. IC 50 of which to IMR-32 cells and SH-SY5Y cells were 10.148 and 14.461 μmol/L，
respectively. Results of migration and invasion experiments showed that compared with normal control group，the number of
transmembrane cells was decreased significantly in TET group（P＜0.01）. Results of Western blotting assay showed that compared
with normal control group，the protein expression levels of MMP-2，MMP-9，β-catenin and p-GSK3β were decreased significantly in
TET group （P＜0.01）. CONCLUSIONS：TET shows significant inhibitory effects on the proliferation，migration and invasion
ability of neuroblastoma cells，the mechanism of which may be associated with down-regulating the protein expression of MMP-2
and MMP-9 and inhibiting Wnt/β-catenin signaling pathway.
KEYWORDS Tetrandrine；Neuroblastoma；IMR-32 cell；SH-SY5Y cell；Proliferation；Migration；Invasion

神经母细胞瘤（Neuroblastoma，NB）是儿童常见的 链霉素（美国Sigma-Aldrich公司）；1640培养基、DMEM/
恶性实体肿瘤，其起源于交感神经神经嵴，属于神经内 F12 培养基、胎牛血清（美国 Gibco 公司）；Matrigel 基质
分泌性肿瘤；由于NB具有较高的异质性，且其存在恶性 胶（美国BD公司）；金属基质蛋白酶2（MMP-2）兔单抗、
程度高、生长迅速、容易转移等特点，故患者治疗效果 MMP-9兔单抗（美国Santa Cruz公司）；β-catenin兔单抗、
[1]
差、预后差 。目前 NB 的治疗手段主要包括手术切除、 糖 原 合 成 激 酶 3 β（GSK3 β）兔 单 抗 、磷 酸 化 GSK3 β
化疗、放疗、骨髓/造血干细胞移植及生物治疗等，但一旦 （p-GSK3β）兔单抗（美国 CST 公司）；β-actin 抗体（美国
[2]
NB患者出现肿瘤转移，则其病死率极高 。 Abcam 公司）；辣根过氧化物酶标记抗体（二抗，北京博
粉防己碱（Tetrandrine，TET）属于双苄基异喹啉类 尔西科技有限公司）；胰酶（广州碧云天有限公司）；二甲
生物碱，是从粉防己的根块中提取出的有效成分，在治 基亚砜（DMSO）、四甲基偶氮唑蓝（MTT）（美国 Sigma
疗高血压、心律不齐、关节炎、炎症甚至矽肺等方面发挥 公司）；多聚甲醛（北京雷根生物技术有限公司）；TBST
[6]
[5]
着重要作用 [3-4] ；此外，其在抗肿瘤如肝癌 、胃癌 、膀胱 缓冲液、结晶紫（北京索莱宝科技有限公司）；化学发光
[8]
癌 及肾癌 等方面也具有一定功效。研究表明，TET主 （ECL）试剂、BCA 试剂（美国 Pierce 公司）；蛋白上样缓
[7]
要通过直接的细胞毒性作用、抑制细胞增殖、诱导癌细 冲液（北京普利莱基因技术有限公司）；其余试剂均为分
胞凋亡、保护正常组织免受放射损伤以及抗转移、抗血 析纯或实验室常用规格；pH 7.2 磷酸缓冲盐溶液（PBS）
管再生等途径发挥较好的抗肿瘤作用，其主要作用机制 为实验室自制；水为双蒸水。
[9]
可能是激活线粒体死亡通路，进而诱导肿瘤细胞凋亡 。 1.3 细胞
但TET 用于NB治疗的相关研究报道较少。 人神经母细胞瘤细胞系 IMR-32 细胞、SH-SY5Y 细
IMR-32 和 SH-SY5Y 细胞系来源于人 NB 细胞系， 胞（美国ATCC细胞库）。
其在细胞形态和功能上与正常人神经细胞有较多相似 2 方法
之处，因而成为颅内肿瘤研究的重要细胞模型之一 。 2.1 细胞培养
[10]
本研究以这类细胞系为研究对象，考察 TET 对 NB 细胞 将 IMR-32 细胞、SH-SY5Y 细胞分别培养于含 10％
的增殖以及迁移、侵袭能力的影响，并通过检测信号通 胎牛血清、100 μg/mL 青霉素、100 μg/mL 链霉素的 1640
路相关蛋白水平的变化探讨TET抑制NB细胞的作用机 培养基或 DMEM/F12 培养基（以下各试/实验步骤相
制，以期为 TET 临床用于治疗 NB 以及探索新的 NB 治 同），在 37 ℃、5％ CO2培养箱中培养。细胞每隔 2～3 d
疗靶点提供实验依据。 进行换液，待细胞生长至80％～90％融合度时使用胰酶
1 材料 进行消化传代培养。
1.1 仪器 2.2 TET对NB细胞的毒性作用考察
VIOS 160i 型 CO2恒温培养箱（美国 Thermo Fisher 采用 MTT 法进行检测。取对数生长期的 IMR-32
Scientific 公司）；Transwell 小室（美国 Corning 公司）；细 细胞和 SH-SY5Y 细胞，按 8 000 个/孔接种于 96 孔板。
胞培养板（上海晶安生物科技有限公司）；JIDI-17R型微 待细胞贴壁生长后吸弃培养基，加入终浓度分别为0（空
量高速冷冻离心机（广州吉迪仪器有限公司）；BDS200 白对照）、2.5、5、10、15、20 μmol/L 的TET甲醇溶液，每种
型倒置光学显微镜（北京奥特伟业光学仪器有限公司）； 浓度设置 5 个复孔。将细胞置于 37 ℃、5％CO2培养箱
DG5031 型酶联免疫检测仪（上海珂准仪器有限公司）； 培养 24 h；吸弃上清液，分别加入含 1 mg/mL MTT 的培
HCB1502型电子天平（英国ADAM公司）。 养基 200 μL，继续培养 3 h；培养完毕后吸弃上清液，加
1.2 药品与试剂 入DMSO 150 μL，置于振荡器上振荡10 min。采用酶联
TET 对照品（批号：T2695，纯度：≥98％）、青霉素、 免疫检测仪在490 nm波长处检测细胞光密度（OD）值，计

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