Page 64 - 2019年1月第30卷第2期
P. 64

BP211D 型 电 子 分 析 天 平（德 国 Sartorius 公 司）；           分别获得石油醚部位13 g、乙酸乙酯部位35 g、水饱和正
        KQz3200E 型超声波清洗机（天鹏电子新技术有限公                        丁醇部位303 g。
        司）；AVANCE Ⅲ 500 傅里叶变换核磁共振仪（德国                      2.2 乙酸乙酯部位的分离纯化
        Bruker 公司）；DNP-9082BS-Ⅲ电热恒温培养箱（上海新                     取乙酸乙酯部位浸膏，经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-
        苗医疗器械制造有限公司）；MD200-2型氮吹仪（杭州奥                       甲醇（100 ∶ 0、100 ∶ 2、100 ∶ 5、100 ∶ 10、100 ∶ 20、100 ∶ 50，V/
        盛仪器有限公司）；DZF-6050 型真空干燥箱（上海一恒                      V）梯度洗脱，得到 78 个流分，经薄层色谱检视后合并，
        科学仪器有限公司）。                                         得到 12 个流分。其中，第 6、8、11 个流分分别经开放式
        1.2 试剂                                             ODS柱，以水-甲醇（1∶0、7∶3、5∶5、3∶7、0∶1，V/V）梯度洗
            柱色谱硅胶（100～200 目，批号：0140027）、硅胶 G               脱，经薄层色谱检视后合并，第6、8、11个流分分别得到
        薄层层析板（批号：20140520）均由青岛海洋化工有限公                      16 个流分（Fr.1～Fr.16）、11 个流分（Fr.17～Fr.27）以及 7
        司提供；AM12S05-3010WT YMC-Pack ODS-AM半制备              个流分（Fr.28～Fr.34）。Fr.12 经半制备液相色谱，以水-
        色谱柱（300 mm×10 mm，粒径：5 μm，日本 YMC 公司）；               甲醇（2.3 ∶ 7.7，V/V）等度洗脱，经硅胶柱色谱纯化、薄层
        AM12S05-3010WT YMC-Pack ODS- AM 色 谱 柱（300          色谱检视，合并流分后得到化合物1（4.6 mg）和化合物2
        mm×10 mm，粒径：5 μm，批号：1030000103，北京绿百草               （23.7 mg）；Fr.13 经半制备液相色谱，以水-甲醇（1.5 ∶
        科技发展有限公司）；其他有机试剂均为分析纯；水为纯                          8.5，V/V）等度洗脱，经硅胶柱色谱纯化、薄层色谱检视，
        化水。                                                合并流分后得到化合物 3（64.1 mg）和化合物 4（6.9
        1.3 菌株                                             mg）；Fr.22 经半制备液相色谱，以水-甲醇（3 ∶ 7，V/V）等
            代号为 C-1 的真菌菌株（中国工业微生物菌种保藏                      度洗脱，经薄层色谱检视，合并流分后得到化合物 5
        管理中心）。                                             （59.3 mg）和化合物 6（13.1 mg）；Fr.33 经半制备液相色
        1.4  药材                                            谱，以水-甲醇（3.3 ∶ 6.7，V/V）等度洗脱，经硅胶柱色谱纯
            人参药材（批号：20150903）于2015年购自吉林省仙                  化、薄层色谱检视，合并流分后得到化合物 7（4.8 mg）；
        草医药药材有限公司，经长春中医药大学药学院翁丽丽                           Fr.34 经半制备液相色谱，以水-甲醇（2.2 ∶ 7.8，V/V）等度
        教授鉴定为五加科植物人参（Panax ginseng C. A. Mey.）             洗脱，经硅胶柱色谱纯化、薄层色谱检视，合并流分后得
        的干燥根及根茎。                                           到化合物8（9.8 mg）。
        2 实验方法                                             2.3  波谱条件
                                                                     1
        2.1  部位提取                                              氢谱（H-NMR）提供质子类型及其化学环境、氢分
            根据优选出的适宜代号为C-1的真菌生长的最佳马                        布（各 官 能 团 上 H 的 相 对 数 目）、核 间 关 系 。 碳 谱
                                                            13
        铃薯葡萄糖琼脂培养基配方：取葡萄糖2％，磷酸二氢钾                          （ C-NMR）提供化合物中碳的个数和每个碳的化学位
        0.3％，硫酸镁 0.3％，蛋白胨 1％，酵母浸粉 1％，维生素                   移，给出有特征的端基碳原子，判断伯仲叔季碳。通过
        B1 0.01％，以上物质置于大烧杯中，加入适量的热水搅                       1 H-NMR（C5D5N，500 MHz）谱中给出特征信号（甲基质
        拌使溶化，待液体培养基冷却后，分装于250 mL锥形瓶                        子信号、连氧碳上氢的质子信号、烯氢质子信号以及糖
                                                                             13
        中，每瓶 100 mL，包扎后置于压力蒸汽灭菌器中，于                        的端基质子信号）和 C-NMR（C5D5N，150 MHz）谱中给
        121 ℃灭菌 30 min。取出，冷却后，置于无菌室中，紫外                    出特征信号（甲基碳信号、烯碳信号、葡萄糖端基碳信
        灭菌 40 min，日光灯照射 10 min 后，在无菌操作台中接                  号）初步确定化合物类型及结构，然后检索相关参考文
        入保存好的斜面菌种。将接有斜面菌种的液体培养基                            献，与参考文献中化合物数据基本一致时，即确定二者
        放入恒温振荡（150 r/min）培养箱中，在（26±1）℃的条                   为同一物质。
        件下培养，待种子液变为浑浊黏稠呈淡黄色时，取出，                           3 结构鉴定
        备用。                                                    化合物1～8的结构见图1。
            将人参粉碎，过八号筛，得到人参粗粉6.0 kg，加1.5                       化 合 物 1：白 色 无 定 形 粉 末（甲 醇），分 子 式 为
        倍水（倍量按 L/kg 计，以下同），分装于 500 mL 锥形瓶                  C38H62O9，熔点110～112 ℃，三萜皂苷类特征性反应均显
        中，于灭菌锅121 ℃灭菌1 h，室温冷却，加入经培养得到                      阳性。 H-NMR（C5D5N，500 MHz）δ：0.95（3H，s，H-30），
                                                                 1
        的代号为 C-1 的真菌种子液各 50 mL，于（26±1）℃、相                  1.06（3H，s，H-19），1.28（3H，s，H-18），1.54（3H，s，
        对湿度为 65％的培养箱中发酵 12 d，得到人参真菌菌                       H-29），1.58（3H，s，H-27），1.64（3H，s，H-26），2.02（3H，s，
        质，干燥。称取干燥人参真菌菌质 4.0 kg，粉碎，以 7 倍                    H-28），2.06（3H，s，6′-COCH3 ），3.51（1H，d，J＝ 10.5 Hz，
        量 70％乙醇溶剂提取 3 次（2 h/次），提取液滤过、合并、                   H-3）、3.92（1H，m，H-12），4.41（1H，m，H-6），4.91（1H，s，
        减压浓缩得到稠膏。将稠膏加入适量的水混悬，采用等                           H-21a）、5.14（1H，s，H-21b），5.28（1H，brt，J＝7.0 Hz，
        体积石油醚、乙酸乙酯及水饱和正丁醇溶液萃取各3次，                          H-24），5.02（1H，d，J＝8.0 Hz，H-1′）。 C-NMR（C5D5N，
                                                                                            13

        中国药房    2019年第30卷第2期                                               China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2  ·203  ·
   59   60   61   62   63   64   65   66   67   68   69