Page 59 - 2019年1月第30卷第2期

the difference of each index has statistical significance （P＜0.05 or P＜0.01）. CONCLUSIONS： Kangangxin liquid can
significantly repair cartilage defect of KOA cartilage defect model rabbits，the mechanism of which may be associated with
increasing the expression of SOD and mediating NO-inhibited chondrocyte apoptosis.
KEYWORDS Kangfuxin liquid；Rabbits；Cartilage defect；Reparing effect；Mechanism；NO；SOD；LOP；PYD

膝骨性关节炎（Knee osteoarthritis，KOA）是以关节 号：0002777]。动物在实验前适应性饲养 1 周，自由饮
软骨退变、骨质硬化及增生为病理特征的一种骨关节疾 食，环境温度（22±1）℃，每天12 h光照（8：00－20：00）。
病，具有高发病率、高复发率、高耐药性的特点；而覆盖 2 方法
在膝关节表面的膝关节软骨由于不含血管、神经或淋巴 2.1 分组、造模、给药与取样
组织，一旦出现损伤，则其自愈能力相当有限 。关节腔 取兔72只，随机分为模型对照组和康复新低、中、高
[1]
内注射药物是治疗 KOA 的主要方法之一，经实践验证 剂量组，每组 18 只。依据改良型关节刻痕法 [1，5] 建立膝
其疗效显著 [2-3] 。康复新液是以蜚蠊（俗称蟑螂）为主药 关节软骨缺损模型：3％戊巴比妥钠溶液经兔耳缘静脉
的一种生物制剂 ，《神农本草经》记载：蜚蠊“味、咸、寒， 麻醉（1 mL/kg），剃毛，常规消毒右下肢；沿髌骨内缘切
[4]
生川泽，治血癖症坚、寒热，破积聚，喉咽痹，内寒无 口，分离皮下组织，切断内侧关节囊，暴露关节腔；膝关
子”。现代药理研究表明，康复新液在炎症介质诱导下 节过伸，向外侧脱位髌骨，用2.0 mm克氏针手钻在膝股
能迅速产生或促使多种体液免疫因子参与抑菌，能促进 骨内侧髁中心钻孔（直径：3 mm），造成兔股骨内侧髁软骨
非特异免疫细胞分泌创伤修复因子，促进伤口愈合，还 缺损；然后立即在各组兔软骨缺损处进行关节腔注射给
[1]
能加快骨修复启动进程 ，但其作用机制尚未完全明 药，0.2 mL/kg，每 3 天 1 次持续给药。按人用剂量换算
确。现代医学认为，骨关节炎是多种因素参与介导的慢 后，对康复新低、中、高剂量组兔分别给予体积分数分别
[1]
性炎症反应，其致病因素主要与软骨细胞凋亡有关 。 为 20％、40％、80％的康复新液（用含 10％胎牛血清的
DMEM 培养液进行稀释，在超净台上用 0.22 μm一次性
基于此，本研究通过建立兔KOA软骨缺损模型，考察在
滤器过滤除菌，－20 ℃保存，备用），模型对照组兔给予
关节腔注射康复新液对兔关节软骨病理性改变的影响；
等体积生理盐水。
同时，通过检测兔关节液中的一氧化氮（NO）、超氧化物
各组兔在给药完毕即刻和给药后第 4、8、12 周时取
歧化酶（SOD）、过氧化脂质（LPO）与尿液中吡啶酚
尿液待测；同时，沿兔髌骨内缘作纵行切口，逐层分离至关
（PYD）水平的变化，旨在探讨康复新液防治 KOA 的作
节囊，反复屈伸关节以便将关节液挤压至髌上囊内侧，在
用机制是否与软骨细胞凋亡有关。
关节液最集中处轻轻划开关节囊，注入生理盐水1.5 mL，
1 材料
反复抽吸后将关节液尽量抽出，在4 ℃下以15 000 r/min
1.1 仪器
离心15 min，取上清液，保存于－80 ℃，待测。各组兔在
BM-Ⅶ型生物组织包埋机（湖北省宏业医用仪器有
上述时间点分别处死2只，剥离软骨缺损周围组织，在距
限公司）；KH-Q350型切片机（河南海阔医疗器械有限公
缺损处上、下、左、右端至少 1 mm 左右，用钢锯截取标
司）；64R 型低温高速离心机（美国 Beckman 公司）；
本，进行骨修复组织的形态学评分和病理学观察。取材
ELx808 型酶联免疫检测仪（美国 Bioteck 公司）；CKX53
前动物均禁食不禁水10 h。
型倒置显微镜（日本Olympus公司）；立式320L型超低温
2.2 各组兔膝关节软骨缺损区修复情况观察
冰箱（杭州艾普仪器设备有限公司）。
肉眼观察各组兔在软骨缺损模型制备完成后的一
1.2 药品与试剂 般情况，并分别于给药后第4、8、12周时观察兔软骨缺损
康复新液（四川好医生攀西药业有限责任公司，批 伤口修复情况。
准文号：国药准字 Z51021834，规格：10 mL/瓶）；Masson 2.3 各组兔膝关节软骨缺损处修复组织的形态学评分
三色染色试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，批号： 分别于给药完毕即刻及给药后第4、8、12周时，在显
G1340）；兔 NO、SOD、LPO、PYD 酶联免疫检测试剂盒 微镜下对兔软骨缺损处修复组织的软骨厚度、基质异染
（上海恪敏生物科技有限公司，批号均为H8021）；pH 7.4 性、表面规则性以及填充软骨与周围软骨的结合情况进
磷酸盐缓冲液[PBS，赛默飞世尔科技（中国）有限公司]； 行观察，并结合 Wakitani 评分标准 [1，6] 进行组织学评分
其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为双蒸水。 （总分0～10分，得分越高，则表明软骨缺损修复越差）：
1.3 动物 （1）软骨厚度＞2/3 计 0 分，1/3～2/3 计 1 分，＜1/3 计 2
健康成年新西兰兔72只，雄性，清洁级，5～6月龄， 分。（2）对软骨组织进行苏木精-伊红（HE）染色后评判基
体质量1.5～2.5 kg，购自四川省医学科学院实验动物研 质异染性：正常计 0 分，轻度减少计 1 分，明显减少计 2
究所[动物生产许可证号：SCXK（湘）2013-0004，合格证 分，无异染性着色计3分。（3）表面规则性：光滑＞3/4计0

·198 · China Pharmacy 2019 Vol. 30 No. 2 中国药房 2019年第30卷第2期