Page 31 - 《中国药房》2026年9期

1.11 g/mL（以生药量计）的药液；温阳中药方制备过程 方组大鼠于每天上午按10 mL/kg灌胃温阳中药，每天1
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为：称取处方量药材以蒸馏水常规煎煮，再浓缩成质量 次，连续12 d，以建立血热模型 ；在造模的同时，地屈孕
浓度为1.00 g/mL（以生药量计）的药液。 酮组和清热安胎方组大鼠于每天下午灌胃相应药液，正
地屈孕酮片（批号363775，规格10 mg/片）购自荷兰 常组和模型组大鼠灌胃等体积蒸馏水；除正常组外，其
Abbott Healthcare 公司；米非司酮片（批号 43210213，25 余各组大鼠在妊娠第13天一次性灌胃米非司酮（5 mg/kg）
mg/片）购自华润紫竹药业有限公司；三碘甲状腺原氨酸 建立先兆流产模型。各组随机取3只大鼠，测定血清中
（3，5，3′-triiodothyronine，T3）、甲 状 腺 素（thyroid hor‐ T3、T4、TSH 水平，并解剖观察胚胎情况，当血清中 T3、
mone，T4）、促甲状腺激素（thyroid stimulating hormone， T4、TSH 水平及流产率较正常组大鼠明显升高，则表明
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TSH）测 定 试 剂 盒（批 号 分 别 为 H222-1-2、H223-1-2、 血热型先兆流产模型构建成功 。
H087-1-2）均购自南京建成生物工程研究所有限公司； 2.2 取材
血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor， 妊娠第 14 天，称量各组大鼠体重，再腹腔注射氨基
VEGF）测定试剂盒（批号ml-063019）购自上海酶联生物 甲酸乙酯（1 g/kg）进行麻醉；经腹主动脉采血，以 3 000
科技有限公司；一氧化氮（nitric oxide，NO）测定试剂盒 r/min离心10 min收集血清，于－80 ℃条件下保存备用。
（批号 S0021）购自上海碧云天生物技术有限公司；兔抗 取血完成后，解剖大鼠取出妊娠子宫，剥离周围附属组
大鼠磷酸化 JAK2（p-JAK2）、磷酸化 STAT3（p-STAT3）、 织，用生理盐水冲洗干净，依次完成称重、拍照。将妊娠
细胞因子信号转导抑制因子 3（suppressor of cytokine 子宫均分为两份，一份用4%多聚甲醛固定，另一份经液
signaling 3，SOCS3）、β-肌动蛋白（β-actin）抗体和辣根过 氮速冻后置于－80 ℃条件下保存备用。
氧化物酶标记的山羊抗兔二抗（批号分别为GB114585- 2.3 大鼠流产率及子宫系数计算
100、GB1150001-100、GB113792-100、GB15003-100、 观察拍摄的图片统计各组大鼠妊娠子宫内流产胚
G1213-100UL）购自武汉赛维尔生物科技有限公司；兔 胎数和正常胚胎数（正常胚胎呈淡红色，且母鼠子宫腔
抗大鼠血管内皮细胞生长因子受体 2（vascular endothe‐ 内未见瘀血；流产胚胎呈黑褐色，且部分胚胎发生缺
lial growth factor receptor 2，VEGFR2）、AKT、磷 酸 化 失），并计算流产率[流产率＝流产胚胎数/（流产胚胎数+
AKT（p-AKT）、PI3K、一氧化氮合酶（endothelial nitric 正常胚胎数）×100%]和子宫系数（子宫系数＝子宫质
oxide synthase，eNOS）抗体（批号分别为 bs-10412R、bs- 量/大鼠体重）。
5570R、bs-0115R、bs-0876R、bs-20608R）购自北京博奥 2.4 大鼠妊娠子宫病理学形态观察
森生物技术有限公司。 取“2.2”项下于4%多聚甲醛固定的妊娠子宫组织，
1.3 实验动物 经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋后，制作 4 μm
本研究所用动物有 10 周龄健康未产雌性 SD 大鼠 厚度的病理切片。取部分切片（剩余切片用于免疫组化
（60只，体重200～280 g）和10周龄健康雄性SD大鼠（30 法检测）依次经过二甲苯脱蜡、苏木素-伊红（HE）染色、
只，体重250～280 g），均购自郑州市惠济区华兴实验动 梯度乙醇脱水后，再以中性树脂封片。采用光学显微镜
物养殖场，动物生产许可证号为 SCXK（豫）2022-0002。 观察妊娠子宫的病理学形态，并在 400 倍镜下采集相关
所有大鼠均饲养于河南中医药大学医学机能实验室，饲 图像。
养环境温度为 20～22 ℃、相对湿度为 55%～60%、正常 2.5 大鼠血清中T3、T4、TSH水平检测
光照。本实验由河南中医药大学实验动物伦理委员会 取“2.2”项下血清样品适量，按照试剂盒说明书方法
批准（编号为DWLL202401011）。 操作，采用酶标仪于510 nm波长下测定吸光度，并依据
2 方法 标准曲线计算大鼠血清中T3、T4、TSH水平。
2.1 分组、造模与给药 2.6 大鼠妊娠子宫中VEGF、NO水平检测
将 60 只雌性大鼠与 30 只雄性大鼠合笼配种，于次 取“2.2”项下冻存的妊娠子宫 100 mg，向样本中加
日清晨观察雌性大鼠阴道栓形成情况，将出现阴道栓当 入 0.9 mL 冰生理盐水，制成组织匀浆液；以 3 000 r/min
天记为妊娠第1天，最后确定妊娠成功大鼠共52只。选 离心10 min后，收集上清液。严格遵循试剂盒说明书方
取52只雌性妊娠大鼠，随机分为正常组、模型组、地屈孕 法操作，再利用酶标仪于450 nm波长下测定吸光度，并
酮组（0.002 g/kg，根据临床等效剂量换算而成）和清热安 根据标准曲线计算大鼠妊娠子宫中VEGF、NO水平。
胎方组（44.1 g/kg，根据本课题组前期研究结果设置，为 2.7 大鼠妊娠子宫中 JAK2/STAT3、PI3K/AKT 通路相
临床等效剂量的2倍），每组各13只。 关mRNA表达检测
自妊娠第1天开始，模型组、地屈孕酮组和清热安胎 取“2.2”项下冻存的妊娠子宫 100 mg，加入 1 mL

中国药房 2026年第37卷第9期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 9 · 1129 ·