Page 55 - 《中国药房》2026年6期

点（硬尖神香草中质量浓度阻滞于 S 期，高质量浓度阻 2.3.2 溶液的制备
滞于 G0/G1期），可能与其含有多种活性成分、作用机制 （1）混合对照品溶液：分别取新绿原酸、绿原酸、咖
随剂量变化有关；丹酚酸B可将细胞阻滞于S期，这一作 啡酸、阿魏酸、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷酸、迷迭香
用可能与其特有靶点有关。 酸、金合欢素、丹酚酸B、木犀草素、迷迭香酸甲酯、迷迭
表2 各组不同分裂阶段细胞比例比较（x±s，n＝3，%%） 香酸乙酯、β-谷甾醇、芫花素、山柰素、三裂鼠尾草素对
组别 G 0/G 1期 S期 G 2/M期 照品适量，加甲醇溶解并稀释，制成上述成分质量浓度
正常组 84.5±1.0 3.9±0.3 11.6±0.6 分别为 0.60、1.24、0.74、1.08、0.84、1.49、0.15、1.27、0.60、
模型组 54.2±1.6 a 14.4±1.3 a 31.8±2.1 a
硬尖神香草低质量浓度组 64.4±2.2 b 8.0±0.5 b 19.5±0.6 b 0.52、0.33、0.38、0.49、0.56、0.42 mg/mL 的混合对照品溶
硬尖神香草中质量浓度组 65.1±2.3 b 24.9±1.3 b 2.4±0.0 b 液。（2）供试品溶液：取硬尖神香草药材，粉碎，精密称取
硬尖神香草高质量浓度组 77.3±1.9 b 4.5±0.3 b 15.2±1.6 b 粉末约 0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入 50% 乙醇溶
新绿原酸组 70.4±2.1 b 11.9±0.5 b 13.2±1.1 b 液 25 mL，称重，超声处理 60 min，冷却至室温后再次称
金合欢素组 80.4±1.3 b 9.4±0.7 b 4.6±0.2 b
丹酚酸B组 66.4±2.5 b 21.1±0.7 b 9.0±1.0 b 重，用50%乙醇补足失重，摇匀，即得供试品溶液。
槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷酸组 84.4±2.3 b 11.4±0.2 b 4.2±1.4 b 2.3.3 指纹图谱方法学考察
地塞米松组 80.0±2.0 b 11.3±0.5 b 5.0±0.1 b
取硬尖神香草药材（编号 S6）约 0.5 g，按“2.3.2（2）”
a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
项下方法制备供试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进
2.2.10 硬尖神香草对 HASMCs 中 ERK1/2 蛋白磷酸化
样分析，以迷迭香酸色谱峰（峰 17，保留时间适中、分离
水平的影响
度好、稳定性强且峰面积较大）为参照，计算各共有峰相
采 用 Western blot 法 检 测 。 取 对 数 生 长 期 的
对保留时间和相对峰面积的 RSD，以考察方法精密度
HASMCs，按“2.2.3”项下方法分组（仅设正常组、模型组
（重复测定6次）、重复性（平行6份）和稳定性（室温下放
和硬尖神香草低、高质量浓度组）、干预、培养后，收集细
置 0、2、4、8、12、24 h）。结果显示，各项实验中，各共有
胞，加入适量RIPA裂解液以提取总蛋白，采用BCA法测
峰相对保留时间、相对峰面积的RSD分别不高于1.17%
定蛋白浓度并进行变性处理。取变性蛋白适量，经电泳
和 2.98%（n＝6），表明方法精密度高、重复性好，且供试
分离后以湿转法转移至聚偏二氟乙烯膜上，封闭；加入
品溶液在室温下放置24 h内稳定性良好。
p-ERK1/2、ERK1/2、GAPDH一抗（稀释度分别为1︰2 000、
2.3.4 指纹图谱的建立与相似度分析
1︰2 000、1︰10 000），4 ℃下孵育过夜；加入相应二抗（稀
取14批硬尖神香草药材，按“2.3.2”项下方法制备供
释度为 1︰10 000），室温下孵育；经显影、成像后，采用
试品溶液，再按“2.3.1”项下色谱条件进样分析，记录色
Image J 软 件 分 析 蛋 白 条 带 灰 度 值 ，以 p-ERK1/2 与
谱图。将各样品色谱数据导入《中药色谱指纹图谱相似
ERK1/2 的相对灰度比值表示 ERK1/2 的磷酸化水平。
度评价性系统（2012 版）》，以 S6 图谱为参照，采用中位
结果显示，与对照组（11.21±0.60）比较，模型组细胞中
数法，设置时间窗宽度为 0.1 min，经多点校正与自动峰
ERK1/2 蛋白的磷酸化水平（110.21±2.67）显著升高
匹配生成对照图谱（R）和叠加指纹图谱。结果（图2）显
（P＜0.05）；与模型组比较，硬尖神香草低、高质量浓度
示，14批样品共有27个共有峰。通过与对照图谱比较，
组 细 胞 中 ERK1/2 蛋 白 的 磷 酸 化 水 平（49.55±2.55、
14 批样品的相似度依次为 0.836、0.888、0.932、0.936、
33.31±2.67）均 显 著 降 低（P＜0.05）。 各 组 细 胞 中 p-
ERK1/2、ERK1/2 蛋白表达的电泳图可扫描本文首页二 0.933、0.975、0.941、0.941、0.950、0.909、0.965、0.979、
维码查看“增强出版”板块中的附图4。 0.970、0.836。通过与混合对照品比对，共鉴定出15个色
2.3 硬尖神香草指纹图谱分析 谱峰，分别为：新绿原酸（峰2）、绿原酸（峰6）、咖啡酸（峰
本研究进一步聚焦硬尖神香草的化学物质基础，采 7）、阿魏酸（峰10）、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷酸（峰
用HPLC法建立多批硬尖神香草样品的指纹图谱，通过 13）、迷迭香酸（峰 17）、金合欢素（峰 18）、丹酚酸 B（峰
相似度分析评价批次间的一致性，并结合化学计量学分 19）、木犀草素（峰20）、迷迭香酸甲酯（峰21）、迷迭香酸
析挖掘差异性标志物。 乙酯（峰 22）、β-谷甾醇（峰 23）、芫花素（峰 24）、山柰素
2.3.1 色谱条件 （峰25）、三裂鼠尾草素（峰27）。
以 Agilent C18 （250 mm×4.6 mm，5 μm）为色谱柱， 2.3.5 指纹图谱的聚类分析
以乙腈（A）-0.1% 甲酸溶液（B）为流动相进行梯度洗脱 以14批硬尖神香草指纹图谱中27个共有峰峰面积
（0～55 min，5%A→11%A；55～85 min，11%A→23%A； 为变量，采用OriginPro 2025b软件进行聚类分析。结果
85～95 min，23%A→25%A；95～105 min，25%A→ 显示，当平方欧氏距离为 5 时，14 批药材可被分为三大
30%A；105～115 min，30%A→80%A；115～120 min， 类：S1～S7为一类，S8～S13为一类，S14为一类；27个共
80%A；120～130 min，30%A→5%A）；流速为1.0 mL/min； 有峰可被分为 3 组：峰 17 为一组，峰 6～8、27 为一组，其
柱温为30 ℃；检测波长为280 nm；进样量为20 μL。 余峰为一组；14 批硬尖神香草和 27 个共有峰的分类之

中国药房 2026年第37卷第6期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 6 · 737 ·