Page 53 - 《中国药房》2026年6期

2.1.2 蛋白质-蛋白质相互作用网络构建 缩至无醇味，经聚酰胺柱分别以水、20%乙醇、40%乙醇
将硬尖神香草抗哮喘的 135 个潜在靶点导入 String 洗脱；收集 40% 乙醇洗脱部位，浓缩、干燥，即得硬尖神
11.0 数据库，物种设为“homo sapiens”，置信度设为“＞ 香草提取物。
0.7”，构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein inter‐ 2.2.2 细胞培养
action，PPI）网络。利用 Cytoscape 3.8.0 软件对“硬尖神
取 HASMCs，接种于含 10% 胎牛血清的 DMEM 完
香草-成分-靶点”进行可视化处理，并对PPI网络进行拓 全培养基中，于37 ℃、5%CO2条件下培养。
[11]
扑学分析，以度值大于3倍中位数为标准 ，筛选出硬尖
2.2.3 造模、分组与给药
神香草抗哮喘的关键靶点。结果显示，所得 PPI 网络包 3
括 125 个节点、983 条边，按度值从高到低排序，前 13 位 取对数生长期的 HASMCs，以 5×10 个/孔接种于
96孔板中，培养24 h；将培养基更换为无血清培养基，饥
的 关 键 靶 点 分 别 为 IL-6、表 皮 生 长 因 子（epidermal
growth factor，EGF）、Jun 原癌基因（Jun proto-oncogene， 饿24 h；加入PDGF-BB使其终浓度为20 ng/mL，培养24 h
[13]
JUN）、TNF、IL-10、丝 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶（mitogen- 以构建气道重塑细胞模型 。将细胞分为正常组（不含
activated protein kinase，MAPK）、基质金属蛋白酶9（ma‐ 药物和PDGF-BB）、模型组、新绿原酸组（80 μmol/L）、金
trix metallopeptidase-9，MMP-9）、IL-1β、蛋白激酶B1（又 合欢素组（80 μmol/L）、丹酚酸 B 组（40 μmol/L）、槲皮
称“AKT1”）、Fos 原癌基因（Fos proto-oncogene，FOS）、 素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷酸组（80 μmol/L）、地塞米松
血管内皮生长因子 A（vascular endothelial growth factor 组（阳性对照，20 μmol/L），以及硬尖神香草低、中、高质
A，VEGFA）、CXC 趋化因子配体 8（CXC chemokine lig- 量浓度组（25、50、100 μg/mL），每组设置 3 个复孔。模
and 8，CXCL8）、肿 瘤 蛋 白 p53（tumor protein p53， 型组和各药物组按前述方法造模后，各药物组（剂量依
TP53）。
据前期预实验结果设置）再用相应药液继续培养24 h。
2.1.3 潜在靶点富集分析
2.2.4 硬尖神香草及活性成分对HASMCs增殖的影响
采用R 4.2.3语言对硬尖神香草抗哮喘的13个关键
取对数生长期的HASMCs，按“2.2.3”项下方法分组
靶点进行基因本体（gene ontology，GO）功能富集以及京
都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes （同时设置不含细胞、不含药物和PDGF-BB的空白组）、
干预、培养后，弃去各孔上清液，加入10%甲基三氯硅烷
and Genomes，KEGG）通路富集分析。结果显示，共富集
到1 677个GO功能条目（P＜0.05），其中生物过程1 606 溶液 100 μL，培养 2～4 h，使用酶标仪于 490 nm 波长下
个、细胞组分 9 个、分子功能 62 个。共富集到 110 条 测定其光密度（OD）值，按下式计算细胞存活率：细胞存
KEGG信号通路（P＜0.05）；以P值排序，前20位信号通 活率（%）＝（实验组OD值－空白组OD值）/（正常组OD
路中与哮喘发生发展密切相关的有MAPK、晚期糖基化 值－空白组 OD 值）×100%。采用 SPSS 29.0 软件对数
终末产物（advanced glycation end product，AGE）-晚期糖 据进行统计分析；数据以 x±s 表示，多组间比较采用单
基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end 因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；检验水
products，RAGE）、IL-17、TNF 信号通路等。GO 功能富 准α＝0.05（统计方法下同）。
集和 KEGG 通路富集结果可扫描本文首页二维码查看
结果（表1）显示，与正常组比较，模型组细胞的存活
“增强出版”板块中的附图1。 率显著升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组细胞的
2.1.4 分子对接
存活率均显著降低（P＜0.05），且硬尖神香草低、中、高
选取度值排前4位的关键活性成分与PPI网络分析
质量浓度组的变化呈浓度依赖趋势。
排前5位的核心靶点进行分子对接。结果显示，木犀草
表1 各组细胞存活率、炎症因子、细胞迁移率、Trans-
素、槲皮素、金合欢素、丹酚酸 B 与 IL-6、EGF、JUN、
well穿过率、ROS相对比值比较（x±s，n＝3）
TNF、IL-10蛋白的结合能均小于－5.0 kcal/mol（1 kcal＝
[12]
4.184 kJ），表明结合性能较好 。 组别 细胞存活率/ IL-6/ TNF-α/ 细胞迁移率/ Transwell ROS相对
% （pg/mL） （pg/mL） % 穿过率/% 比值
2.2 体外实验验证硬尖神香草及活性成分对HASMCs 正常组 66.61±1.28 11.21±0.60 8.94±0.33 34.35±1.19 100 1
的作用 模型组 100.14±2.67 110.21±2.67 70.76±4.38 39.00±3.81 232.60±13.15 4.11±0.58 a
a
a
a
a
a
b
b
b
b
本研究结合网络药理学分析结果和前期预实验，以 硬尖神香草低质量浓度组 45.54±2.32 49.55±2.55 29.69±2.04 b 7.13±0.44 63.27±1.50 1.54±0.16 b
硬尖神香草中质量浓度组 39.55±2.31 20.14±1.27 18.07±1.77 b 6.98±0.54 52.77±0.86 1.40±0.18 b
b
b
b
b
新绿原酸、金合欢素、丹酚酸B、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡
b
硬尖神香草高质量浓度组 20.73±1.79 14.33±1.79 12.27±1.45 b 2.55±0.41 43.50±2.40 1.21±0.11 b
b
b
b
萄糖苷酸和不同质量浓度的硬尖神香草提取物为干预 新绿原酸组 27.71±2.35 27.71±2.53 12.70±2.07 b 7.84±0.71 80.90±5.11 1.16±0.17 b
b
b
b
b
药物，以地塞米松为阳性对照，以 PDGF-BB 诱导的 金合欢素组 60.91±2.22 33.31±2.67 14.64±1.08 10.47±0.58 106.73±3.87 1.36±0.21 b
b
b
b
b
b
b
b
b
b
HASMCs为对象，进行体外实验验证。 丹酚酸B组 20.62±2.35 20.99±2.73 14.31±1.52 b 6.20±0.37 108.97±3.99 1.09±0.01 b
槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄 30.91±2.28 13.46±0.24 16.25±1.44 b 6.29±0.71 68.55±5.95 1.01±0.03 b
b
b
b
b
2.2.1 硬尖神香草提取物的制备方法
糖苷酸组
取硬尖神香草药材（编号S8），切段（2～3 cm），加10 地塞米松组 67.76±2.31 20.31±3.18 42.16±1.40 b 3.59±0.61 178.08±3.96 1.80±0.22 b
b
b
b
b
倍量 50% 乙醇回流提取 2 次，每次 1.5 h；收集提取液浓 a：与正常组比较，P＜0.05；b：与模型组比较，P＜0.05。
中国药房 2026年第37卷第6期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 6 · 735 ·