Page 46 - 《中国药房》2026年4期
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（冀）2025-001]。实验期间，所有大鼠均饲养于标准动物                       2.4 炎症因子、代谢调节蛋白、胰岛素敏感性相关因子、
          房（每 12 h 光照/黑暗循环，温度 23～25 ℃，相对湿度                    氧化应激指标检测
          65%～70%）内，自由饮水和摄食。本动物实验方案已通                             取“2.2”项下各组大鼠血清和冻存的肝组织适量，使
          过河北子桢生物科技有限公司动物伦理委员会审核批                             用全自动酶标仪检测其血清中炎症因子（CRP、IL-1β、
          准（伦理审查批号202501-027）。普通饲料、高脂高糖饲                      IL-6）、代谢调节蛋白（CTRP3）、胰岛素敏感性相关因子
          料（批号分别为 HF-1410、HF-1417）均由珠海恒屹生物                   （脂 联 素），以 及 肝 组 织 中 胰 岛 素 敏 感 性 相 关 因 子
          科技有限公司提供。                                          （GLUT4）、氧化应激指标（SOD、CAT、MDA）水平。严
          2 方法                                                格按照相应试剂盒说明书操作。
          2.1 造模与分组                                           2.5 肝组织病理学观察
              所有大鼠经标准饮食适应性喂养1周后进行空腹血                              取“2.2”项下各组大鼠已固定的肝组织适量，经脱
          糖（fasting blood glucose，FBG）检测，以排除糖尿病个              水、二甲苯透明、常规石蜡包埋后切片（厚约 4 µm）。切
                                [9]
          体。随后，参照相关文献 方法构建GDM 模型：选取50                         片经二甲苯脱蜡后行 HE 染色，再经脱水后用中性树胶
          只雌性大鼠，以高脂饮食喂养8周，并于每日上午9：00－                         封片，使用光学显微镜观察其肝组织的病理学改变。
          11：00进行阴道涂片检查以确定发情周期。将处于发情                          2.6 AMPK/SUV39H1/H3K9me3轴相关蛋白表达检测
          期的雌性大鼠与健康雄性大鼠按1∶2的比例进行交配；                               取“2.2”项下各组大鼠冻存的肝组织适量，加入
          于交配次日清晨 8：00－10：00 再次进行阴道涂片检查，                      RIPA 裂解液匀浆后静置 30 min，于 4 ℃下以 12 000
          若显微镜下观察到精子则视为交配成功，并记录为妊娠                            r/min离心10 min，分离上清液，采用BCA法检测总蛋白
          第1天；若连续3 d未检出精子，则视为交配失败，予以排                         浓度后进行变性处理。取变性蛋白适量，经电泳分离后
          除（共7只雌性大鼠因交配失败而被剔除）。于妊娠第5                           通过湿法转膜，随后用封闭液封闭 2 h；漂洗后，加入 p-
          天，取成功交配的43只孕鼠，腹腔注射35 mg/kg STZ，分                    AMPK、AMPK、SUV39H1、GAPDH、H3K9me3、组蛋白
          别在注射后的24、72 h时检测其FBG。若FBG水平持续                       H3一抗（稀释比例均为1∶1 000），于4 ℃下孵育过夜；漂
          在13.5 mmol/L以上，表明GDM大鼠模型构建成功（共3                     洗3次后，加入相应二抗（稀释比例为1∶10 000），于室温
          只雌性大鼠因血糖不达标而被剔除）。                                   下孵育40 min；漂洗3次后，进行显色、成像。使用Image
              将造模成功的40只GDM大鼠随机分为GDM模型                         J软件分析各蛋白的条带灰度值，以p-AMPK与p-AMPK、
          组（GDM 组）、黄芩苷低剂量组（BC-L 组）、黄芩苷高剂                      SUV39H1与内参蛋白（GAPDH）、H3K9me3与内参蛋白
          量组（BC-H 组）和黄芩苷高剂量+AMPK 抑制剂组（BC-                    （组蛋白H3）的灰度值比值分别表示AMPK蛋白的磷酸
          H+Compound C 组），每组 10 只。另选取 10 只妊娠第 5               化水平和SUV39H1、H3K9me3蛋白的相对表达量。
          天的雌性大鼠（以普通饲料喂养，并按上述方法交配）作                           2.7 统计学方法
          为对照组（Ctrl 组）。BC-L 组和 BC-H 组大鼠分别灌胃                       采用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析。所有计
                                [10]
          100、400 mg/kg 的黄芩苷 ，BC-H+Compound C 组大鼠             量数据满足正态分布且方差齐，以 x±s 表示，多组间比
          在灌胃 400 mg/kg 黄芩苷的基础上腹腔注射 0.2 mg/kg                 较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK-q检
                     [11]
          Compound C ；其余组大鼠灌胃并腹腔注射等体积生理                       验。检验水准α＝0.05。
          盐水。各组大鼠于每天上午9：00给药1次，连续2周。                          3 结果
          2.2 样品采集                                            3.1 黄芩苷对GDM大鼠血糖及胰岛功能的影响
              末次给药结束后，各组大鼠禁食 12 h，经戊巴比妥                           与 Ctrl 组相比，GDM 组大鼠的 FBG、FINS 水平和
          钠麻醉后采集腹主动脉血；血样以 3 000 r/min 离心 10                   HOMA-IR 均显著升高，ISI 显著降低（P＜0.05）。与
          min，收集上层血清，分装后于－80 ℃下保存，备用。采                        GDM 组相比，BC-L 组、BC-H 组大鼠的 FBG、FINS 水平
          血后将各组大鼠处死，分离其肝脏同一叶位的组织块，                            和 HOMA-IR 均显著降低，ISI 均显著升高（P＜0.05）；且
          用预冷生理盐水充分漂洗去除血渍，一部分置于 4% 多                          BC-H组的改善更显著（P＜0.05）。与BC-H组相比，BC-
          聚甲醛溶液中固定，另一部分于－80 ℃下保存，备用。                          H+Compound C 组大鼠的 FBG、FINS 水平和 HOMA-IR
          2.3 血糖、血脂、肝功能、胰岛功能指标检测                              均显著升高，ISI显著降低（P＜0.05）。结果见表1。
              取“2.2”项下各组大鼠血清适量，利用全自动生化分                       3.2 黄芩苷对GDM大鼠血脂及肝功能指标的影响
          析仪检测其FBG、血脂指标（TC、TG、LDL-C）、肝功能指                         与 Ctrl 组相比，GDM 组大鼠的 TC、TG、LDL-C、
          标（ALT、AST、ALP）水平；同时，采用全自动酶标仪检测                      ALT、AST、ALP水平均显著升高（P＜0.05）。与GDM组
          其空腹胰岛素（fasting insulin，FINS）水平，并计算胰岛                相比，BC-L 组、BC-H 组大鼠的上述指标水平均显著降
          素抵抗指数（homeostasis model assessment of insulin re‐   低（P＜0.05）；且 BC-H 组的改善更显著（P＜0.05）。与
          sistance，HOMA-IR）、胰岛素敏感指数（insulin sensitiv‐         BC-H 组相比，BC-H+Compound C 组大鼠的 TC、TG、
          ity  index，ISI）：HOMA-IR＝FBG×FINS/22.5；ISI＝1/        LDL-C、ALT、AST、ALP水平均显著升高（P＜0.05）。结
         （FBG×FINS）。                                          果见表2。


          · 452 ·    China Pharmacy  2026 Vol. 37  No. 4                               中国药房  2026年第37卷第4期
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