Page 53 - 《中国药房》2026年2期
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取 1 µL 上清液，按“2.3.2”项下条件进行液相色谱-串联 2.3.8 提取回收率试验
质谱联用（LC-MS/MS）分析。 精密称取 50 mg 大鼠空白皮肤，分别配制定量下限
2.3.5 专属性考察 和低、中、高质量浓度（2.535、25.35、101.4、507 ng/mL）的
取大鼠空白皮肤 50 mg、空白皮肤+TBF 对照品、经 TBF质控样品，每个浓度分别配制6份样品，按照“2.3.4”
皮给药2 h后的皮肤样品，按照“2.3.4”项下方法处理，再 项下方法处理，并进行LC-MS/MS分析后得到相应的峰
按照“2.3.2”项下色谱、质谱条件进样测定。结果显示， 面积（A1 ）；相同分析条件下测定相应的定量下限和低、
在皮肤样品中，TBF保留时间为3.42 min，TBF测定不受 中、高质量浓度（2.535、25.35、101.4、507 ng/mL）的 TBF
皮肤内源性物质的干扰，其峰形良好，说明该方法专属 对照品溶液，各 6 次，得到对应的峰面积（A0 ），计算提取
性强。结果见图2。 回收率（%）＝A1/A0×100%。结果显示，TBF的提取回收
率为 94.65%～100.61%（n＝6），表明结果符合生物样品
10 000 292.6/141.0 Da 8×10 5 5 292.6/141.0 Da 3.43
离子信号强度 6 000 离子信号强度 6×10 5 5 分析要求。
8 000
4×10
2.3.9 稳定性试验
4 000
2×10
2 000
0 0 精密称取 50 mg 大鼠空白皮肤，分别配制定量下限
0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
保留时间/min 保留时间/min 和低、中、高质量浓度（2.535、25.35、101.4、507 ng/mL）的
A.空白皮肤 B.空白皮肤+TBF对照品
8×10 5 5 292.6/141.0 Da 3.42 TBF 质控样品，每个浓度 3 份，按照“2.3.4”项下方法处
离子信号强度 4×10 5 5 理，在 4 ℃下放置 24 h 后按照“2.3.2”项下色谱、质谱条
6×10
件进样分析，按当天标准曲线计算质控样品的浓度。结
2×10
0 果显示，定量下限和低、中、高质量浓度下 TBF 浓度的
1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5
保留时间/min RSD分别为1.32%、4.42%、5.98%、1.19%（n＝3），表明结
C.经皮给药2 h后的皮肤样品
图2 多反应监测模式下的提取离子流色谱图 果符合生物样品分析要求。
2.4 TBF-HQD-SAN NPs的体外透皮实验
2.3.6 线性关系考察
2.4.1 体外透皮吸收实验
精密称取 50 mg 大鼠空白皮肤，分别加入质量浓度
取 SD 大鼠 6 只，给予戊巴比妥钠麻醉后，使用脱毛
为1.014 µg/mL 的TBF对照品溶液1、2、5、10、20、40、80、
膏脱去腹部毛，断颈处死后立即剪下腹部皮肤，除去皮
160 µL和质量浓度为101.4 µg/mL的TBF对照品溶液2、
肤组织、血管及脂肪，用生理盐水反复冲洗。将皮肤固
4、8 µL，再加入甲醇使终体积为 400 µL，按照“2.3.4”项
定在扩散池上，角质层朝上，用生理盐水作为接收液，转
下方法处理，皮肤中TBF的最终质量浓度依次为2.535、 2
速为 350 r/min，扩散面积为 1.77 cm ，接收池总体积为
5.07、12.675、25.35、50.7、101.4、202.8、405.6、507、1 014、 15 mL，32 ℃水浴循环。取 50 mg/mL TBF-HQD-SAN
2 028 ng/mL，按照“2.3.2”项下色谱、质谱条件进样测定， NPs、TBF与HQD-SAN的物理混合物（简称“TBF-HQD-
以 TBF 峰面积（Y）为纵坐标，皮肤样品中的 TBF 质量浓 SAN PM”）、TBF 原料药（根据 TBF 的 DL 换算）1 mL 加
度（X）为横坐标（因线性范围太大，分别在 2.535～101.4 入供给室中（以此进行相应分组），平行 6 份。在 0.5、1、
ng/mL 和＞101.4～2 028 ng/mL 范围）进行线性回归。 2、4、6、8、12、24 h 时分别从接收池内取样 1 mL，同时补
结果显示，TBF的标准曲线分别为Y＝20 476X+76 894（R 2 充等温等量的接收液。样品以 13 000 r/min 离心 10
2
6
为 0.998 7）和 Y＝16 896X+2×10（R 为 0.996 4），表明 min，取上清液，按照“2.3.2”项下色谱、质谱条件进样分
n - 1
TBF 在 2.535～101.4 ng/mL 和＞101.4～2 028 ng/mL 范 析，计算累积透过量(Q )=(V c + ∑ V c )/A，其中，Qn
n
r n
i
s
i = 1
围内线性关系良好。 为第n次取样时的累积透过量（ng/cm），V r代表接收液的
2
2.3.7 精密度与准确度考察 体积（15 mL），cn为每个取样点质量浓度（ng/mL），Vs为
精密称取 50 mg 大鼠空白皮肤，分别配制定量下限 取样体积（1 mL），ci为第 i 次取样测得的接收液中 TBF
和低、中、高质量浓度（2.535、25.35、101.4、507 ng/mL）的 的质量浓度（ng/mL），A为扩散渗透面积（cm）。以时间
2
TBF质控样品，每个浓度6份样品于同一天内制备，按照 为横坐标（X）、Qn为纵坐标（Y）进行线性回归并绘制体外
“2.3.4”项下方法处理，并进行 LC-MS/MS 测定。连续 3 透 皮 吸 收 曲 线 。 结 果 显 示 ，所 得 回 归 方 程 分 别 为
d同法操作，每天按随行标准曲线计算质控样品的浓度， YTBF-HQD-SAN NPs ＝8.980 8X+1.819 8（R ＝0.987 6），Y TBF-HQD-SAN PM＝
2
考察日内和日间精密度的RSD，以实际测定浓度和真实 4.393 8X+13.235 0（R ＝0.987 3），YTBF原料药 ＝2.689 5X+
2
浓度的比值考察准确度。结果显示，在皮肤样品中，日 9.433 2（R ＝0.989 2），其斜率即为稳态透皮速率——Jss
2
内RSD均不大于2.65%，日间RSD均不大于3.47%，准确 [µg/（cm·h）]。 由 方 程 可 知 ，TBF-HQD-SAN NPs 组 、
2
度为 93.56%～102.34%（n＝6），表明结果符合生物样品 TBF-HQD-SAN PM 组、TBF 原料药组 TBF 的 Jss分别为
2
分析的方法学要求。 8.980 8、4.393 8、2.689 5 µg/（cm·h）。TBF-HQD-SAN
中国药房 2026年第37卷第2期 China Pharmacy 2026 Vol. 37 No. 2 · 183 ·
