Page 84 - 《中国药房》2026年1期

分别为 4、32、48 μg/mL，吡嗪酰胺低、中、高质量浓度为 70 ×10 5 苯海拉明
10
5、40、60 μg/mL）。 60
50
2.2 血浆样品处理 40 利福平
精密移取血浆样品50 μL至1.5 mL离心管中，加入 强度 30 强度 吡嗪酰胺
20 2
内标工作液50 μL，涡旋混合10 min；再加入甲醇150 μL 10 异烟肼
0 0
进行蛋白沉淀，涡旋振荡 10 min 后，于 4 ℃条件下以 0 1 2 3 4 5 0 1 2 3 4 5
时间/min 时间/min
14 000 r/min 离心15 min；取适量上清液进行分析。 A.空白血浆样品 B.标准血浆样品
×10 5
2.3 色谱与质谱条件
苯海拉明
（1）色 谱 条 件 ：色 谱 柱 为 Chemalink CM-C18T（50 5
mm×4.6 mm，3 μm），以 0.1% 甲酸（A）-甲醇（B）溶液为
强度 1 吡嗪酰胺
流动相进行梯度洗脱（0～2 min，30%B→95%B；2.1～4
利福平
min，95%B；4.1～5 min，95%B→30%B），流 速 为 0.4 异烟肼
0
0 1 2 3 4 5
mL/min，进样体积为2 μL。（2）质谱条件：采用电喷雾离 时间/min
C.患者血浆样品
子源在正离子模式下进行多反应监测，气帘气压力为
图1 3种抗结核药物和内标的色谱图
30 psi（1 psi＝6.895 kPa），碰撞气压力为 7 psi，电喷雾电
压为 5.5 kV，离子源加热温度为 500 ℃，雾化气压力为 2.4.2 线性关系考察
30 psi，辅助加热气压力为 20 psi，碰撞室出口电压为 10 取“2.1.4”项下标准曲线样品适量，按“2.2”项下方法
处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，记录
V。3种抗结核药物和内标的质谱参数见表1。
色谱图。以药物质量浓度为横坐标（x，μg/mL），药物与
表1 3种抗结核药物和内标的质谱参数及保留时间
药物/内标 母离子m/z 子离子m/z 去簇电压/V 入口电压/V 碰撞能/eV 保留时间/min 内标的峰面积比值为纵坐标（y）进行线性回归，结果
异烟肼 138.0 121.0 46 5 25 1.43 见表2。
利福平 823.3 791.3 78 5 22 3.61 表2 3种抗结核药物的线性关系考察结果
吡嗪酰胺 124.1 79.0 25 10 22 1.85
苯海拉明 256.0 167.0 17 7 17 3.03 药物 线性方程 r 线性范围/（μg/mL）
异烟肼 y＝0.020 2x+0.003 04 0.999 2 0.5～16
2.4 方法学考察 利福平 y＝0.022 4x+0.001 03 0.999 4 2～64

参考2020年版《中国药典》（四部）“生物样品定量分 吡嗪酰胺 y＝0.013 4x+0.019 20 0.998 7 2.5～80
[6]
析方法验证指导原则”进行考察 。 2.4.3 定量下限考察
以各药物线性范围的最低点为定量下限，取“2.1.4”
2.4.1 专属性考察
项下相应标准曲线样品适量（共5份），按“2.2”项下方法
取 6 份来自不同健康志愿者的血浆样品适量，混匀
处理后，再按“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，考察
后取50 μL，除不加内标外，其余按“2.2”项下方法处理，
各药物定量下限的准确度和日内精密度。结果显示，异
制成空白血浆样品。取“2.1.2”项下某一混合标准曲线
烟 肼 、利 福 平 和 吡 嗪 酰 胺 在 定 量 下 限 的 准 确 度 为
工作溶液（异烟肼、利福平、吡嗪酰胺质量浓度分别为
97.50%～113.67%（n＝5），日内精密度的 RSD 均小于
40、160、200 μg/mL）10 μL，加入上述混匀后的空白血浆
8.50%（n＝5），符合相关要求。
样品90 μL，再按“2.2”项下方法制成标准血浆样品。取
2.4.4 准确度和精密度考察
患者服用3种抗结核药物后的血浆样品适量，按“2.2”项
取“2.1.4”项下低、中、高质量浓度的质控样品适量，
下方法制成患者血浆样品。取上述空白血浆样品、标准
每个质量浓度平行 5 份，按“2.2”项下方法处理后，再按
血浆样品和患者血浆样品适量，按“2.3”项下色谱与质谱
“2.3”项下色谱与质谱条件进样分析，以考察准确度和精
条件进样分析，记录色谱图。结果（图1）显示，血浆中内 密度（同批样品重复测定5次考察日内精密度，连续测定
源性物质不干扰测定，各目标化合物的峰形对称且分离 3 d 考察日间精密度）。结果显示，异烟肼、利福平和吡

良好，异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、苯海拉明的保留时间 嗪酰胺在低、中、高质量浓度的准确度为 90.20%～
分别为 1.43、3.61、1.85、3.03 min，表明该方法专属性 108.64%（n＝5），日内精密度的 RSD 均小于 6.63%（n＝
良好。 5），日间精密度的RSD均小于8.42%（n＝3）。

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