Page 57 - 《中国药房》2025年20期

HRP免疫组织化学试剂盒孵育相应二抗（稀释比例为1∶ 0.05）；与 MC 组比较，UA-L 组和 UA-H 组大鼠血清及皮
1 000），37 ℃孵育 30 min；再以 3，3′-二氨基联苯胺 肤组织中IL-6、IL-17水平均显著降低，IL-10水平均显著
（DAB）染色，在生物显微镜下观察各组大鼠皮肤组织中 升高（P＜0.05）；与UA-L组比较，UA-H组大鼠血清及皮
Notch1 和 Hes1 蛋白的阳性表达（呈棕色）情况，使用 肤组织中IL-6、IL-17水平均显著降低，IL-10水平显著升
Image J软件定量分析两者的吸光度，并按下式计算其相 高（P＜0.05）；与UA-H组比较，UA-H+Jagged1组大鼠血
对阳性表达量：相对阳性表达量＝实验组蛋白吸光度/ 清及皮肤组织中IL-6、IL-17水平均显著升高，IL-10水平
NC组蛋白吸光度。 均显著降低（P＜0.05）。结果见图2。
2.7.2 免疫印迹法 150 80
取“2.4”项下各组大鼠冻存的皮肤组织，加入 RIPA 100 （ pg/mL ） 60
裂解液，研磨，于4 ℃下以1 000×g离心20 min，提取总 （ pg/mL ） 40
蛋白；以BCA法测定蛋白浓度，再用沸水浴进行变性处 IL-6/ 50 IL-17/ 20
理。取变性蛋白适量，经电泳分离、转膜后，以 3% 牛血 0 0
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
清白蛋白封闭；分别加入 Notch1、Hes1、β-actin 一抗（稀 A.血清IL-6 B.血清IL-17
释比例分别为 1∶1 000、1∶1 000、1∶5 000），4 ℃孵育过 60 150
夜；洗膜后，加入相应二抗（稀释比例为1∶10 000），室温孵 （ pg/mL ） 40 （ pg/mL ） 100
育1 h；洗膜后，以化学发光试剂显色、成像。使用 Image J 20 IL-6/ 50
软件对蛋白条带的灰度值进行分析，以目的蛋白与内参 IL-10/
0 0
蛋白（β-actin）的灰度值比值作为目的蛋白的表达量。 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
2.8 统计学方法 C.血清IL-10 D.皮肤组织IL-6
60 50
采用SPSS 24.0软件对数据进行统计分析。计量资 40
料以 x±s 表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一 （ pg/mL ） 40 （ pg/mL ） 30
步两两比较采用LSD-t检验。检验水准α＝0.05。 IL-17/ 20 IL-10/ 20
3 结果 0 10 0
3.1 各组大鼠皮炎评分比较 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
E.皮肤组织IL-17 F.皮肤组织IL-10
NC 组、MC 组、UA-L 组、UA-H 组和 UA-H+Jagged1 Ⅰ：NC组；Ⅱ：MC组；Ⅲ：UA-L组；Ⅳ：UA-H组；Ⅴ：UA-H+Jagged1
组 大 鼠 的 皮 炎 评 分 分 别 为 0、（6.30±0.60）、（4.50± 组；a：与NC组比较，P＜0.05；b：与MC组比较，P＜0.05；c：与UA-L组比
0.40）、（2.80±0.20）、（6.10±0.50）分（n＝10）。与 NC 组 较，P＜0.05；d：与UA-H组比较，P＜0.05。
比较，MC 组大鼠激发区皮肤出现丘疹、明显肿胀及红 图2 各组大鼠血清及皮肤组织中炎症因子水平比较
斑，并伴有烦躁不安和搔抓行为，皮炎评分显著升高 （x±s，n＝10）
（P＜0.05）；与MC组比较，UA-L组和UA-H组大鼠上述 3.3 各组大鼠皮肤组织病理形态比较
症状均有不同程度减轻，皮炎评分均显著降低（P＜0.05）； NC 组大鼠皮肤组织形态正常，无病理损伤；MC 组
与 UA-L 组比较，UA-H 组大鼠皮炎评分显著降低（P＜ 大鼠皮肤组织存在严重病理损伤，表现为表皮结痂坏
0.05）；与UA-H组比较，UA-H+Jagged1组大鼠上述症状 死、真皮层损伤严重，并可见大量炎症细胞浸润并累及
明显加重，皮炎评分显著升高（P＜0.05）。结果见图1。 皮下组织；与 MC 组比较，UA-L 组和 UA-H 组大鼠皮肤
组织病理损伤均有不同程度减轻，且 UA-H 组大鼠皮肤
组织病理损伤的改善更明显；与 UA-H 组比较，UA-H+
Jagged1组大鼠皮肤组织病理损伤加重。结果见图3。
3.4 各组大鼠皮肤组织中 Notch1 和 Hes1 蛋白表达
比较
与NC组比较，MC组大鼠皮肤组织中Notch1、Hes1
蛋白的表达均显著上调（P＜0.05）；与MC组比较，UA-L
组和UA-H组大鼠皮肤组织中Notch1、Hes1蛋白的表达
A. NC组 B. MC组 C. UA-L组 D. UA-H组 E. UA-H+ 均显著下调（P＜0.05）；与UA-L组比较，UA-H组大鼠皮
Jagged1组 肤组织中 Notch1、Hes1 蛋白的表达均显著下调（P＜
图1 各组大鼠皮肤状态的观察图
0.05）；与UA-H组比较，UA-H+Jagged1组大鼠皮肤组织
3.2 各组大鼠血清及皮肤组织中炎症因子水平比较 中 Notch1、Hes1 蛋白的表达均显著上调（P＜0.05）。免
与 NC 组比较，MC 组大鼠血清及皮肤组织中 IL-6、 疫组化法结果见图 4 和图 5，免疫印迹法结果见图 6
IL-17 水平均显著升高，IL-10 水平均显著降低（P＜ 和图7。

中国药房 2025年第36卷第20期 China Pharmacy 2025 Vol. 36 No. 20 · 2539 ·