Page 56 - 《中国药房》2025年20期
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          的皮炎症状 。但该成分在ACD领域的研究有限，分子                           头部的 2 cm×3 cm 区域及靠近尾部的 4 cm×4 cm 区
          机制也未阐明。Notch1/毛状分裂增强子1（hairy and en‐                域。首先，在靠近头部的脱毛区域（致敏区）单次涂抹含
          hancer of split 1，Hes1）信号通路能够促进活性氧及炎症               7%DNCB的丙酮溶液进行致敏，2周后在靠近尾部的脱
          因子的产生；阻断该通路可调控T淋巴细胞的活化及分                            毛区域（激发区）单次涂抹含 0.1%DNCB 的丙酮溶液进
          化，减轻机体免疫炎症反应，从而改善银屑病小鼠的皮                            行激发。当大鼠背部激发区皮肤出现丘疹、明显肿胀及
                [4]
          肤炎症 ；上调该通路则可加重接触性皮炎的相关症                             红斑，并伴有烦躁不安和搔抓行为时，表明ACD大鼠模
          状 。此外，有研究证实，熊果酸可通过抑制该通路来改                           型构建成功。
            [5]
                                          [6]
          善糖尿病肾病足细胞的有丝分裂障碍 。由此本课题组                            2.2 分组与给药
          推测，熊果酸可能通过调控 Notch1/Hes1 信号通路来影                         将建模成功的40只大鼠随机分为模型组（MC组）、
          响 ACD 的疾病进展。为了验证上述推测，本研究基于                          熊果酸低剂量组（UA-L组）、熊果酸高剂量组（UA-H组）
          Notch1/Hes1 信号通路，初步探索熊果酸对 ACD 大鼠血                   和熊果酸高剂量+Notch1激动剂组（UA-H+Jagged1组），
          清、皮肤组织中炎症因子的影响及对皮肤炎症的改善作                            每组 10 只。另选 10 只背部仅有 2 处脱毛区域的正常大
          用，旨在为ACD的临床治疗提供参考。                                  鼠作为正常对照组（NC组）。UA-L组和UA-H组大鼠分
          1 材料                                                别按50、100 mg/kg的剂量灌胃熊果酸药液（溶剂为生理
                                                                   [8]
          1.1 主要仪器                                            盐水） ，同时按 10 mL/kg 的量腹腔注射生理盐水；UA-
              Multiskan FC型酶标仪购自赛默飞世尔科技（中国）                   H+Jagged1 组大鼠按 50 ng/kg 的剂量腹腔注射 Jagged1
                                                                                       [9]
          有限公司；Mini-PROTEAN 型蛋白电泳系统、Chemi‐                    药液（溶剂为生理盐水）2 h 后 ，再按 100 mg/kg 的剂量
             TM
          Doc  XRS 型凝胶成像系统、Trans-Blot Turbo 全能型蛋              灌胃熊果酸药液；MC 组和 NC 组大鼠灌胃并腹腔注射
          白转印系统均购自美国 Bio-Rad 公司；RM2245 型病理                    等体积生理盐水。各组大鼠每天干预1次，连续14 d。
          切 片 机 、HistoCoreArcadia 型 石 蜡 包 埋 机 、DM4000B        2.3 大鼠皮炎评分
          LED型生物显微镜均购自德国Leica公司。                                  末次给药后 24 h，观察各组大鼠的皮肤炎症状态，
          1.2 主要药品与试剂                                         并采用双盲法对其背部皮肤进行皮炎评分。该评分涉
              熊果酸对照品（批号 110742-201622，纯度≥98%）购                及4个项目，分别为红斑/出血、干燥/结痂、水肿、溃烂/表
          自南京森贝伽生物科技有限公司；Notch1激动剂Jagged1                     皮脱落；每个项目根据严重程度分为严重、中度、轻度、
          的对照品（批号188-204，纯度99.39%）购自美国MedChem-                无症状4个等级，分别记3、2、1、0分；各项评分的总和即
                                                                        [10]
          Express公司；2，4-二硝基氯苯（DNCB，批号138630）购自                为皮炎评分 。
          上海北诺生物科技有限公司；苏木精-伊红（HE）染色试剂                         2.4 大鼠标本采集
          盒、BCA法总蛋白定量试剂盒、高强度RIPA裂解液（批号                            皮炎评分结束后，以乙醚吸入麻醉各组大鼠，断尾
          分别为 D006-1-1、A045-4-2、W062-1-1）均购自南京建成              采血。血样于 4 ℃下以 448×g 离心 15 min，取上清液
          生物工程研究所；大鼠 IL-6、IL-10 酶联免疫吸附测定                     （血清），于－80 ℃下保存，备用。然后，剪下大鼠靠近尾
         （ELISA）试剂盒，兔抗Notch1、β-肌动蛋白（β-actin）、Hes1             部脱毛区域的皮肤组织，精密称取 0.4 g，加入生理盐水
          抗体以及辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔免疫球蛋                          研磨，于4 ℃下1 000×g离心20 min，吸取上清液，即得
          白 G 二抗（批号分别为 ab234570、ab214566、ab27526、             皮肤组织样品液，于－80 ℃下保存，备用；另取该区域皮
          ab8227、ab108937、ab6721）均购自英国Abcam公司；大鼠              肤组织约0.4 g，于液氮中冻存，备用；取该区域剩余皮肤
          IL-17 ELISA试剂盒（批号JL20879-48T）购自江莱生物科                组织，固定在10%甲醛溶液中，备用。
          技有限公司；HRP免疫组织化学试剂盒（批号E670018）购                      2.5 大鼠血清及皮肤组织中炎症因子水平的检测
          自生工生物工程（上海）股份有限公司。                                      取“2.4”项下各组大鼠的血清及皮肤组织样品液适
          1.3 实验动物                                            量，按ELISA试剂盒说明书操作，以酶标仪检测其中IL-
              雄性 SD 大鼠，SPF 级，体重 210～235 g，6～7 周龄，             6、IL-17、IL-10水平。
          由湖北贝恩特生物科技有限公司提供，生产许可证号为                            2.6 大鼠皮肤组织病理形态学观察
          SCXK（鄂）2021-0027。所有大鼠均在通风良好的屏障                          取“2.4”项下在 10% 甲醛溶液中固定的各组大鼠皮
          环境（温度23～25 ℃、相对湿度50%～60%、12 h明暗交                    肤组织，以乙醇梯度脱水、石蜡包埋后连续切片；切片经
          替的动物房）内分笼饲养，并自由摄食、饮水。本实验经                           二甲苯脱蜡、乙醇梯度水化、清洗后进行 HE 染色，使用
          湖北贝恩特生物科技有限公司动物伦理委员会批准（批                            生物显微镜观察各组大鼠皮肤组织的病理形态。
          准号BNT-2022-1169）。                                   2.7 大鼠皮肤组织中Notch1和Hes1蛋白表达的检测
          2 方法                                                2.7.1 免疫组化法
          2.1 造模                                                  取“2.6”项下各组大鼠的皮肤组织切片，经脱蜡、水
                             [7]
              按相关文献方法 建立 ACD 大鼠模型：SD 大鼠适                      化后以 5% 牛血清白蛋白封闭，分别加入 Notch1、Hes1
          应性喂养1周后，在背部选择2处脱毛区域，分别为靠近                           一抗（稀释比例均为 1∶100），4 ℃孵育过夜；洗片后，以


          · 2538 ·    China Pharmacy  2025 Vol. 36  No. 20                            中国药房  2025年第36卷第20期
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